Métodos para sintetizar polipéptidos heteromultiméricos en levadura con el uso de una estrategia de apareamiento haploide.

Un método para la síntesis y la recuperación, a partir de una levadura Pichia pastoris,

de una proteína de inmunoglobulina heteromultimérica secretada, biológicamente activa, heteróloga (no es de levadura) que se compone de al menos dos cadenas de polipéptidos de subunidades no idénticas; el método se caracteriza por las siguientes etapas:

(i) producir una célula o células estables diploides de levadura Pichia pastoris mediante apareamiento o fusión de esferoplastos de células haploides de levadura Pichia pastoris en condiciones de manera que dichos eventos de apareamiento o fusión de esferoplastos resulten en la producción de una célula o células diploides de levadura Pichia pastoris, en donde dicha célula o células diploides de levadura Pichia pastoris después de dicho apareamiento o fusión comprenden constructos de expresión que proporcionan la expresión y secreción de al menos dos cadenas polipeptídicas no idénticas que constituyen dicha proteína de inmunoglobulina heteromultimérica completa, y cuyas células estables diploides de levadura Pichia pastoris son capaces del ensamblaje y expresión y secreción prolongadas de dicha proteína de inmunoglobulina heteromultimérica completa en un medio de cultivo que contiene dicha(s) célula(s) de Pichia pastoris cuando dicha célula o células diploides de Pichia pastoris se cultivan bajo condiciones de cultivo adecuadas;

(ii) después de efectuar dicho apareamiento o fusión de esferoplastos, identificar y aislar la célula o células diploides de Pichia pastoris que contienen constructos de expresión que proporcionan la expresión y secreción estables de al menos dos cadenas polipeptídicas no idénticas que constituyen dicha proteína de inmunoglobulina heteromultimérica completa cuando dicha célula o células diploides de levadura Pichia pastoris se cultivan bajo condiciones de cultivo adecuadas;

(iii) cultivar dicha célula o células diploides de Pichia pastoris o su progenie diploide en un medio de cultivo bajo condiciones que resulten en la expresión, ensamblaje y secreción de dicha proteína de inmunoglobulina heteromultimérica biológicamente activa en el medio de cultivo; y

(iv) recuperar la proteína heteromultimérica resultante del medio de cultivo;

en donde dicho apareamiento o fusión de esferoplastos se efectúa mediante el apareamiento o la fusión de una primera célula haploide de levadura Pichia pastoris que contiene un primer constructo de expresión, dicho primer constructo de expresión contiene secuencias de ácidos nucleicos que codifican para la expresión de al menos una subunidad de dicha proteína de inmunoglobulina heteromultimérica completa (intacta), unidas operativamente a un primer promotor de levadura; y una segunda célula haploide de Pichia pastoris que contiene un segundo constructo de expresión, dicho segundo constructo de expresión comprende secuencias de ácidos nucleicos que codifican para la(s) subunidad(es) restante(s) de dicha proteína de inmunoglobulina heteromultimérica, unidas operativamente a un segundo promotor de levadura.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E10183188.

Solicitante: KECK GRADUATE INSTITUTE.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 535 WATSON DRIVE CLAREMONT, CA 91711 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: LATHAM,John, CREGG,JAMES M, LITTON,MARK, SCHATZMANN,RANDALL, TOLSTORUKOV,IIYA I.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.
  • C07K16/28 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
  • C12N15/74 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Vectores o sistemas de expresión especialmente adaptados a huéspedes procariotas distintos a E. coli, p. ej. Lactobacillus, Micromonospora.
  • C12N15/81 C12N 15/00 […] › para levaduras.
  • C12P21/04 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › Péptidos o polipéptidos cíclicos o puenteados, p. ej. bacitracina (ciclados solamente por enlaces — S — S — C12P 21/02).

PDF original: ES-2630224_T3.pdf

 

Patentes similares o relacionadas:

Anticuerpos anti-alfavbeta6 y usos de los mismos, del 13 de Febrero de 2019, de Biogen MA Inc: Un anticuerpo humanizado o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a αvβ6, que comprende: (i) un dominio variable de cadena pesada […]

Daptomicina en forma cristalina y su preparación, del 28 de Noviembre de 2018, de Cubist Pharmaceuticals LLC: Un método de purificación de daptomicina, comprendiendo el método: fermentar Streptomyces roseosporus para obtener un cultivo de fermentación […]

Moléculas de unión a antígeno con afinidad de unión a receptores Fc y función efectora incrementadas, del 9 de Mayo de 2018, de ROCHE GLYCART AG: Anticuerpo anti-CD20 de tipo II humanizado que comprende: (a) una región variable de cadena pesada seleccionada de entre SEC ID nº 62, SEC ID nº 64, SEC ID nº 66, SEC […]

Un procedimiento para producir un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de roedor, del 7 de Febrero de 2018, de REGENERON PHARMACEUTICALS, INC.: Un procedimiento para producir un anticuerpo que comprende una región variable humana y una región constante de roedor, que comprende exponer a estimulación […]

Medio condicionado y composiciones de matriz extracelular de células cultivadas en condiciones hipóxicas, del 24 de Enero de 2018, de Histogen, Inc: Una composición que comprende una o más proteínas embrionarias producidas mediante un método que comprende: cultivar fibroblastos en condiciones hipóxicas durante […]

Producción de proteínas recombinantes utilizando métodos de selección no antibióticos y la incorporación de aminoácidos no naturales en las mismas, del 19 de Julio de 2017, de Pfenex, Inc: Un método para producir un polipéptido recombinante de interés que comprende: a) obtener una población de células auxotróficas para un primer metabolito […]

Moléculas de unión a antígeno con afinidad de unión a receptores Fc y función efectora incrementadas, del 28 de Diciembre de 2016, de ROCHE GLYCART AG: Anticuerpo anti-CD20 de tipo II humanizado que comprende: (a) una región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID nº 32 o una […]

PROCEDIMIENTOS PARA LA INGENIERÍA DE ANTICUERPOS, del 13 de Julio de 2011, de EPITOMICS, INC: Un procedimiento para diseñar un anticuerpo que comprende: identificar una posición tolerante a una variación en un anticuerpo parental: i) comparando […]

Otras patentes de la CIP C12P21/04