PÉPTIDOS TERAPÉUTICOS QUE COMPRENDEN SECUENCIAS DERIVADAS DE CDR2 O CDR3 DE TREM-1 Y EL USO DE LOS MISMOS PARA INHIBIR SEPSIS.

Polipéptido o derivado, que es capaz de actuar como antagonista de la proteína TREM-1 tal y como se define en SEC ID Nº.

1, que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 20 o al menos 3 aminoácidos de la SEC ID Nº: 21, donde: (a) el polipéptido consiste en: (i) una secuencia contigua de 15 a 29 aminoácidos de SEC ID Nº: 1 o (ii) una secuencia contigua de 15 a 29 aminoácidos de SEC ID Nº: 1 en la que un aminoácido se sustituye de forma conservadora con otro aminoácido; o (b) un polipéptido que consiste en una secuencia de aminoácidos con al menos un 80% de identidad de secuencia a SEC ID Nºs: 16, 17, 18 o 19; y donde los derivados de los polipéptidos de (a) o (b) se modifican por glicosilación, acetilación, pegilación, fosforilación, amidación, o derivatización por grupos de protección/bloqueo conocidos

Péptidos terapéuticos que comprenden secuencias derivadas de CDR2 o CDR3 de TREM-1 y el uso de los mismos para inhibir sepsis.

La presente invención se refiere al campo de inmunología. Más particularmente, la presente invención se refiere a polipéptidos y derivados de los mismos, que son capaces de actuar como antagonistas de la proteína TREM-1, y son útiles en el tratamiento de enfermedades, por ejemplo, sepsis y shock séptico.

La sepsis constituye un consumo significante de recursos de cuidados intensivos y es un problema permanente en la unidad de cuidados intensivos. Se estima que entre 400 000 y 500 000 pacientes son así afectados cada año en EEUU y Europa. Los índices de morbilidad y mortalidad se han mantenido altos a pesar de las mejoras tanto en terapias de apoyo como en terapias antimicrobianas. Los índices de mortalidad varían de 40% para la sepsis leve a 80% en aquellas que sufren de shock séptico y disfunción multiorgánica. La patogénesis de las condiciones se comprende ahora mejor. Una mejor comprensión de la red compleja de los mediadores inmunológicos, inflamatorios y hematológicos puede permitir el desarrollo de terapias nuevas y racionales.

Después de una infección, las respuestas inmunológicas cognitivas e innatas se desarrollan en fases secuenciales que aumentan en especificidad y complejidad, resultando en última instancia en una depuración de agentes infecciosos y una restauración de homeostasis. La respuesta inmunitaria innata sirve como primera línea de ruta de defensa y se inicia en la activación de receptores de reconocimiento de patrones, tales como receptores de tipo Toll (TLRs) (1, 2), por varios patrones moleculares asociados a patógenos (PAMPs) (3). La activación de los TLRs provoca la liberación de grandes cantidades de tales citocinas como TNF-α y IL-1β, que, en el caso de tales infecciones masivas como sepsis, pueden precipitar la herida de tejido y el shock letal (4, 5). A pesar de que los antagonistas de TNF-α y IL-1β aparecen en este contexto como agentes terapéuticos posiblemente interesantes de sepsis, desafortunadamente se ha demostrado una eficacia limitada en ensayos clínicos (6-8). Esto podría ser debido al hecho de que estas citocinas son necesarias para la depuración de infecciones, y que su eliminación permitiría un fatal crecimiento bacteriano (9-11).

Otro receptor implicado en, entre otras cosas, la respuesta a la infección, el receptor activador expresado en células mieloides-1 (TREM-1) es un elemento de una familia de receptores recientemente descubierta, la familia TREM, expresada en la superficie de neutrófilos y un subconjunto de monocitos. Los receptores TREM activan las células de mieloide mediante la asociación con la molécula adaptadora DAP12. El acoplamiento de las TREM-1 ha sido proporcionado para provocar la síntesis de citocinas proinflamatorias en presencia de productos microbianos.

El receptor activador expresado en las células mieloides (TREM)-1 es una molécula de superficie de célula recientemente descubierta que ha sido identificada tanto en humanos como en neutrófilos polimorfonucleares de murina y monocitos maduros (12). Pertenece a la superfamilia de las inmunoglobulinas y activa las vías de señalización de corriente con la ayuda de una proteína adaptadora llamada DAP12 (12-15). Bouchon y colaboradores han mostrado que la expresión de TREM-1 fue inmensamente aumentada en los neutrófilos y los monocitos en presencia de tales bacterias como Pseudomonas aeruginosa o Staphylococcus aureus, tanto en cultivo celular y en muestras de tejido de pacientes con infección (16). Contrastándolas, TREM-1 no fue aumentada en muestras de pacientes con enfermedades inflamatorias no infecciosas tales como la psoriasis, colitis ulcerosa o vasculitis provocada por complejos inmunológicos (16). Por otra parte, cuando TREM-1 se une a su ligando, hay un efecto sinergístico de LPS y una síntesis amplificada de las citocinas proinflamatorias TNF-α y GM-CSF, junto con una inhibición de la producción IL-10 (17). En un modelo de murina de shock séptico inducido por LPS, el bloqueo de la señalización TREM-1 protegió a los animales de la muerte, además resaltaron el papel crucial de esta molécula (13, 16).

