SECUENCIA LIDER UNIVERSAL DE GAS1.
Un bacteriófago que comprende una molécula polinucleotídica que comprenden un promotor unido operablemente a una secuencia de ácido nucleico que codifica,
en unión operable: una secuencia señal de secreción GAS1, un polipéptido de dominio variable de inmunoglobulina y una proteína de la cubierta de bacteriófago
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/GB2005/001180.
Solicitante: DOMANTIS LIMITED.
Nacionalidad solicitante: Reino Unido.
Dirección: 980 GREAT WEST ROAD BRENTFORD, MIDDLESEX TW8 9GS REINO UNIDO.
Inventor/es: DE WILDT,RUDOLPH,M.,T.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 24 de Marzo de 2005.
Fecha Concesión Europea: 1 de Septiembre de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/395 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de Saccharomyces.
- C07K16/24B
- C12N15/10C1
- C12N15/62A
Clasificación PCT:
- C12N15/09 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
- C12N15/62 C12N 15/00 […] › Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión.
- C12N9/10 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › Transferasas (2.) (ribonucleasas C12N 9/22).
- G01N33/68 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.
Clasificación antigua:
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania.
Fragmento de la descripción:
ANTECEDENTES
Los péptidos señal de secreción ayudan a las proteínas a atravesar las membranas celulares. Se usan en células tanto procariotas, como E. coli, como eucariotas. La gran mayoría de las proteínas secretoras no comparten una secuencia consenso uniforme (Watson, Nucl. Acids. Res. 12:5145 (1984)). De hecho, son bastante divergentes. Las sustituciones entre las secuencias señal de diferentes especies es altamente impredecible y normalmente tiene como resultado una secreción inconsistente entre especies, por ejemplo procariotas y eucariotas. Pocas secuencias señal tienen como resultado una secreción eficiente en procariotas y en eucariotas.
Existe un significativo interés en la producción de proteínas recombinantes en forma secretada. La secreción permite la fácil recuperación de la proteína recombinante de interés a partir del medio en el que se cultiva la célula huésped.
Rafaella y col. (Biotechnology and Applied Biotechnology (1988) 27, 81-88) divulga la expresión de una proteína de fusión de GAS1 con beta-galactosidasa en S. cerevisiae. El documento W003/068956 se refiere a procedimientos y composiciones para expresar proteínas o polipéptidos en huéspedes procariotas usando secuencias señal eucariotas. Vai y col. (Journal of Biological Chemistry (1991) 266, 12242-12248) divulga el aislamiento y la secuencia de aminoácidos deducida del gen que codifica la gp 115, una proteína de levadura anclada a glicofosfolípido que contiene una región rica en serinas. El documento US 6.555.310 se refiere a procedimientos de producción de una biblioteca de expresión de polipéptidos multivalentes. SUMARIO DE LA INVENCIÓN
La invención proporciona composiciones y procedimientos para potenciar la secreción de polipéptidos a través del uso de polipéptidos señal de secreción. En una forma de realización, las composiciones y procedimientos son particularmente útiles para generar una biblioteca de expresión de polipéptidos del dominio variable de inmunoglobulina y para la generación de los propios anticuerpos de dominio único.
La invención además se refiere a moléculas polinucleotídicas que comprenden polipéptidos señal de secreción GAS1 (SEC ID Nº 2), particularmente polipéptidos señal de secreción GAS1 que se han optimizado para su expresión bacteriana. Una secuencia de ácido nucleico optimizada que codifica un péptido señal de secreción GAS1 es, preferentemente, la secuencia de ácido nucleico de SEC ID Nº 3 ó 4.
En un primer aspecto, la presente invención proporciona un bacteriófago que comprende una molécula polinucleotídica que comprenden un promotor unido operablemente a una secuencia de ácido nucleico que codifica, en unión operable: una secuencia señal de secreción GAS1, un polipéptido de dominio variable de inmunoglobulina y una proteína de la cubierta de bacteriófago.
La molécula polinucleotídica puede estar operablemente unida a una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido heterólogo.
Preferentemente, un sitio de reconocimiento de enzima de restricción está intercalado entre la secuencia de ácido nucleico que codifica el péptido señal de secreción GAS1 y la secuencia que codifica el dominio variable de inmunoglobulina.
La invención puede utilizar una biblioteca de moléculas polinucleotídicas en la que cada molécula de dicha biblioteca comprende un promotor unido operablemente a una secuencia que codifica un polipéptido señal de secreción GAS1 que, a su vez, está unido a una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido heterólogo, en el que dicho promotor no es un promotor de ramnosa.
La presente memoria también divulga una molécula polinucleotídica que comprenden una molécula polinucleotídica que comprende un promotor unido operablemente a una secuencia de ácido nucleico que codifica un péptido señal de secreción GAS1. El polinucleótido que codifica un péptido señal de secreción GAS1 está, a su vez, unido operablemente a una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido de dominio variable de inmunoglobulina, en el que el promotor no es un promotor de ramnosa.
