Una composición que incluye una proteína que comprende los aminoácidos 39374 de SEQ ID NO:

2 y un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que dicha proteína no consiste en la proteína de longitud completa codificada por el ADN depositado con el número de registro ATCC209529

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ANTECEDENTES Campo de la Invención

La presente invención se refiere a nuevas moléculas. denominadas LDCAM, capaces de modular o alterar la función de las células T y a composiciones que comprenden dichas moléculas. Más particularmente, la presente invención implica una composición que incluye una proteína que comprende los aminoácidos 39-374 de SEQ ID NO:2 y un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que dicha proteína no consiste en la proteína de longitud completa codificada por el ADN depositado con el número de registro ATCC209529, una composición que incluye una proteína que comprende los aminoácidos 39-374 de SEQ ID NO:2 conjugada con una toxina y una composición que incluye una proteína que comprende los aminoácidos 39-374 de SEQ ID NO:2 para usarse en la inhibición de una respuesta inmune mediada por células T o para la expansión de células asesinas naturales. La invención también incluye polipéptidos LDCAM que comprenden los aminoácidos 1-374 de SEQ ID NO:2 o los aminoácidos 1356 de SEQ ID NO:4 y el ADN que codifica dichas moléculas LDCAM.

Descripción de la Técnica Relacionada

Las moléculas de adhesión desempeñan papeles importantes en la señalización celular en el sistema inmune y en otros sistemas celulares. Además de las señales específicas de antígeno producidas por el complejo receptor de las células T, la forma y el tipo de respuesta inmune por las células T depende de señales coestimuladoras mediadas por las moléculas de adhesión en las células presentadoras de antígeno (APC). Una de dichas señalizaciones coestimuladoras implica las moléculas de adhesión B7-1 (CD80) y B7-2 (CD86) que envían señales importantes a través de sus receptores de la superficie de las células T, CD28 y CTLA4 (CD152). B7-1 interacciona con CD28 para producir la producción de citoquinas, proliferación celular, y la generación de células T efectoras y de memoria. Si se bloquea la señal a través de CD28, puede ocurrir la anergia de las células T o la desviación inmune, lo que resulta en respuestas inmunes muy deprimidas o alteradas.

B7-1 también interacciona con el receptor CTLA4 de las células T. Su señalización es compleja, pero un componente proporciona una señal de retroalimentación negativa que causa que las células T atenúen la señal de CD28. En ausencia de esta señal, la proliferación de las células T y la activación de las células efectoras continúa de manera desenfrenada. Cuando esta regulación de retroalimentación funciona mal, pueden resultar enfermedades autoinmunes y linfoproliferación. Por ejemplo, cuando se bloquea la interacción de CD28 y B7-1 (y B7-2) con un anticuerpo anti-CTLA4, se ha observado una inmunidad tumoral y una linfoproliferación incrementadas.

B7-2, que se expresa en diferentes células y en diferentes estadios de la activación de APC respecto a B7-1, también transmite su señal coestimuladora a las células T a través de CD28 y CTLA4. La señal de B7-2 puede dar lugar a respuestas inmunes que son idénticas a, o diferentes de, las respuestas inmunes que resultan de la señalización de B7-1. La naturaleza de la señalización de B7-2 depende del contexto celular y de la coordinación de la coestimulación.

10 Aunque se unen a los mismos receptores celulares, B7-1 y B7-2 sólo están relacionadas débilmente a nivel de aminoácidos. Ambas, sin embargo, son miembros de la amplia superfamilia que contiene dominio de inmunoglobulina y gran parte de su homología de secuencia compartida se debe a los restos particulares que comparten sus dominios de Ig comunes, que son característicos de la subfamilia del dominio Ig.

15 Existe evidencia para sugerir que otras moléculas de adhesión son importantes en la respuesta de las células T a los antígenos. Por ejemplo, la proliferación de las células T y la producción de citoquinas que ocurre en respuesta a la unión de un receptor de células T con un antígeno puede ocurrir en ausencia de CD28 en determinadas enfermedades. La proliferación y la producción de citoquinas también ocurren en ausencia de CD28 en las respuestas de memoria, y en los sistemas en los que CD28 se ha eliminado genéticamente. En algunos casos, la proliferación de las células T depende de una interacción en los sistemas CD48 o ICAM/LFA. Además, la molécula de adhesión conocida como ALCAM interacciona con su ligando de células T CD6 para modular la señal de CD3.

25 Claramente, la señalización a través de los receptores de la superficie de las células T desempeña un papel importante en el mantenimiento del equilibrio en el sistema inmune. Los sistemas con predominio de señales activadoras, tales como la señalización coestimuladora entre CD28 y B7-1, pueden dar lugar a autoinmunidad e inflamación. Los sistemas inmunes con un predominio de señales inhibidoras, tales como la señalización coestimuladora entre CTLA4 son menos capaces de actuar sobre células infectadas o células cancerosas. El aislamiento de nuevas moléculas implicadas en la señalización de las células T es altamente deseable para estudiar la señal o señales biológicas transducidas a través de sus receptores. Además, la identificación de dichas moléculas proporciona un medio para regular y tratar estados patológicos asociados con la autoinmunidad, inflamación e infección.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención es como se expone en las reivindicaciones.

