Anticuerpo monoclonal humano que se une de manera específica al factor de necrosis tumoral a (TNFa) y comprende un polipéptido de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:

70 y 74; y un polipéptido de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 72, en el que dicho anticuerpo monoclonal humano se une al TNFa con una Kd inferior a 10-11 M

Anticuerpos dirigidos al factor de necrosis tumoral y usos de los mismos.

Campo

La presente invención se refiere a anticuerpos dirigidos al antígeno factor de necrosis tumoral alfa (a continuación en el presente documento TNFa, factor de necrosis tumoral a o TNFa) y a usos de tales anticuerpos. Más específicamente, la presente invención se refiere a anticuerpos monoclonales totalmente humanos dirigidos al antígeno TNFa y a usos de estos anticuerpos. Los aspectos de la invención también se refieren a hibridomas u otras líneas celulares que expresan tales anticuerpos. Los anticuerpos del presente documento son útiles como diagnósticos y como tratamientos para enfermedades asociadas con la actividad y/o sobreproducción del TNFa.

Antecedentes

Se ha demostrado que el TNFa está implicado en enfermedades infecciosas, trastornos inmunitarios, patologías autoinmunitarias, enfermedad de injerto contra huésped (GVHD), neoplasia/cáncer y caquexia asociada al cáncer. Véase, Feldman M., 2002 Nat. Rev. Immunol., 2:364. En particular, los niveles de TNFa se inducen de manera espectacular en septicemia por Gram negativas, choque endotóxico (Véase, Michie et al., 1989 Br. J. Surg. 76:670) enfermedad de Crohn y artritis reumatoide. Las implicaciones del TNFa en una amplia variedad de este tipo de indicaciones resalta la importancia de desarrollar agentes terapéuticos biológicos específicos que seleccionan como diana esta citocina inflamatoria.

Varios investigadores notifican la caracterización de anticuerpos monoclonales contra el TNFa que neutralizan su actividad in vitro. Véase, Liang CM, et al., 1986, Biochem. Biophys Res. Commun., 137:847, y Meager A, et al., 1987 Hybridoma 6:305. Algunos de estos anticuerpos se usaron para mapear epítopos de TNFa humano y desarrollar inmunoensayos enzimáticos y para ayudar en la purificación del TNFa recombinante. Véase Fendly BM, et al., 1987 Hybridoma, 6:359; Hirai M, et al., 1987 J. Immunol Methods, 96:57; Moller A, et al., 1990 Cytokine, 2:162; Bringman TS y Aggarwal BB, 1987, Hybridoma, 6:489. Desafortunadamente, los anticuerpos generados para estos estudios no serían útiles como anticuerpos anti-TNFa neutralizantes terapéuticos para tratar pacientes humanos puesto que derivaron de especies no humanas y carecen de especificidad para el TNFa.

Los antisueros neutralizantes o AcM frente al TNFa han mostrado eficacia en mamíferos no humanos suprimiendo acontecimientos fisiopatológicos adversos y evitando la muerte tras una exposición letal en endotoxemia experimental. Estos efectos se han demostrado en sistemas de modelos de primates no humanos y roedores. Véase, Beutler B, et al., 1985 Science, 229:869; Tracey KJ, et al., 1987 Nature, 330:662; Mathison JC, et al., 1988 J. Clin. Invest., 81:1925; Shimamoto Y, et al., 1988, Immunol. Lett., 17:311; Opal SM, et al., 1990, J. Infect. Dis., 161:1148; Silva AT, et al., 1990, J. Infect. Dis., 162:454; Hinshaw LB, et al., 1990, Circ. Shock, 30:279.

