LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A UNOS ACIDOS NUCLEICOS QUE CODIFICAN VARIAS PROTEINAS DE MONOCITOS DE PRIMATE,

REACTIVOS ASOCIADOS CON ESTOS ACIDOS NUCLEICOS, INCLUYENDO ANTICUERPOS ESPECIFICOS Y PROTEINAS PURIFICADAS. ESTA INVENCION SE REFIERE TAMBIEN A UNOS PROCEDIMIENTOS DE USO DE DICHOS REACTIVOS E INSTRUMENTACION DE DIAGNOSTICO ASOCIADAS

Genes encontrados de células monocíticas de mamíferos; reactivos relacionados.

Campo de la invención

La presente invención contempla composiciones relacionadas con genes encontrados en las células monocíticas, células que funcionan en el sistema inmune. Estos genes funcionan controlando el desarrollo, la diferenciación y/o la fisiología del sistema inmune de los mamíferos. En particular, la solicitud proporciona ácidos nucleicos, proteínas, anticuerpos y métodos de utilización de los mismos.

Antecedentes de la invención

El componente circulante del sistema circulatorio de los mamíferos comprende varios tipos celulares, incluyendo los glóbulos rojos y los glóbulos blancos sanguíneos de los linajes celulares eritroide y mieloide. Ver, por ejemplo, Rapaport (1987), Introduction to Hematology (2ª ed.) Lippincott, Philadelphia, PA; Jandl (1987), Blood: Textbook of Hematology. Little, Brown and Co., Boston, MA; y Paul (ed.) (1993), Fundamental Immunology (3ª ed.) Raven Press, N.Y.

Los monocitos son células fagocíticas que pertenecen al sistema de fagocitos mononucleares y residen en la circulación. Ver Roitt (ed.) Encyclopedia of Immunology, Academic Press, San Diego. Estas células se originan en la médula ósea y permanecen solamente un tiempo corto en el compartimento medular una vez que se diferencian. Entran entonces en la circulación y pueden permanecer allí durante un periodo de tiempo relativamente largo, por ejemplo unos cuantos días. Los monocitos pueden entrar en los tejidos y en las cavidades corporales mediante el proceso denominado diapédesis, donde se diferencian a macrófagos y posiblemente a células dendríticas. En una respuesta inflamatoria, el número de monocitos en la circulación puede duplicarse, y muchos de este número incrementado de monocitos diapedizar al lugar de la inflamación.

La presentación del antígeno se refiere a los acontecimientos celulares en los cuales un antígeno proteináceo es captado, procesado por las células presentadoras de antígeno (CPA) y posteriormente reconocido para iniciar una respuesta inmune. Las células presentadoras de antígeno más activas han sido caracterizadas como los macrófagos, que son productos procedentes del desarrollo directo de los monocitos; las células dendríticas y ciertas células B.

Los macrófagos se encuentran en la mayor parte de los tejidos y son muy activos en la internalización de una amplia variedad de antígenos proteicos y microorganismos. Tienen una actividad endocítica muy desarrollada y secretan muchos productos importantes en el inicio de la respuesta inmune. Por esta razón, se cree que es probable que muchos genes expresados por los monocitos o inducidos por la activación de los monocitos sean importantes en la captación, el procesamiento y la presentación del antígeno o en la regulación de la respuesta inmune resultante.

Sin embargo, los monocitos están poco caracterizados, en términos de las proteínas que expresan y en términos de muchas de sus funciones y mecanismos de acción, incluyendo sus estados activados. En particular, los procesos y mecanismos relacionados con el inicio de la respuesta inmune, incluyendo el procesamiento y la presentación del antígeno, permanecen poco claros. La ausencia de conocimiento sobre las propiedades estructurales, biológicas y fisiológicas de estas células limita su comprensión. Por tanto, condiciones médicas en las cuales la regulación, el desarrollo o la fisiología de las células presentadoras de antígeno es inusual, permanecen difíciles de controlar.

La descripción completa se refiere a varias proteínas y por tanto se ha utilizado la denominación "proteína monocítica". Sin embargo, se comprenderá que la invención está dirigida a YE01 según se define en las reivindicaciones adjuntas.

