(03/05/2017) Procedimiento para detectar y cuantificar recombinación homóloga in vivo analizando formas de GFP recombinantes. Se emplean células de levadura expresando dos versiones de genes GFP (proteína fluorescente verde) con dos localizaciones subcelulares diferentes, una nucleolar y otra citosólica, gracias a la presencia de: a) un gen integrado en el genoma que expresa GFP fusionada a una proteína de localización nucleolar (RPA190) y b) un gen GFP en un plásmido, expresando una proteína GFP citosólica de baja intensidad. Ambas proteínas GFP-recombinantes se identifican in vivo por microscopía de fluorescencia dada su localización sub-celular. La recombinación homóloga entre los genes GFP se cuantifica por la frecuencia de pérdida de las formas nucleolar o citosólica frente al total de las células de un cultivo. Es aplicable…

(05/04/2017) Un método para la síntesis y la recuperación, a partir de una levadura Pichia pastoris, de una proteína de inmunoglobulina heteromultimérica secretada, biológicamente activa, heteróloga (no es de levadura) que se compone de al menos dos cadenas de polipéptidos de subunidades no idénticas; el método se caracteriza por las siguientes etapas: (i) producir una célula o células estables diploides de levadura Pichia pastoris mediante apareamiento o fusión de esferoplastos de células haploides de levadura Pichia pastoris en condiciones de manera que dichos eventos de apareamiento o fusión de esferoplastos resulten en la producción de una célula o células diploides de levadura Pichia pastoris, en donde dicha célula o células diploides de levadura Pichia pastoris…

(09/11/2016) Polipéptido aislado o purificado que tiene una actividad beta-glucosidasa mejorada respecto a la actividad betaglucosidasa de la proteína BGL1 de tipo silvestre (SEQ ID NO: 2), caracterizado por que comprende una secuencia de aminoácidos en la que al menos un aminoácido está modificado respecto a la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2, seleccionándose dicho aminoácido modificado entre las posiciones 225, 238, 240 y 241 de la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 2, y caracterizado por que dicho polipéptido se selecciona del grupo que consiste en - una secuencia de aminoácidos seleccionada entre la SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID…

(28/09/2016) Un método de identificación de un polipéptido heterólogo que tiene actividad enzimática para convertir piruvato o acetaldehído en acetil-CoA en una única etapa de conversión en (el citosol de) una célula de levadura que comprende: - proporcionar una célula de levadura mutada, en la que dicha mutación comprende una inactivación de al menos un gen de la desviación de piruvato deshidrogenasa (PDH), seleccionado de los genes que codifican las enzimas piruvato descarboxilasa (PDC; E.C. 4.1.1.1), acetaldehído deshidrogenasa (ALD; E.C. 1.2.1.3. E.C. 1.2.1.4 o E.C. 1.2.1.5) y acetil-CoA sintetasa (ACS; E.C. 6.2.1.1); - transformar dicha célula de levadura mutada con un vector de expresión que comprende al menos una secuencia de nucleótidos heteróloga operativamente…

(09/12/2015) Procedimiento de integración localizada de por lo menos tres copias de un gen de interés en el genoma de una cepa de Yarrowia que comprende las etapas de: a) puesta en cultivo de una cepa de Yarrowia que comprende por lo menos tres deleciones seleccionadas de entre Ura3-302, Leu2-270, Gut2-744 y Ade2-844, correspondiendo el fenotipo asociado a cada una de estas deleciones a una auxotrofia para dicha cepa, independientemente el uno del otro de estos por lo menos tres genes; b) transformación de dicha cepa de Yarrowia auxótrofa con por lo menos tres vectores recombinantes que comprenden unos marcadores de selección que permiten, para dicha cepa de Yarrowia, la complementación de la auxotrofia resultante de cada una de dichas deleciones, comprendiendo…