Actualmente existen diversas formas de anticuerpos neutralizantes y se revisan por Feldman. Véase, Feldman M, 2002, Nat. Rev. Immunol., 2:364. Tal como se describe en esta revisión, se ha dedicado un enorme esfuerzo para crear un anticuerpo neutralizante que produjera un anticuerpo terapéuticamente adecuado para la administración prolongada a seres humanos. Por ejemplo, se han preparado anticuerpos quiméricos, en los que las regiones variables de las cadenas de anticuerpo se derivan de murino y las regiones constantes de las cadenas de anticuerpo se derivan de ser humano, (Knight, D. M, et al. (1993) Mol. Immunol. 30:1443-1453; publicación PCT n.º WO 92/16553 por Daddona, P. E., et al.). Adicionalmente, se han producido anticuerpos humanizados, en los que los dominios hipervariables de las regiones variables de anticuerpo se derivan de murino pero el resto de las regiones variables y las regiones constantes de anticuerpo se derivan de humano (publicación PCT n.º WO 92/11383 por Adair, J. R., et al.). Sin embargo, debido a que estos anticuerpos quiméricos y humanizados todavía contienen algunas secuencias de murino, pueden provocar una reacción inmunitaria no deseada, la reacción de anticuerpos anti-quiméricos humanos (HACA), especialmente cuando se administra durante períodos prolongados, por ejemplo, para indicaciones crónicas, tales como artritis reumatoide (véase por ejemplo, Elliott, M. J., et al. (1994) Lancet 344:1125-1127; Elliot, M. J., et al., (1994) Lancet 344:1105-1110).

Los autoanticuerpos monoclonales totalmente humanos contra el hTNFa se han preparado usando técnicas de hibridoma humano (Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152:556-568; Boyle, P., et al. (1993) Cell. Immunol. 152:569-581; publicación de solicitud de patente europea n.º 614 984 A2 por Boyle, et al.). Se han descrito anticuerpos humanos recombinantes que se unen al hTNFa (Griffiths, A. D., et al. (1993) EMBO J. 12:725-734). Sin embargo, debido a sus cinéticas de disociación relativamente rápidas, estos anticuerpos no pueden ser adecuados para su uso terapéutico. Adicionalmente, se ha descrito un anticuerpo anti-hTNFa humano recombinante que no neutraliza la actividad del hTNFa, sino más bien potencia la unión del hTNFa a la superficie de células y potencia la internalización del hTNFa (Lidbury, A., et al. (1994) Biotechnol. Ther. 5:27-45; publicación PCT n.º WO 92103145 por Aston, R. et al). Actualmente, las proteínas de fusión anticuerpo/TNFR (fcIg/TNFR) (Enbrel) han mostrado cierta utilidad, pero se enfrentan a una corta semivida en el suero conduciendo a una administración frecuente (por ejemplo, dos veces a la semana) del fármaco. Un anticuerpo terapéutico neutralizante frente al TNFa para tratamiento prolongado superaría el problema de la semivida (una inyección a las 3-4 semanas) siempre que el propio anticuerpo no fuera inmunógeno. Otros han intentado crear anticuerpos neutralizantes frente al TNFa que tengan las características deseadas de baja/ninguna inmunogenicidad y una semivida típica de sus homólogos endógenos sin éxito. Los ejemplos de tales anticuerpos incluyen quimeras de ratón/ser humano, tales como infliximab (cA2 o Remicade), y el anticuerpo humanizado CDP571. Se ha dado a conocer la producción de anticuerpos humanos, tales como anticuerpos humanos recombinantes, que se unen al hTNFa soluble y neutralizan la actividad del hTNFa, incluyendo la citotoxicidad inducida por el hTNFa (in vitro e in vivo) y la activación celular inducida por el hTNFa en la patente estadounidense 6.258.562. Éstos representan intentos para crear anticuerpos terapéuticos neutralizantes que se asemejen estrechamente a sus homólogos humanos.