Más específicamente, las células destructoras naturales ("Natural Killer") son capaces de lisar células transformadas e infectadas por virus. Las interacciones moleculares que desencadenan sus funciones citocílitas no se comprenden bien. En la técnica anterior, se han identificado receptores de inhibidores de las células destructoras que son miembros de la superfamilia de las inmunoglobulinas (Colonna y Samaridis (1995), Science 2 68:405-408). Existe la necesidad de identificar los factores implicados en este mecanismo.

Resumen de la invención

Para identificar las moléculas que están implicadas en la generación de señales negativas, se inmunizaron ratones con un clon de células NK humanas y los anticuerpos fueron sometidos a selección por su capacidad para inhibir, cuando se unían de manera cruzada, la lisis mediada por células NK de ciertas dianas. Como resultado se identificó el anticuerpo DX26.

DX26 reconoce también un receptor presente en células NK en reposo, denominado DLAIR (receptor similar a inmunoglobulina asociado a leucocitos 1). El gen que codifica una proteína que es reconocida por DX26 ha sido clonado y denominado YE01. El producto del gen YE01 es un receptor similar a Fc gamma/alfa.

Por tanto, la presente invención proporciona una proteína o péptido YE01 sustancialmente puro o recombinante que presenta al menos un 80% de identidad de secuencia con la secuencia de aminoácidos completa de la SEC ID Nº: 6, 8 ó 10; con una secuencia natural YE01 de la SEC ID Nº: 6, 8 ó 10; o con una proteína de fusión que contiene la secuencia de YE01 y una proteína heteróloga.

Las secuencias de aminoácidos de las SEC ID N^os: 6 y 8 son idénticas. Por tanto, para evitar la duplicación de identificadores de secuencias, únicamente se hace referencia a la SEC ID Nº: 6 en las exposiciones de la presente.

Según se describe en la presente, la proteína sustancialmente pura o aislada contiene un segmento que presenta identidad de secuencia con la porción correspondiente de YE01, donde: la homología es al menos un 90% de identidad aproximadamente y la porción es de al menos 9 aminoácidos aproximadamente; la homología es al menos un 80% de identidad aproximadamente y la porción es de al menos 17 aminoácidos aproximadamente; o la homología es al menos un 70% de identidad aproximadamente y la porción es de al menos 25 aminoácidos aproximadamente. En otras formas, la invención proporciona tal composición en cuestión, donde: YE01 comprende una secuencia madura de SEC ID Nº: 6 ó 10. La proteína o péptido puede proceder de un animal de sangre caliente seleccionado de un mamífero, incluyendo un primate o un roedor. La invención se refiere también a una proteína o polipéptido que contiene al menos un segmento polipeptídico de la SEC ID Nº: 6 ó 10; presenta una pluralidad de porciones que muestran la identidad; es una variante alélica natural de YE01; tiene una longitud de al menos 30 aminoácidos aproximadamente; presenta al menos dos epítopos no solapantes que son específicos para la YE01 de mamífero; presenta una identidad de secuencia de al menos un 90% aproximadamente a lo largo de una longitud de al menos 20 aminoácidos aproximadamente con una YE01 de roedor; presenta al menos dos epítopos no solapantes que son específicos de una YE01 de primate; presenta una identidad de secuencia de al menos un 90% aproximadamente a lo largo de una longitud de al menos 20 aminoácidos aproximadamente con una YE01 de primate; está glucosilada; tiene un peso molecular de al menos 7 kD con glucosilación natural; es un polipéptido sintético; está unida a un sustrato sólido; está conjugada a otro resto químico; es una sustitución de 5 veces o menos de la secuencia natural; o es una variante por delección o inserción de una secuencia natural.

Otras composiciones incluyen aquellas que comprenden: una proteína o péptido YE01 estéril; la proteína o péptido YE01 y un vehículo, donde el vehículo es: un compuesto acuoso incluyendo agua, solución salina y/o un tampón; y/o formulada para administración oral, rectal, nasal, tópica o parenteral.

En las realizaciones de proteínas de fusión, la invención proporciona aquéllas que comprenden: la secuencia de la proteína madura de SEC ID Nº: 10; una marca para detección o purificación, incluyendo una secuencia FLAG, His6 o Ig; o la secuencia de otra proteína de la superficie celular.