Estudios recientes demuestran que TREM-1 juega un papel critico en la respuesta inflamatoria a la infección (véase Bouchon et al. (2000) J. Immunol. 164:4991-4995). La expresión de TREM-1 se aumenta en células mieloides en respuesta tanto a infecciones fúngicas como a infecciones bacterianas en seres humanos. De forma similar, en ratones la inducción del shock mediante el lipopolisacárido (LPS) se asocia a la expresión aumentada del TREM-1. Además, el tratamiento de ratones con una proteína de fusión soluble TREM-1/Ig, como receptor "señuelo", evita que los ratones se mueran debido a LPS o E. coli.

La US 6,420,526 con el título "186 Secreted Proteins" reivindica fragmentos aislados de TREM-1 que contienen al menos 30 aminoácidos contiguos de TREM-1 humana no especificados ni ejemplificados. No hay datos biológicos relacionados con tales fragmentos.

Como se describe en la US2003165875A, las proteínas de fusión entre la región constante de IgG1 humano y el dominio extracelular de TREM-1 de ratón o de TREM-1 humano muestran un efecto contra la endotoxemia en ratones.

Los inventores han encontrado sorprendentemente que los péptidos determinados derivados de la proteína TREM-1 son capaces de actuar como antagonistas de la proteína TREM-1 y por lo tanto tienen aplicaciones en el tratamiento de sepsis y del shock séptico. Los Inventores además demuestran que los mismos péptidos también modulan in vivo la cascada proinflamatoria provocada por la infección, inhibiendo así la hiper-receptividad y la muerte en un modelo animal de sepsis.

Anteriormente, los Inventores han identificado una forma soluble de TREM-1 (sTREM-1) y han observado niveles significantes en muestras de suero de pacientes de shock séptico pero no de controles. Como también se ha descrito aquí los Inventores han investigado su papel putativo en la modulación de la inflamación durante la sepsis (véase Gibot et al. (2004) Ana. Intern. Med. 141(1):9-15 y Gibot et al. (2004) N. Engl. J. Med. 350(5):451-8).

Como se describe en este caso, los Inventores muestran que una forma soluble de TREM-1 (sTREM-1) se libera en la sangre periférica durante agresiones infecciosas en ratones. Los Inventores también confirman que los monocitos son una fuente más importante de sTREM, y muestran que los péptidos sintéticos que imitan una parte del dominio extra-celular de TREM-1 pueden modular la producción de citocina por monocitos activados in vitro.

Los Inventores han observado que sTREM-1 se segrega por los monocitos activados in vitro por LPS, al igual que en el suero de animales implicados en un modelo experimental de shock séptico. Tanto in vitro como in vivo, los péptidos sintéticos que imitan un dominio corto altamente conservado de sTREM-1 atenúan la producción de citocinas por monocitos humanos y protegen a los animales sépticos de la hiper-receptividad y de la muerte. Estos péptidos son eficaces no sólo para prevenir sino también para disminuir los efectos deletéreos de citocinas proinflamatorias. Estos datos demuestran que la modulación in vivo de TREM-1 por péptidos de TREM-1 es una herramienta terapéutica valiosa para el tratamiento de infecciones, por ejemplo sepsis o shock séptico o para el tratamiento de condiciones sépticas.

Por consiguiente, la presente invención proporciona polipéptidos y derivados de los mismos, que son capaces de actuar como antagonistas de la proteína TREM-1, y son útiles en el tratamiento de enfermedades infecciosas, en particular, sepsis y shock séptico o para el tratamiento de condiciones sépticas.

Como se describe en este caso, los Inventores han determinado que diferentes péptidos de la parte extracelular de la proteína TREM-1 (véase la tabla 1), cuyas secuencias incorporadas de "CDR2" y "CDR3" sorprendentemente tienen actividad similar a las proteínas de fusión previamente descritas de la región constante IgG1 y el dominio extracelular de TREM-1 en modelos de sepsis. Estos péptidos también tienen ventajas sobre la proteína particularmente en cuanto a coste de producción se refiere.

Así, en un aspecto la presente invención proporciona polipéptidos o derivados de los mismos, que son capaces de actuar como antagonistas de la proteína TREM-1 tal y... [Seguir leyendo]

1. Polipéptido o derivado, que es capaz de actuar como antagonista de la proteína TREM-1 tal y como se define en SEC ID Nº. 1, que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 20 o al menos 3 aminoácidos de la SEC ID Nº: 21, donde:

(a) el polipéptido consiste en: