Enzimas productoras de acetil-CoA en levadura.

Un método de identificación de un polipéptido heterólogo que tiene actividad enzimática para convertir piruvato o acetaldehído en acetil-CoA en una única etapa de conversión en (el citosol de) una célula de levadura que comprende:

- proporcionar una célula de levadura mutada, en la que dicha mutación comprende una inactivación de al menos un gen de la desviación de piruvato deshidrogenasa (PDH), seleccionado de los genes que codifican las enzimas piruvato descarboxilasa (PDC; E.C. 4.1.1.1), acetaldehído deshidrogenasa (ALD; E.C. 1.2.1.3. E.C. 1.2.1.4 o E.C. 1.2.1.5) y acetil-CoA sintetasa (ACS; E.C. 6.2.1.1);

- transformar dicha célula de levadura mutada con un vector de expresión que comprende al menos una secuencia de nucleótidos heteróloga operativamente unida a un promotor funcional en levadura y teniendo dicha secuencia de nucleótidos heteróloga que codifica un polipéptido candidato posible actividad enzimática para convertir piruvato o acetaldehído en acetil-CoA;

- probar dicha célula de levadura mutada recombinante para su capacidad para crecer sobre medio mínimo que contiene glucosa como única fuente de carbono, e

- identificar dicho polipéptido candidato como un polipéptido heterólogo que tiene actividad enzimática para convertir piruvato o acetaldehído en acetil-CoA en una única etapa de conversión en (el citosol de) dicha célula de levadura cuando se observa el crecimiento de dicha célula.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2008/059119.

Solicitante: DSM IP ASSETS B.V..

Inventor/es: WU,Liang, RAAMSDONK,LOURINA MADELEINE, WINKLER,AARON ADRIAAN, MUELLER,ULRIKE MARIA.

Fecha de Publicación: 28 de Septiembre de 2016.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/81 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para levaduras.
C12P7/16 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 7/00 Preparación de compuestos orgánicos que contienen oxígeno. › Butanoles.

PDF original: ES-2607894_T3.pdf

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