En la presente se describen varios kits que incluyen aquéllos que contienen una proteína o polipéptido y un compartimento que contiene la proteína o el polipéptido; y/o instrucciones para la utilización o la eliminación de los reactivos del kit.

Anticuerpos y compuestos de unión incluyen aquéllos que comprenden la porción de unión al antígeno...

1. Un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende una secuencia de aminoácidos al menos un 80% idéntica a la secuencia de aminoácidos completa mostrada en la SEC ID Nº: 6 o en la SEC ID Nº: 10, que se caracteriza porque comparte similitud inmunogénica o antigénica o reactividad cruzada con una secuencia correspondiente en la SEC ID Nº: 6 o en la SEC ID Nº: 10.

2. Un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende la secuencia de aminoácidos madura de la SEC ID Nº: 6.

3. Un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende la secuencia de aminoácidos madura de la SEC ID Nº: 10.

4. Un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 6.

5. Un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 10.

6. Una proteína de fusión que contiene el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y una proteína heteróloga.

7. La proteína de fusión de la reivindicación 6, en la que la proteína heteróloga es una marca para detección o purificación.

8. Una composición que contiene la proteína de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y un vehículo.

9. Un ácido nucleico aislado que codifica el polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

10. Un ácido nucleico de la reivindicación 9, que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consta de:

nucleótidos 155-1015 de la SEC ID Nº: 5;

nucleótidos 69-929 de la SEC ID Nº: 7;

nucleótidos 24-428 de la SEC ID Nº: 9; y

nucleótidos 87-428 de la SEC ID Nº: 9.

11. Un ácido nucleico aislado de la reivindicación 9, que comprende una secuencia de nucleótidos seleccionada del grupo que consta de las SEC ID N^os: 5, 7 y 9.

12. Un ácido nucleico aislado que codifica una proteína de fusión que comprende un ácido nucleico de la reivindicación 9 y un ácido nucleico que codifica una proteína heteróloga.

13. El ácido nucleico de la reivindicación 12, en el que la proteína heteróloga es una marca para detección o una marca para purificación.

14. Un vector de expresión que contiene el ácido nucleico de la reivindicación 9.

15. Una célula huésped que contiene el vector de la reivindicación 14.

16. Un anticuerpo aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo que se une especificamente a un polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

17. Un anticuerpo aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo de la reivindicación 16, el cual es un anticuerpo monoclonal que se une especificamente a un polipéptido que contiene una secuencia de aminoácidos seleccionada de las SEC ID N^os: 6 y 10.

18. Un anticuerpo monoclonal aislado de la reivindicación 17, que se une especificamente a un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº: 6.

19. Una composición farmacéutica que contiene un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 16 ó 17 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

20. Un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 16 ó 17, que comprende un anticuerpo monoclonal, un fragmento Fab, un fragmento F(ab')₂ o un anticuerpo de una sola cadena.

21. Una composición que contiene:

22. Un kit que comprende:

23. Un anticuerpo aislado o un fragmento de unión al antígeno del mismo que se une especificamente a un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, para el tratamiento de una enfermedad o condición médica seleccionada de una respuesta autoinmune, el rechazo de un trasplante y una condición inflamatoria.

24. Utilización de un anticuerpo aislado o de un fragmento de unión al antígeno del mismo que se une específicamente a un polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o condición médica seleccionada de una respuesta autoinmune, el rechazo de un trasplante y una condición inflamatoria.

25. Un proceso para producir recombinantemente un polipéptido que comprende el cultivo de la células huésped de la reivindicación 15 bajo condiciones en las cuales el polipéptido es expresado.

26. Un método para inhibir la destrucción celular por una célula NK in vitro, que comprende la puesta en contacto de la célula NK con un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 16 ó 17, donde dicho anticuerpo o fragmento inhibe YE01 (DLAIR-1).

27. Un método para obtener un anticuerpo que se una especificamente a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que contiene al menos un 80% de identidad de secuencias con la SEC ID Nº: 6 ó 10, que comprende la inmunización de un animal capaz de producir dicho anticuerpo con dicho polipéptido y el aislamiento del anticuerpo del animal.