En una forma de realización, la secuencia que codifica el péptido señal de secreción GAS1 se optimiza para la expresión en una bacteria.
En otra forma de realización, la secuencia que codifica el péptido señal de secreción GAS1 es la secuencia de SEC ID Nº 3.
En otra forma de realización, la secuencia que codifica el péptido señal de secreción GAS1 es la secuencia de SEC ID Nº 4.
En otra forma de realización, el polipéptido de dominio variable de inmunoglobulina comprende un dominio variable (Vl) de la cadena ligera.
En otra forma de realización, el polipéptido de dominio variable de inmunoglobulina comprende un dominio variable de la cadena pesada (Vh).
En otra forma de realización, la secuencia que codifica un péptido señal de secreción GAS1 está unido operablemente en su extremo 3' a una secuencia que codifica un polipéptido de dominio variable de inmunoglobulina.
La presente memoria divulga una biblioteca de polinucleótidos que comprende una pluralidad de moléculas de ácido nucleico para usar en la invención.
Normalmente, las células huésped se transforman con el bacteriófago de la invención.
En otra forma de realización más de la invención, el péptido señal de secreción GAS1 es un péptido señal de secreción GAS1 de S. cerevisiae.
La memoria también divulga una molécula de polinucleótido que comprende un promotor unido operablemente a una secuencia de ácido nucleico que codifica un péptido señal de secreción GAS1, que, a su vez, está unido operablemente a una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido de dominio variable de inmunoglobulina sencilla.
En otra forma de realización, la secuencia que codifica un péptido señal de secreción GAS1 está unido operablemente en su extremo 3' a una proteína de la cubierta del bacteriófago.
La presente memoria divulga una molécula polinucleotídica que codifica una cadena de inmunoglobulina secretable, en la que la molécula polinucleotídica comprende un ácido nucleico que codifica un péptido señal de secreción GAS1 unido operablemente a un ácido nucleico que codifica un polipéptido seleccionado del grupo constituido por una cadena ligera de inmunoglobulina, un fragmento de cadena ligera de inmunoglobulina, una cadena pesada de inmunoglobulina y un fragmento de cadena pesada de inmunoglobulina.
En otra forma de realización, la invención proporciona un bacteriófago que comprende una molécula polinucleotídica, en la que el polinucleótido comprende una unidad de transcripción dicistrónica que comprende un ácido nucleico que codifica un dominio variable de la cadena pesada de inmunoglobulina y un dominio variable de la cadena ligera de inmunoglobulina, estando el extremo 5' de cada uno de los dominios variables de la cadena ligera y pesada de inmunoglobulina unido operablemente al extremo 3' de un ácido nucleico que codifica un péptido señal de secreción GAS1.
En otra forma de realización, el ácido nucleico que codifica el péptido señal de secreción GAS1 tiene la secuencia de SEC ID Nº 3.
En otra forma de realización, el ácido nucleico que codifica el péptido señal de secreción GAS1 tiene la secuencia de SEC ID Nº 4.
En otra forma de realización, la unidad de transcripción dicistrónica está unida operablemente a una secuencia promotora procariota.
En una forma de realización, el extremo C-terminal de dicho polipéptido de dominio variable de inmunoglobulina está, a su vez, unido a una proteína de la cubierta de un bacteriófago.
En otra forma de realización, el polipéptido está integrado en la cubierta del bacteriófago.
En otra forma de realización, el polipéptido del dominio variable de inmunoglobulina
está unido operablemente en su extremo N a un péptido señal de secreción GAS1.
En otra forma de realización, el polipéptido del dominio variable de inmunoglobulina comprende un polipéptido de dominio variable de la cadena pesada de inmunoglobulina unido en su extremo N al GAS1.
En otra forma de realización más, el polipéptido del dominio variable de inmunoglobulina comprende un polipéptido de dominio...
Reivindicaciones:
1. Un bacteriófago que comprende una molécula polinucleotídica que comprenden un promotor unido operablemente a una secuencia de ácido nucleico que codifica, en unión operable: una secuencia señal de secreción GAS1, un polipéptido de dominio variable de inmunoglobulina y una proteína de la cubierta de bacteriófago.
2. Un bacteriófago de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho dominio variable de
inmunoglobulina comprende un dominio variable de la cadena ligera. 10
3. Un bacteriófago de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho dominio variable de inmunoglobulina comprende un dominio variable de la cadena pesada.
4. Un bacteriófago de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en
15 el que la secuencia que codifica una secuencia del péptido señal de secreción GAS1 está unida operablemente en su extremo 3' a una secuencia que codifica una proteína de la cubierta del bacteriófago.
5. Un bacteriófago de acuerdo con las reivindicaciones 1-3, en el que la secuencia que codifica una secuencia del péptido señal de secreción GAS1 está unida operablemente en su extremo 3' a una secuencia que codifica un polipéptido de dominio variable de inmunoglobulina.