(24/11/2015) Procedimiento para producir, en una levadura, un anticuerpo de dominio capaz de formar una unidad de unión a antígeno única y caracterizado por un nivel reducido o ausencia de una variante de anticuerpo de dominio que carece de al menos un enlace disulfuro, que comprende I) aplicar condiciones que promuevan la formación de puentes disulfuro en anticuerpos de dominio, o II) retirar los anticuerpos de dominio que carecen de al menos un puente disulfuro aplicando condiciones seleccionadas de i) unión de anticuerpos de dominio que comprenden grupos tiol libres a grupos reactivos adecuados, opcionalmente en condiciones desnaturalizantes; y ii) cromatografía de alta resolución en fase inversa, o III) una combinación de (I) y (II); en el que las condiciones que promueven la formación de puentes disulfuro se seleccionan de una o más…

(12/11/2015) Método para producción de un polipéptido amidado C-terminal en el cual el método comprende los pasos siguientes a) cultivo de una cepa de levadura que tiene un gen KEX1 no-funcional y que comprende una secuencia de DNA que codifica un polipéptido con un Gly C-terminal en condiciones para expresión del polipéptido en la cepa de levadura, b) α-amidación in vitro del polipéptido expresado del paso a) o directamente en la célula de producción si la célula tiene la maquinaria necesaria para α-amidación in vivo y c) aislamiento y purificación del péptido amidado en el terminal C.

(31/12/2014) Un proceso de fermentación en donde una levadura genéticamente modificada que tiene una alteración de una ruta nativa de la piruvato descarboxilasa (PDC) fermenta un sustrato de fermentación, se mantiene la concentración de oxígeno disuelto en menos del 1% de la cantidad de saturación y se determina la velocidad de incorporación de oxígeno específica durante una fase de producción del proceso de fermentación, y se controla al menos un parámetro operativo en respuesta a la velocidad de incorporación de oxígeno medida.

(26/03/2014) Una célula de levadura diploide modificada genéticamente que comprende: (a) una alteración funcional en al menos un gen de esporulación (b) una alteración funcional en al menos un gen de respuesta a feromonas, en donde el al menos un gen de respuesta a feromonas es diferente del al menos un gen de esporulación; y (c) una secuencia de nucleótidos heteróloga integrada cromosómicamente que codifica una proteína de interés; en donde dicha célula de levadura diploide modificada genéticamente está incapacitada para la esporulación, incapacitada para el emparejamiento endógeno y es homocigota excepto en su alelo de tipo de emparejamiento.

(12/03/2014) Una célula hospedadora que contiene una molécula de ácido nucleico que comprende tres secuencias de ácido nucleico cada una de las cuales codifica un polipéptido de una vía metabólica bacteriana de L-arabinosa, donde las tres secuencias de ácido nucleico son araA (L-arabinosa isomerasa), araB (L-ribuloquinasa) y araD (Lribulosa-5-P-4-epimerasa), donde la secuencia de ácido nucleico para araA se obtiene de Bacillus licheniformis o Clostridium acetobutylicum, y donde la célula hospedadora es una célula fúngica.

(11/12/2013) Método para seleccionar proteínas con propiedades fenotípicas mejoradas con respecto a las de esa proteína detipo silvestre, que comprende las etapas de: transformar las células de levadura con un vector que expresa una proteína a ensayar fusionada a unaproteína de pared celular de levadura, en el que se utiliza la mutagénesis para generar una poblaciónvariegada de mutantes de la proteína a ensayar; marcar dichas células de levadura con un primer marcador, en el que dicho primer marcador se asocia conlas levaduras que expresan dicha proteína a ensayar y no se asocia con las levaduras que no expresan dichaproteína…

(20/11/2013) Una proteasa de tipo mejorado que comprende una secuencia aminoacídica que es al menos un 75 % idéntica ala SEC. ID. Nº 3, dicha proteasa de tipo mejorado tiene al menos una mutación seleccionada de entre el grupo queconsiste en: (A) sustitución de la glutamina correspondiente a la glutamina en la posición 265 de la SEC ID Nº 3 con unaminoácido ácido; y (B) sustitución de la glutamina en la posición 266 de la SEC ID Nº 3 con un aminoácido acido, y en la que dichaproteasa de tipo mejorado tiene actividad coagulante de la leche.

