TERAPIAS CON DOSIS BAJAS PARA EL TRATAMIENTO DE TRASTORNOS EN LOS QUE LA ACTIVIDAD DEL TNF-ALFA ES PERJUDICIAL.

Terapias con dosis bajas para el tratamiento de trastornos en los que la actividad del TNF-Alfa es perjudicial Antecedentes de la invención El factor de necrosis tumoral (TNF) es una citocina producida por numerosos tipos de células, incluyendo monocitos y macrófagos, que originalmente se identificó basándose en su capacidad para inducir la necrosis de determinados tumores en ratones (véase, por ejemplo, Old, L (1985) (1985) Science 230:630-632). Posteriormente, se demostró que un factor denominado cachectina, asociado con caquexia, se trataba de la misma molécula que el TNF. El TNF se ha implicado en la mediación de choques (véase, por ejemplo, Beutler, B. and Cerami, A. (1988) Annu. Rev. Biochem. 57:505-518; Beutler, B. and Cerami, A. (1989) Annu. Rev. Immunol. 7:625-655). Además, el TNF se ha implicado en la patofisiologia de diversas otras enfermedades y trastornos humanos, que incluyen septicemia, infecciones, enfermedades autoinmunes, rechazo de trasplante y enfermedad de injerto contra huésped (véase, por ejemplo, Moeller, A., et al. (1990) Cytokine 2:162-169; patente de los Estados Unidos Nº. 5,231,024 de Moeller et al.; Publicación de Patentes Europeas Nº. 260 610 B1 de Moeller, A., et al. Vasilli, P. (1992) Annu. Rev. Immunol. 10:411 -452; Tracey, K.J. and Cerami, A. (1994) Annu. Rev. Med. 45:491-503). Debido al papel perjudicial del TNF humano (hTNF) en una divrsidad de trastornos humanos, se han diseñado estrategias terapéuticas para inhibir o contrarrestar la actividad del hTNF. En particular, se han buscado anticuerpos que se unan a y neutralicen el hTNF como un medio para inhibir la actividad del hTNF. Algunos de los primeros anticuerpos de este tipo fueron los anticuerpos monoclonales (mAb) de ratón, secretados por hibridomas preparados a partir de linfocitos de ratones inmunizados con hTNF (véase, por ejemplo, Hahn T; et al., (1985) Proc Natl Acad Sci USA 82: 3814-3818; Liang, C-M., et al. (1986) Biochem. Biophys. Res. Commun. 137:847-854; Hirai, M., et al. (1987) J. Immunol. Methods 96:57-62; Fendly, B.M., et al. (1987) Hybridoma 6:359-370; Moeller, A., et al. (1990) Cytokine 2:162-169; Patente de los Estados Unidos Nº: 5,231,024 de Moeller et al.; Publicación de patente europea Nº: 186 833 B1 por Wallach, D.; Publicación de Solicitud de patente europea Nº: 218 868 A1 de Old et al.; Publicación de patente europea Nº: 260 610 B1 de Moeller, A., et al.). Aunque que estos anticuerpos anti-hTNF de ratón a menudo mostraban una alta afinidad por hTNF (por ejemplo, Kid 10 -9 M) y podían neutralizar la actividad del hTNF, su uso in vivo podría estar limitado por problemas asociados con la administración de anticuerpos de ratón a seres humanos, tales como semivida en suero corta, una incapacidad para desencadenar determinadas funciones efectoras humanas y provocación de una respuesta inmune no deseada contra el anticuerpo de ratón en un ser humano (reacción anticuerpo humano anti-ratón" (HAMA)). En un intento por superar los problemas asociados con el uso de anticuerpos totalmente murinos en seres humanos, se han modificado por ingeniería genética anticuerpos anti-hTNF murinos para que sean más "de tipo humano ". Por ejemplo, se han preparado anticuerpos quiméricos, en los que las regiones variables de las cadenas del anticuerpo derivan de murinos y las regiones constantes de las cadenas del anticuerpo derivan de seres humanos (Knight, D.M, et al. Immunol. 