Procedimiento para la producción de anticuerpos de dominio.

Procedimiento para producir, en una levadura, un anticuerpo de dominio capaz de formar una unidad de unión a antígeno única y caracterizado por un nivel reducido o ausencia de una variante de anticuerpo de dominio que carece de al menos un enlace disulfuro,

que comprende

I) aplicar condiciones que promuevan la formación de puentes disulfuro en anticuerpos de dominio, o

II) retirar los anticuerpos de dominio que carecen de al menos un puente disulfuro aplicando condiciones seleccionadas de

i) unión de anticuerpos de dominio que comprenden grupos tiol libres a grupos reactivos adecuados,

opcionalmente en condiciones desnaturalizantes; y

ii) cromatografía de alta resolución en fase inversa, o

III) una combinación de (I) y (II);

en el que las condiciones que promueven la formación de puentes disulfuro se seleccionan de una o más de las siguientes:

a) adición de agentes oxidantes, preferiblemente iones metálicos oxidantes, preferiblemente uno o más seleccionados de Cu2+, Fe2+, Fe3+ y Zn2+;

b) potenciación de la expresión de una proteína disulfuro isomerasa (PDI) con una secuencia de control adecuada o aumentando la dosis génica;

c) adaptación de las condiciones de cultivo mediante uno o más seleccionados de los siguientes: rebajar la temperatura de cultivo y/u optimizar el medio de cultivo, mediante uno o más seleccionados de los siguientes: reducción de la alimentación de metanol para hospedadores que requieran una alimentación de metanol, rebaja de la conductividad del medio de cultivo o cualquier combinación de los mismos;

d) replegamiento del anticuerpo de dominio en presencia de tampón rédox, preferiblemente en presencia adicional de desnaturalizante;

e) tratamiento del anticuerpo de dominio por oxigenación, aumento de temperatura, aumento del pH o alta presión, o cualquier combinación de los mismos, y

f) combinaciones de cualquiera de a) a e).

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2010/055916.

Solicitante: ABLYNX N.V.

Nacionalidad solicitante: Bélgica.

Dirección: Technologiepark 21 9052 Ghent-Zwijnaarde BELGICA.

Inventor/es: STANSSENS, PATRICK, LABEUR,CHRISTINE, SCHOTTE,PETER, JONNIAUX,JEAN-LUC, LAUWEREYS,MARC JOZEF.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.
  • C07K16/18 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales animales o humanos.
  • C07K16/28 C07K 16/00 […] › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
  • C12N15/81 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para levaduras.
  • C12P1/02 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 1/00 Preparación de compuestos o de composiciones, no prevista en los grupos C12P 3/00 - C12P 39/00, utilizando microorganismos o enzimas; Procedimientos generales de preparación de compuestos o composiciones que utilizan microorganismos o enzimas. › utilizando hongos.

PDF original: ES-2551854_T3.pdf

 

Ilustración 1 de Procedimiento para la producción de anticuerpos de dominio.
Ilustración 2 de Procedimiento para la producción de anticuerpos de dominio.
Ilustración 3 de Procedimiento para la producción de anticuerpos de dominio.
Ilustración 4 de Procedimiento para la producción de anticuerpos de dominio.
Ver la galería de la patente con 21 ilustraciones.
Procedimiento para la producción de anticuerpos de dominio.

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