(11/11/2013) Un procedimiento para producir una glicoproteína en una célula huésped de levadura u hongo unicelular o multicelular filamentoso que comprende la etapa de expresar en la célula huésped, un ácido nucleico que codifica una enzima quimérica que comprende: (a) un dominio catalítico de manosidasa capaz de hidrolizar un sustrato oligosacáridos que comprende uno o los dos enlaces glicosídicos Manal 3 y/o Manal,6; condensado con (b) un péptido señal de dirección celular que normalmente no está asociado con el dominio catalítico de (a), en el que dicho péptido señal de dirección celular está dirigido a dicho dominio catalítico de la manosidasa a la ruta secretora…

(20/09/2013) Una cepa de Penicillium productora de cefalosporina que ha adquirido la capacidad de producir cefalosporinasdespués de haber sido transformada con un gen que codifica expandasa, y opcionalmente después de sertransformada además con un gen que codifica hidroxilasa, una hidroxilasa y una acetiltransferasa, o con unahidroxilasa y una acetiltransferasa y una O-carbamoil transferasa, siendo capaz dicho Penicillium de producirderivados N-acilados de 7-ADCA, 7-ADAC, 7-ACA y de ácido 7-amino-3-carbamoil-oximetil-3-cefem-4-carboxílico,respectivamente, caracterizada por que ha sido transformada con un gen CefT heterólogo que codifica una proteínaCefT que es una proteína implicada en el transporte de un compuesto cefalosporínico desde el interior delmicroorganismo productor de…

(05/09/2013) Levadura Saccharomyces cerevisiae modificada que produce niveles inferiores de etanol que levadura de tipo natural en condiciones aerobias y concentraciones de sacáridos de 5 mM o más y que presenta una tasa de crecimiento de al menos el 30% de la de la levadura de tipo natural, conteniendo dicha levadura una secuencia de nucleótidos quimérica (un constructo quimérico) que se transforma de manera estable en el material genético de la levadura, en la que el constructo comprende una secuencia que tiene la forma A-B en la que A es una primera secuencia que comprende las bases de nucleótidos w a x; B es una segunda secuencia que comprende las bases de nucleótidos (x+y) a z; en la que A es de una secuencia de nucleótidos que…

(22/08/2013) Una levadura que comprende una construcción de ADN que comprende al menos una secuencia de ácido nucleico que codifica AFP, siendo dicha levadura capaz de expresar dicha secuencia de ácido nucleico, no estando presente dicha construcción de ADN en la levadura nativa y comprendiendo dicha construcción de ADN, en el orden siguiente: (a) un promotor fuerte activo en la levadura, (b) un codón de iniciación ATG, (c) al menos una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido AFP HPLC12 de tipo III que tiene (i) la secuencia de aminoácidos de AFP HPLC12 de tipo III que se muestra en la Figura 1 o (ii) una secuencia de aminoácidos que tiene una homología de más del 80 % con la secuencia…

(14/08/2013) Una célula de levadura genéticamente modificada que tiene una deleción o alteración de un gen nativo queproduce una enzima que cataliza la conversión de xilosa a xilitol, y una deleción o alteración de un gen de xilitoldeshidrogenasa nativo.

(26/07/2013) Una célula de levadura que comprende un elemento sensor del estrés del retículo endoplasmático (RE)ligado operablemente a un elemento indicador y que comprende un gen exógeno que codifica una proteína queinduce el estrés del RE, donde el elemento sensor del estrés del RE es una secuencia de ADN del elemento derespuesta a la proteína desplegada KAR2.