Desafortunadamente, el potencial completo de estos fármacos no puede llevarse a cabo debido a su inmunogenicidad potencial inherente, semivida comprometida y/o avidez/afinidad reducida por el TNFa. Las respuestas inmunitarias del huésped inducidas por estos anticuerpos quiméricos pueden conducir al aclaramiento de los anticuerpos de la circulación y hacen a la administración repetida inadecuada para terapia debido a la pérdida de eficacia. En última instancia, estos problemas reducen el beneficio terapéutico al paciente. También pueden encontrarse problemas adicionales en el aumento a escala y la fabricación usando anticuerpos o fragmentos de los mismos, tal como los mencionados anteriormente.

Por tanto, por los motivos anteriores, existe una necesidad en la técnica de proporcionar una alternativa a los pacientes en poblaciones clínicamente indicadas en los que el TNFa es responsable de la fisiopatología de una enfermedad particular. Los anticuerpos monoclonales neutralizantes, de alta afinidad, totalmente humanos, o fragmentos de los mismos, para administración prolongada proporcionan las características deseadas de una opción terapéutica no inmunógena con una semivida adecuada para una administración menos frecuente.

Sumario

Las realizaciones de la invención se refieren a anticuerpos monoclonales humanos que se unen de manera específica al factor de necrosis tumoral a (denominado en el presente documento factor de necrosis tumoral alfa, TNFa o TNFa) y comprenden un polipéptido de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 70 y 74; y un polipéptido de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 72, en los que dichos anticuerpos monoclonales humanos se unen al TNFa con una Kd inferior a 10^-11 M. Un ejemplo no limitativo de un anticuerpo...

1. Anticuerpo monoclonal humano que se une de manera específica al factor de necrosis tumoral a (TNFa) y comprende un polipéptido de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 70 y 74; y un polipéptido de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 72, en el que dicho anticuerpo monoclonal humano se une al TNFa con una Kd inferior a 10^-11 M.

2. Anticuerpo monoclonal humano de la reivindicación 1, que comprende un polipéptido de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 70.

3. Anticuerpo monoclonal humano de la reivindicación 1, que comprende un polipéptido de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO: 74.

4. Método para someter a ensayo el nivel de factor de necrosis tumoral alfa (TNFa) en una muestra de un paciente, que comprende poner en contacto un anticuerpo anti-TNFa de la reivindicación 1, con una muestra biológica de un paciente, y detectar el nivel de unión entre dicho anticuerpo y el TNFa en dicha muestra.

5. Método según la reivindicación 5, en el que la muestra biológica es sangre.

6. Composición, que comprende un anticuerpo de la reivindicación 1, o un fragmento de unión a antígeno del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

7. Uso de un anticuerpo de la reivindicación 1, en la preparación de medicamento para el tratamiento eficaz de enfermedades inflamatorias inmunomediadas en un paciente, en el que dichas enfermedades se seleccionan del grupo que consiste en artritis reumatoide, glomerulonefritis, aterosclerosis, psoriasis, reestenosis, enfermedad autoinmunitaria, enfermedad de Crohn, reacciones injerto-huésped, choque septicémico, caquexia, anorexia, uveítis, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, vasculitis y esclerosis múltiple, y en el que dicho anticuerpo monoclonal se une de manera específica al factor de necrosis tumoral a (TNFa).

8. Uso de un anticuerpo de la reivindicación 1, en la preparación de medicamento para el tratamiento eficaz de una enfermedad asociada con la expresión del factor de necrosis tumoral alfa en un paciente, en el que dichas enfermedades se seleccionan del grupo que consiste en artritis reumatoide, glomerulonefritis, aterosclerosis, psoriasis, reestenosis, enfermedad autoinmunitaria, enfermedad de Crohn, reacciones injerto-huésped, choque septicémico, caquexia, anorexia, uveítis, artritis psoriásica, espondilitis anquilosante, vasculitis y esclerosis múltiple, y en el que dicho anticuerpo monoclonal se une de manera específica al factor de necrosis tumoral a (TNFa).

9. Uso de la reivindicación 8 ó 9, en el que la enfermedad se selecciona del grupo que consiste en artritis reumatoide, psoriasis, enfermedad de Crohn, artritis psoriásica y espondilitis anquilosante.