Procedimiento de integración localizada de múltiples copias de un gen de interés en una cepa de Yarrowia.

Procedimiento de integración localizada de por lo menos tres copias de un gen de interés en el genoma de una cepa de Yarrowia que comprende las etapas de:



a) puesta en cultivo de una cepa de Yarrowia que comprende por lo menos tres deleciones seleccionadas de entre Ura3-302, Leu2-270, Gut2-744 y Ade2-844, correspondiendo el fenotipo asociado a cada una de estas deleciones a una auxotrofia para dicha cepa, independientemente el uno del otro de estos por lo menos tres genes;

b) transformación de dicha cepa de Yarrowia auxótrofa con por lo menos tres vectores recombinantes que comprenden unos marcadores de selección que permiten, para dicha cepa de Yarrowia, la complementación de la auxotrofia resultante de cada una de dichas deleciones, comprendiendo dichos vectores recombinantes cada uno:

i) la secuencia de dicho gen de interés,

ii) un marcador de selección, y

iii) dos secuencias de ADN que enmarcan la secuencia de dicho gen de interés y dicho marcador de selección, siendo dichas secuencias de ADN homólogas a las secuencias que corresponden a los extremos del sitio de integración localizado en el genoma de dicha cepa de Yarrowia de manera que se permita la integración localizada de dicho vector recombinante por recombinación homóloga;

selección sobre un medio mínimo, de las levaduras que han integrado dichos por lo menos tres vectores recombinantes.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2009/051332.

Solicitante: INSTITUT NATIONAL DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUE.

Nacionalidad solicitante: Francia.

Dirección: 147 Rue de l'Université 75007 Paris FRANCIA.

Inventor/es: NICAUD, JEAN-MARC, FUDALEJ,FRANCK, NEUVEGLISE,CÉCILE, BECKERICH,JEAN-MARIE.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N15/81 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para levaduras.

PDF original: ES-2553383_T3.pdf

 

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Ilustración 2 de Procedimiento de integración localizada de múltiples copias de un gen de interés en una cepa de Yarrowia.
Ilustración 3 de Procedimiento de integración localizada de múltiples copias de un gen de interés en una cepa de Yarrowia.
Ilustración 4 de Procedimiento de integración localizada de múltiples copias de un gen de interés en una cepa de Yarrowia.
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Procedimiento de integración localizada de múltiples copias de un gen de interés en una cepa de Yarrowia.

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