30:1443-1453; Publicación PCT Nº. WO 92/16553 de Daddona, P.E., et al.). Además, también se han preparado anticuerpos humanizados, en los que los dominios hipervariables de las regiones variables del anticuerpo derivan de murinos pero el resto de las regiones variables y las regiones constantes del anticuerpo derivan de seres humanos (Publicación PCT Nº. WO 92/11383 de Adair, J.R., et al.). Sin embargo, dado que estos anticuerpos quiméricos y humanizados aún conservan algunas secuencias murinas, aún pueden provocar una reacción inmune no deseada, la reacción anticuerpo humano anti-quimérico (HACA), especialmente cuando se administran durante periodos prolongados, por ejemplo: para síntomas crónicos, tales como artritis reumatoide (véase, por ejemplo, Elliott, M.J., et al. (1994) Lancet 344:1125-1127; Elliot, M.J., et al. (1994) Lancet 344:1105- 1110). Un agente inhibidor de hTNF preferido contra los mAb murinos o derivados de los mismos (por ejemplo, anticuerpos quiméricos o humanizados) sería un anticuerpo anti-hTNF, completamente humano, puesto que dicho agente no debería suscitar la reacción HAMA, incluso aunque se use durante periodos prolongados. Se han preparado autoanticuerpos monoclonales humanos contra hTNF usando técnicas de hibridoma humano (Boyle, P., etal. (1993) Cell. Immunol. 152:556-568; Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152: 569-581; Publicación de Solicitud de Patente Europea Nº. 614 984 A2 de Boyle, et al). Sin embargo, se comunicó que estos autoanticuerpos monoclonales derivados de hibridoma, que tenían una afinidad por el hTNF demasiado baja como para poder calcularla con métodos convencionales, eran incapaces de unirse al hTNF soluble y eran incapaces de neutralizar la citotoxicidad inducida por el hTNF (véase, Boyle, et al.; anterior). Además, el éxito de la técnica de hibridoma humano depende de la presencia natural en sangre periférica humana de linfocitos productores de anticuerpos específicos para el hTNF. Algunos estudios han detectado autoanticuerpos séricos contra hTNF en seres humanos (Fomsgaard; A., et al. (1989) Scand. J. Immunol. 30:219-223; Bendtzen, K., et al. (1990) Prog. Leukocyte Biol. 10B:447-452), mientras que otros no lo han hecho (Leusch, H-G., et al. (1991) J. Immunol. Methods 139:145- 147). Una alternativa a los anticuerpos humanos anti-hTNF de origen natural sería un anticuerpo hTNF recombinante. Se han descrito anticuerpos humanos recombinantes que se unen a hTNF con una afinidad relativamente baja (es decir, Kd ~10 -7 M) y una velocidad de disociación rápida (es decir, Koff ~10 -2 sec -1 ) (Griffiths, A.D., et al. (1993) EMBO 2 E03809644 07-09-2011   J. 12:725-734). Sin embargo, debido a su cinética de disociación relativamente rápida, estos anticuerpos podrían no ser adecuados para su uso terapéutico. Adicionalmente, se ha descrito un anti-hTNF humano recombinante que no neutraliza la actividad del hTNF, sino que en su lugar potencia la unión del hTNF a la superficie de las células y potencia la internalización del hTNF (Lidbury, A., et al. (1994) Biotechnol. Ther. 5:27-45; Publicación PCT Nº. WO 92/03145 de Aston, R. et al.) Por consiguiente, siguen siendo necesarios anticuerpos humanos, tales como anticuerpos humanos recombinantes, que se unan al hTNF soluble con una alta afinidad y una cinética de disociación lenta y que tengan la capacidad de tratar trastornos en los que la actividad TNF es perjudicial. Resumen de la invención La invención se refiere a un anticuerpo anti-TNF humano que es, o bien el anticuerpo D2E7 o bien un anticuerpo anti-TNF humano con propiedades equivalentes a las del D2E7, que se disocia del TNF humano con una Kd de 1x10 -8 M o menor y una constante de velocidad de disociación koff de 1x10 -3 s -1 o menor, ambas determinadas por resonancia de plasmón superficial, y que neutraliza la citotoxicidad