5 La presente invención proporciona polipéptidos de mamífero, denominados LDCAM, denominados así porque se encuentran en las células dendríticas obtenidas de linfoide y muestran una homología limitada con las moléculas de adhesión, incluyendo B7

1. Las moléculas LDCAM descritas en la presente memoria incluyen proteínas aisladas u homogéneas que se unen a sí mismas, tienen una homología limitada con B7L-1 (descrita en la solicitud en tramitación con la presente S/N 60/095, 663 presentada el 7 de agosto, 1998) y para las que B7-L1 es una proteína de unión. La presente invención incluye además ADN aislados que codifican LDCAM. Además están en la presente invención composiciones farmacéuticas que comprenden formas solubles de moléculas LDCAM y composiciones para usarse en la inhibición de las respuestas inmunes de las células T.

15 También están incluidas las composiciones para usarse en la expansión de células asesinas naturales. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En la presente memoria se proporcionan nuevas proteínas denominadas LDCAM. Además se proporcionan ADN que codifican LDCAM.

20 B7L-1, una molécula que tiene similitud de secuencia con B7-1, descrita en la solicitud en tramitación con la presente S/N 60/095, 663 presentada el 7 de agosto, 1998, es una proteína de unión para los polipéptidos LDCAM de la presente invención. Debido a que B7L-1 es una proteína de unión de LDCAM y a que B7L-1 y LDCAM muestran homología en su dominio intracelular que incluye los sitios de unión potenciales para la banda 4.1 y los miembros de la familia PDZ, y se encuentran en muchos de los mismos tipos celulares, sus formas unidas a las células pueden transmitir señales similares cuando se unen. Así, se denominan co-receptores o contraestructuras. La secuencia de nucleótidos que codifica las formas extracelulares larga y corta de B7L-1 humana se presentan en SEQ ID NO: 7 y SEQ ID NO: 9, respectivamente. Las secuencias de

30 aminoácidos codificadas por las secuencias de nucleótidos de SEQ ID NO: 7 y SEQ ID NO: 9 se muestran en SEQ ID NO: 8 y SEQ ID NO: 10, respectivamente. Para identificar líneas celulares a las que se une B7L-1 y para aislar posteriormente una proteína a la que se une B7L-1, se preparó una proteína de fusión

B7L-1/Fc como se describe en el Ejemplo 1 y se realizaron estudios de unión, descritos en el Ejemplo 2. El Ejemplo 3 describe el cribado de una biblioteca de ADNc preparada a partir de WI-26, una línea celular a la que se une B7L-1 y la identificación de un clon de LDCAM humana de longitud completa. La secuencia de nucleótidos que codifica LDCAM 5 humana, aislada como se describe en el Ejemplo 3, se presenta en SEQ ID NO: 1 y la secuencia de aminoácidos codificada por ésta se presenta en SEQ ID NO: 2. La secuencia de aminoácidos de LDCAM humana codificada descrita en SEQ ID NO: 2 tiene un dominio extracelular predicho de 374 aminoácidos incluyendo una secuencia líder de 38 aminoácidos 1-38; un dominio transmembrana de 21 aminoácidos (375-395) y un

10 dominio...

1. Una composición que incluye una proteína que comprende los aminoácidos 39374 de SEQ ID NO: 2 y un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que dicha proteína no consiste en la proteína de longitud completa codificada por el ADN depositado con el número de registro ATCC209529.

2. Una composición que incluye una proteína que comprende los aminoácidos 39374 de SEQ ID NO: 2 conjugada con una toxina.

3. Una composición que incluye una proteína que comprende los aminoácidos 39

374 de SEQ ID NO: 2 para inhibir una respuesta inmune mediada por células T o para la 10 expansión de células asesinas naturales.

4. La composición de la reivindicación 3, que es para usarse en el tratamiento de una infección viral en un individuo, en la que dicha composición incrementa o genera células asesinas naturales frente a células infectadas por virus.

5. La composición de la reivindicación 3 que es para usarse para matar células 15 tumorales en un individuo.

6. Un polipéptido purificado que comprende la secuencia como se muestra en los aminoácidos 1-374 de SEQ ID NO: 2 o los aminoácidos 1-356 de SEQ ID NO: 4.

7. El polipéptido de la reivindicación 6 que comprende además una etiqueta.

8. El polipéptido de la reivindicación 7, en el que la etiqueta es un radionúclido, un 20 cromóforo o una enzima.

9. Un ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido según la reivindicación 6.