ANTICUERPOS PARA IL-17A.

La invención se refiere generalmente a compuestos de unión específica a IL-17A, tales como anticuerpos, y a usos de los mismos. Más específicamente, en este documento se desvelan anticuerpos quiméricos y humanizados que reconocen IL-17A humana y modulan su actividad, particularmente en trastornos inflamatorios, autoinmunes y proliferativos. Antecedentes de la invención El sistema inmunitario funciona para proteger a los individuos de agentes infecciosos, por ejemplo, bacterias, organismos multicelulares y virus, además de cánceres. Este sistema incluye varios tipos de células linfoides y mieloides tales como monocitos, macrófagos, células dendríticas (CD), eosinófilos, linfocitos T, linfocitos B y neutrófilos. Estas células linfoides y mieloides producen frecuentemente proteínas de señalización conocidas como citocinas. La respuesta inmunitaria incluye inflamación, es decir, la acumulación de células inmunitarias sistémicamente o en una localización particular del cuerpo. En respuesta a un agente infeccioso o sustancia extraña, las células inmunitarias secretan citocinas que, a su vez, modulan la proliferación, desarrollo, diferenciación o migración de células inmunitarias. La respuesta inmunitaria puede producir consecuencias patológicas, por ejemplo, cuando implica inflamación excesiva, como en los trastornos autoinmunes (véase, por ejemplo, Abbas y col. (eds.) (2000) Cellular and Molecular Immunology, W.B. Saunders Co., Philadelphia, PA; Oppenheim y Feldmann (eds.) (2001) Cytokine Reference, Academic Press, San Diego, CA; von Andrian and Mackay (2000) New Engl. J. Med. 343:1020-1034; Davidson y Diamond (2001) New Engl. J. Med. 345:340-350). La interleucina 17A (IL-17A; también conocida como antígeno 8 asociado a linfocitos T citotóxicos (CTLA8), IL-17) es una citocina homodimérica producida por linfocitos T de memoria tras el reconocimiento de antígenos. El desarrollo de tales linfocitos T es promovido por la interleucina 23 (IL-23). McKenzie y col. (2006) Trends Immunol. 27(1): 17- 23; Langrish y col. (2005) J. Exp. Med. 201(2):233-40. La IL-17A actúa por dos receptores, IL-17RA y IL-17RC, para inducir la producción de numerosas moléculas que participan en la biología de los neutrófilos, inflamación y destrucción de órganos. Esta citocina sinergiza con el factor de necrosis tisular (TNF) y o interleucina 1ß (IL-1ß) para promover un mayor entorno pro-inflamatorio. Se ha propuesto antagonizar la actividad de IL-17A con anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de anticuerpos para el tratamiento de una variedad de trastornos inflamatorios, inmunitarios y proliferativos que incluyen artritis reumatoide (AR), osteoartritis, osteoporosis por artritis reumatoide, fibrosis inflamatoria (por ejemplo, esclerodermia, fibrosis pulmonar y cirrosis), gingivitis, periodontitis u otras enfermedades periodontales inflamatorias, trastornos inflamatorios del intestino (por ejemplo, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa y enfermedad inflamatoria del intestino), asma (incluyendo asma alérgico), alergias, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), esclerosis múltiple, psoriasis y cáncer (véanse, por ejemplo, los documentos US 2003/0166862, WO 2005/108616, WO 2005/051422 y WO 2006/013107). El documento WO 2004/106377 desvela anticuerpos anti-IL17 humana producidos en ratas. El anticuerpo descrito en el documento WO 2004/106377 tiene la afinidad de unión de KD 15,1 pM y anula potentemente la producción de IL6 inducida por IL17 en fibroblastos 3T3. La limitación más significativa en el uso de anticuerpos como agente terapéutico in vivo es la inmunogenicidad de los anticuerpos. Como la mayoría de los anticuerpos monoclonales se derivan de roedores, el uso repetido en seres humanos produce la generación de una respuesta inmunitaria contra el anticuerpo terapéutico, por ejemplo, anticuerpos humanos contra ratón o HAMA. Una respuesta inmunitaria tal produce una pérdida de eficacia terapéutica a un mínimo y una respuesta anafiláctica potencialmente mortal a un máximo. Los esfuerzos iniciales para reducir la inmunogenicidad de anticuerpos de roedor implicaron la producción de anticuerpos quiméricos, en los que regiones variables de ratón (Fv) se fusionaron con regiones constantes humanas. Liu y col. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:3439-43. Sin embargo, los ratones inyectados con híbridos de regiones variables humanas y regiones constantes de ratón desarrollan una fuerte respuesta anti-anticuerpo dirigida contra la región variable humana, sugiriendo que la retención de la región Fv de roedor completa en tales anticuerpos quiméricos puede todavía producir inmunogenicidad no deseada en pacientes. Generalmente se cree que los bucles de la región determinante de la complementariedad (CDR) de dominios variables comprenden el sitio de unión de moléculas de anticuerpo. Por tanto, se ha intentado injertar bucles de CDR de roedor en regiones estructurales humanas (es decir, humanización) para minimizar adicionalmente las secuencias de roedor. Jones y col. (1986) Nature 321:522; Verhoeyen y col. (1988) Science 239: 1534. Sin embargo, los intercambios de bucles de CDR todavía no producen uniformemente un anticuerpo con las mismas propiedades de unión que el anticuerpo de origen. Frecuentemente también se requieren cambios en los residuos de la región estructural (FR), residuos que participan en el soporte del bucle de CDR, en anticuerpos humanizados para preservar la afinidad de unión a antígeno. Kabat y col. (1991) J. Immunol. 147:1709. Aunque se ha informado del uso de injerto de CDR y preservación de los residuos de la región estructural en varias construcciones de anticuerpos humanizados, es difícil predecir si una secuencia particular producirá el anticuerpo con las propiedades de unión deseadas, y algunas veces biológicas. Véase, por ejemplo, Queen y col. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2   86:10029, Gorman y col. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:4181, y Hodgson (1991) Biotechnology (NY) 9:421-5. Además, la mayoría de los estudios anteriores usaron diferentes secuencias humanas para secuencias variables ligeras y pesadas de animales, siendo cuestionable la naturaleza predictiva de tales estudios. Se han usado secuencias de anticuerpos conocidos o, más normalmente, aquellas de anticuerpos que tienen estructuras cristalinas por rayos X conocidas tales como anticuerpos NEW y KOL. Véase, por ejemplo, Jones y col., arriba; Verhoeyen y col., arriba; y Gorman y col., arriba. La información exacta de secuencias se ha informado para algunas construcciones humanizadas. Existe la necesidad de antagonistas de IL-17A tales como anticuerpos monoclonales anti-IL-17A para su uso en el tratamiento de trastornos humanos tales como trastornos inflamatorios, autoinmunes y proliferativos. Tales antagonistas presentarán preferentemente baja inmunogenicidad en sujetos humanos, permitiendo la administración repetida sin respuestas inmunitarias adversas. Resumen de la invención La invención se refiere a anticuerpos anti-IL-17A humana que tienen una o más propiedades deseables que incluyen altas afinidades de unión, actividades neutralizantes, buena farmacocinética y baja antigenicidad en sujetos humanos. La invención también se refiere al uso de los anticuerpos de la invención en el tratamiento de enfermedad. Por consiguiente, en este documento se describe un compuesto de unión, por ejemplo, una molécula de anticuerpo o fragmento de unión de la misma que se une a IL-17A humana e inhibe su actividad. El compuesto de unión de la presente invención comprende al menos un dominio variable de la cadena ligera (VL) y al menos un dominio variable de la cadena pesada (VH) de anticuerpo, o fragmentos de unión de estos dominios, en los que el dominio VL comprende regiones determinantes de la complementariedad (CDR) que tienen las secuencias de SEC ID Nº: 11-13 y el dominio VH comprende CDR que tienen las secuencias de SEC ID Nº 14, 17 y 20 o SEC ID Nº: 14, 16 y 19. Las secuencias de los dominios VL y VH son las secuencias de SEC ID Nº: 5 y 6, respectivamente. El compuesto de unión a IL-17A descrito en este documento inhibe la actividad de IL-17A humana. La invención proporciona un compuesto de unión que se une a IL-17A humana que tiene dominios VL y VH con al menos el 90% de homología de secuencias con las secuencias de SEC ID Nº: 5 y 6, respectivamente. El compuesto de unión de la presente invención comprende dominios VL y VH que tienen hasta 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 sustituciones de aminoácidos conservativas con referencia a las secuencias de SEC ID Nº: 5 y 6, respectivamente. El compuesto de unión de la invención es un anticuerpo que tiene una cadena ligera y una cadena pesada con hasta 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 sustituciones de aminoácidos conservativas con referencia a las formas maduras de las secuencias de SEC ID Nº: 2... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de unión que se une a IL-17A humana que comprende al menos un región variable de la cadena ligera de anticuerpo, o fragmento de unión de la misma, que tiene las secuencias de CDR CDRL1 a CDRL3 de SEC ID Nº: 11-13; y al menos una región variable de la cadena pesada de anticuerpo, o fragmento de unión de la misma, que tiene las secuencias de CDR CDRH1 a CDRH3 de SEC ID Nº: 14, 17 y 20 o SEC ID Nº: 14, 16 y 19. 2. El compuesto de unión de la reivindicación 1, en el que la región variable de la cadena ligera comprende la secuencia de SEC ID Nº: 5 que tiene hasta diez sustituciones conservativas y en el que la región variable de la cadena pesada comprende la secuencia de SEC ID Nº: 6 que tiene hasta diez sustituciones de aminoácidos conservativas. 3. El compuesto de unión de la reivindicación 2, en el que el compuesto de unión es un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena ligera que comprende SEC ID Nº: 5; y una región variable de la cadena pesada que comprende SEC ID Nº: 6. 4. El compuesto de unión de la reivindicación 1, en el que la cadena ligera consiste en los aminoácidos 1-220 de SEC ID Nº: 2 que tiene hasta diez sustituciones conservativas y la cadena pesada consiste en los aminoácidos 1- 454 de SEC ID Nº: 4 que tiene hasta diez sustituciones conservativas. 5. El compuesto de unión de la reivindicación 4, en el que la cadena ligera consiste en los aminoácidos 1-220 de SEC ID Nº: 2 y la cadena pesada consiste en los aminoácidos 1-454 de SEC ID Nº: 4. 6. El compuesto de unión de la reivindicación 1, en el que el compuesto de unión comprende una región variable de la cadena ligera que tiene al menos el 90% de homología con SEC ID Nº: 5 y una región variable de la cadena pesada que tiene al menos el 90% de homología con SEC ID Nº: 6. 7. El compuesto de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el compuesto de unión es un anticuerpo monoclonal humanizado o completamente humano. 8. El compuesto de unión de la reivindicación 1, que comprende además una región constante de la cadena pesada, en el que la región constante de la cadena pesada comprende una región constante humana de la cadena pesada 1, 2, 3 o 4 o una variante de la misma. 9. El compuesto de unión de la reivindicación 1, que comprende además una región constante de la cadena ligera, en el que la región constante de la cadena ligera comprende una región constante de la cadena ligera humana kappa. 10. El compuesto de unión de la reivindicación 1 ó 2, en el que el compuesto de unión es un fragmento de anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv, F(ab')2 y un diacuerpo. 11. El compuesto de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el compuesto de unión inhibe actividad de IL-17A humana. 12. Un ácido nucleico aislado que codifica el compuesto de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11. 13. Un vector de expresión que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 12 operativamente ligado para controlar secuencias que son reconocidas por una célula huésped cuando la célula huésped se transfecta con el vector. 14. El vector de expresión de la reivindicación 13, en el que el vector de expresión tiene el nº de acceso de ATCC PTA-7675. 15. Una célula huésped que comprende el vector de la reivindicación 14. 16. Un procedimiento de producción de un polipéptido que comprende: (a) cultivar la célula huésped de la reivindicación 15 en medio de cultivo en condiciones en las que la secuencia de ácidos nucleicos se expresa, produciéndose así polipéptidos que comprenden las regiones variables de la cadena ligera y pesada; y (b) recuperar los polipéptidos de la célula huésped o medio de cultivo. 17. El anticuerpo anti-IL-17A humana hu16C10, en el que la secuencia de aminoácidos del anticuerpo está codificada por el vector de expresión de la reivindicación 14. 18. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 que neutraliza la actividad de IL-17A humana y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. 19. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 86   1 a 11 que neutraliza la actividad de IL-17A humana para su uso en el tratamiento de artritis reumatoide. 20. Uso de un compuesto de unión de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 que neutraliza la actividad de IL- 17A humana para la preparación de una composición farmacéutica para tratar artritis reumatoide. 21. La composición farmacéutica de la reivindicación 18 ó 19, o el uso de la reivindicación 20, en la que el compuesto de unión es un anticuerpo monoclonal. 22. La composición farmacéutica de la reivindicación 18 ó 19, o el uso de la reivindicación 20, que comprende además otro agente inmunosupresor o antiinflamatorio. 87   88   89     91   92   93   94     96   97   98