inducida por el TNF humano en un ensayo L929 convencional in vitro con una CI50 de 1 x 10 -7 M o menor, para su uso en el tratamiento o alivio de la artritis, en el que el anticuerpo anti-TNF debe administrarse a una dosis baja de 0,01 -0,11 mg/kg, de manera que se trate o alivie la artritis. Breve descripción de los dibujos La figura 1 muestra las puntuaciones artríticas medias de cada ratón en los grupos de tratamiento a los que se les había administrado distintas dosis de D2E7. Las puntuaciones artríticas se registraron semanalmente comenzando a 1 semana de vida. Para cada grupo de tratamiento, en el gráfico se indican las puntuaciones artríticas medias ± error típico. Los grupos de tratamiento estaban constituidos de la siguiente manera: Grupo de control: 11 hembras, 9 machos de ratón, (n=20); grupo con dosis de 10 mg/kg: 2 hembras, 2 machos de ratón (n=4); grupo con dosis de 5 mg/kg: 6 hembras, 1 macho de ratón (n=7); grupo con dosis de 1mg/kg: 5 hembras, 3 machos de ratón (n=8); grupo con dosis de 0,5 mg/kg: 3 hembras, 2 machos de ratón (n=5); grupo con dosis de 0,1 mg/kg: 3 hembras, 3 machos de ratón (n=6); grupo con dosis de 0,01 mg/kg: 4 hembras, 2 machos de ratón (n=6). La figura 2 muestra las puntuaciones artríticas de cada ratón en los grupos de tratamiento a los que se les había administrado distintas dosis de Remicade. Las puntuaciones artríticas se registraron semanalmente comenzando a 1 semana de vida. Para cada grupo de tratamiento, en el gráfico se indican las puntuaciones artríticas medias ± error típico. Los grupos de tratamiento estaban constituidos de la... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-TNF humano que es D2E77, o un anticuerpo anti-TNF humano con propiedades equivalentes al D2E7, que se disocia del TNF humano con una Kd de 1 x 10 -8 M o menor y una constante de velocidad de disociación koff de 1 x10 -3 s -1 o menor, ambas determinadas por resonancia de plasmón superficial, y que neutraliza la citotoxicidad del TNF humano en un ensayo L929 convencional in vitro con una CI50 de 1 x 10 -7 M o menor, para su uso en el tratamiento o alivio de la artritis, en el que el anticuerpo anti-TNF se administra a una dosis baja de 0,01-0,11 mg/kg, de tal forma que la artritis se trata o alivia. 2. El anticuerpo anti-TNF humano, de acuerdo con la reivindicación 1, para su uso en el tratamiento o alivio de la artritis reumatoide. 3. El anticuerpo anti-TNF humano, de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en la que se alivian los síntomas asociados con la artritis. 4. El anticuerpo anti-TNF humano, de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en la que se alivian los síntomas seleccionados del grupo, que consisten en desgaste óseo, desgaste cartilaginoso, inflamación y vascularidad. 5. El anticuerpo anti-TNF humano, de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que se trata la artritis aliviando los síntomas seleccionados del grupo que consiste en distorsión articular, inflamación, deformación articular, anquilosis en flexión, y movilidad gravemente disminuida. 6. El anticuerpo anti-TNF humano, de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que el anticuerpo captura TNF en complejos en un sujeto que padece dicha artritis. 7. El anticuerpo anti-TNF humano, de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el nivel de TNF en suero es mayor que el nivel de TNF en suero en un sujeto que no padece dicha artritis. 8. El anticuerpo anti-TNF humano de acuerdo con la reivindicación 1, que es D2E7. 12 E03809644 07-09-2011   13 E03809644 07-09-2011   14 E03809644 07-09-2011   E03809644 07-09-2011   16 E03809644 07-09-2011   17 E03809644 07-09-2011   18 E03809644 07-09-2011