6. Un bacteriófago de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el ácido nucleico que codifica la secuencia señal de secreción GAS1 tiene la secuencia de SEC ID Nº 3 o la SECIDNº 4.
7. Un bacteriófago de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la molécula polinucleotídica comprenden una unidad de transcripción dicistrónica que comprende un ácido nucleico que codifica un dominio variable de la cadena pesada de inmunoglobulina y un dominio variable de la cadena ligera de inmunoglobulina, estando el extremo 5' de cada uno de los dominios variables de la cadena ligera y pesada de inmunoglobulina unido operablemente al extremo 3' de una correspondiente secuencia de ácido nucleico que codifica un péptido señal de secreción GAS1.
8. Un bacteriófago de acuerdo con la reivindicación 7, en el que la unidad de transcripción dicistrónica está unida operablemente a una secuencia promotora procariota.
9. Un bacteriófago de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3,, en el que una enzima de restricción está intercalada entre la secuencia de ácido nucleico que codifica el péptido señal de secreción GAS1 y la secuencia que codifica el dominio variable de inmunoglobulina.
10. Un bacteriófago de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende un promotor unido operablemente a la secuencia que codifica el péptido señal de secreción GAS1, en el que dicho promotor no es un promotor de ramnosa.
11. Un bacteriófago de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que además comprende un polipéptido codificado por la molécula polinucleotídica definida en una cualquiera de las reivindicaciones 1-10.
12. Uso de un bacteriófago para seleccionar, a partir de un repertorio de polipéptidos de dominio variable de inmunoglobulina, uno o más polipéptidos de dominio variable de inmunoglobulina que se unen a un ligando diana, en el que el procedimiento comprende:
infectar las células huésped con una pluralidad de bacteriófagos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, de modo que expresen en dichas células huésped una biblioteca de polinucleótidos que comprende una pluralidad de moléculas polinucleotídicas tal como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, codificando dichas moléculas diferentes polipeptídicos de dominio variable de inmunoglobulina, para producir la biblioteca de polipéptidos; y poner en contacto la biblioteca de polipéptidos con el ligando diana y seleccionar uno o más bacteriófagos que expresan polipéptidos que se unen al ligando diana.
13. Uso de un bacteriófago para identificar un polipéptido de anticuerpo que se une a una diana deseada, en el que el procedimiento comprende introducir una biblioteca de polinucleótidos que comprende una pluralidad de moléculas polinucleotídicas en bacteriófagos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en una población de células huésped y seleccionar un miembro de la biblioteca que codifica un polipéptido que se une a la diana.
Patentes similares o relacionadas:
Promotor regulable, del 8 de Noviembre de 2019, de LONZA LTD.: Un método para producir una proteína de interés (PDI) mediante el cultivo de una línea de células eucariotas recombinantes que comprenden una construcción […]
Vacuna para prevenir la enfermedad de edema porcino, del 24 de Mayo de 2019, de KM Biologics Co., Ltd: Una proteína de fusión en la que están unidos un polipéptido que consiste en una unidad formadora de superhélice de la proteína oligomérica de la matriz de cartílago (COMP) […]
Variantes de transportador de Gal2 y sus usos, del 1 de Mayo de 2019, de BUTALCO GMBH: Polipéptido, que comprende al menos una sustitución de aminoácido en una posición correspondiente a T354 de la secuencia de aminoácidos de […]
Variantes del gen NDI1 de levadura y sus usos en el tratamiento de enfermedades relacionadas con la disfunción mitocondrial, del 15 de Noviembre de 2018, de The Provost, Fellows, Foundation Scholars, and The Other Members of Board, of The College of The Holy and Undivided Trinity of near Dublin: Una secuencia de ácido nucleico aislada que codifica una variante funcional optimizada inmunitaria de la proteína NDI1 de levadura de SEQ ID nº 542 que comprende al menos […]
Producción de metabolitos, del 17 de Enero de 2018, de Evolva SA: Un microorganismo recombinante que produce y excreta al medio de cultivo un estilbenoide como producto metabolito cuando se cultiva en condiciones de […]
Célula adecuada para la fermentación de una composición de azúcares mixtos, del 18 de Octubre de 2017, de DSM IP ASSETS B.V.: Célula adecuada para la producción de uno o más productos de fermentación a partir de una composición de azúcares que comprende glucosa, galactosa, xilosa, […]
Polipéptidos con actividad de permeasa, del 13 de Abril de 2016, de DSM IP ASSETS B.V.: Polipéptido que tiene una o más sustituciones en una posición correspondiente a la posición 339 o 376 de SEQ ID NO: 59, en la que el polipéptido […]
Composición cosmética y/o farmacéutica que comprende un hidrolizado peptídico capaz de reforzar la función barrera, del 15 de Julio de 2015, de ISP INVESTMENTS INC.: Hidrolizado peptídico activador de la HMG-CoA reductasa, caracterizado porque proviene de la hidrolisis de plantas seleccionadas como, entre otras, la espelta (Triticum monococum), […]