(02/07/2013) Una biblioteca de células huésped, en donde cada célula huésped comprende: (a) una molécula de la superficie de la célula unida a la superficie de la célula, (b) una molécula adaptadora que comprende un primer sitio de enlazamiento y un segundo sitio de enlazamiento, y (c) una molécula de despliegue que comprende un polipéptido modificado; en donde el primer sitio de enlazamiento se enlaza específicamente con la molécula de la superficie de la célula y no puede enlazarse con la molécula de despliegue y el segundo sitio de enlazamiento se enlaza específicamente con la molécula de despliegue y no puede enlazarse con la molécula…

(03/04/2013) Un procedimiento para producir una glicoproteína en una célula huésped de levadura u hongo unicelular o multicelular filamentoso que comprende la etapa de expresar en la célula huésped, un ácido nucleico que codifica una enzima quimérica que comprende (a) un dominio catalítico de manosidasa III capaz de hidrolizar un sustrato oligosacarídico que comprende un enlace glicosídico Man1,3 y/o un enlace glicosídico Man1,6; fusionado a (b) un péptido señal de dirección celular normalmente no asociado con el dominio catatítico de (a), en el que dicho péptido señal de dirección celular dirige dicho dominio catalítico de manosidasa exógeno a la ruta secretora de la célula huésped, en el que dicha enzima quimérica es capaz de hidrolizar in vivo más del 10% de los enlaces Man -1,3 y/o Man - 1,6 de…

(27/03/2013) Polipéptido, seleccionado del grupo de a. un polipéptido, que es hasta al menos el 80 % idéntico a la secuencia de aminoácidos según la SEQ ID NO: 1y que presenta una función de transporte de pentosa in vitro y/o in vivo, y b. un polipéptido, que es idéntico a la secuencia de aminoácidos según la SEQ ID NO:1 5 y que presenta unafunción de transporte de pentosa in vitro y/o in vivo, siendo la pentosa preferentemente arabinosa, en particular L-arabinosa.

(04/01/2013) Una microvesícula derivada de levadura portadora de factor tisular (FT) que tiene actividad procoagulante que comprende (i) una membrana de levadura y (ii) una proteína factor tisular (FT) o una variante de la misma con actividad procoagulante, en la que una porción de dicha proteína factor tisular (FT) o un fragmento de la misma con actividad procoagulante está integrada en dicha membrana, en donde dicha microvesícula es obtenible mediante un procedimiento que comprende: (a) someter a fermentación un cultivo de células recombinantes de levadura que expresan la proteína FT o un fragmento de la misma con actividad procoagulante en condiciones que permiten la expresión de dicha proteína FT, o fragmento de la misma con actividad procoagulante; (b) sedimentar el producto que resulta de la etapa…

(19/10/2012) Lacasa de alto potencial redox. La presente invención describe la evolución dirigida de una lacasa de alto potencial redox expresada funcionalmente en S. cerevisiae que presenta una alta tasa de producción, una elevada actividad y una gran termoestabilidad. La presente invención se refiere a la secuencia aminoacídica de dicha lacasa y a la secuencia nucleotídica que codifica para dicha lacasa. La lacasa de la invención presenta aplicaciones en diversos sectores: nano-biotecnología, industria papelera, biorremediación, industria textil, industria alimentaria, industria farmacéutica, industria química, etc.

(26/09/2012) Método para obtener alfa-1-antitripsina recombinante (AATr) altamente purificada, con una pureza de laAATr superior al 99% p/p de proteína total, a partir de una composición que incluye AATr y al menos unaimpureza procedente del cultivo celular utilizado para general la AATr, comprendiendo el método: i) cargar una composición que comprende AATr y al menos una impureza en una columna que contieneun material de intercambio aniónico; ii) lavar el material de intercambio aniónico utilizando un tampón A que comprende entre 1 y 80 mM deiones fosfato y entre 0,1 y 50 mM de N-acetilcisteína (NAC); iii) eluir la AATr del material de intercambio aniónico mediante el uso de un gradiente que comienza conuna composición tampón…