Métodos para producir proteínas bicatenarias en bacterias.

Un método para producir un receptor de linfocitos T monoclonal de movilización inmunitaria contra el cáncer (ImmTAC) que comprende una cadena alfa del receptor de linfocitos T (TCR) y una cadena beta de TCR en una célula huésped de E.

coli, comprendiendo el método:

(a) cultivar la célula huésped de E. coli para expresar la cadena alfa de TCR y la cadena beta de TCR del ImmTAC en un medio de cultivo en condiciones que comprenden:

una fase de crecimiento que comprende una temperatura de crecimiento y una velocidad de agitación del crecimiento, y

una fase de producción que comprende una temperatura de producción y una velocidad de agitación de producción,

por lo que, tras la expresión la cadena alfa de TCR y la cadena beta de TCR, se pliegan y se ensamblan para formar un ImmTAC biológicamente activo en la célula huésped de E. coli;

en donde la célula huésped de E. coli comprende un polinucleótido que comprende:

(1) una primera unidad de traducción que codifica la cadena alfa de TCR del ImmTAC;

(2) una segunda unidad de traducción que codifica la cadena beta de TCR del ImmTAC;

(3) una tercera unidad de traducción que codifica una peptidil-prolil isomerasa, en la que la peptidil-prolil isomerasa es una proteína FkpA; y

(4) una cuarta unidad de traducción que codifica una proteína disulfuro oxidorreductasa, en donde la proteína disulfuro oxidorreductasa es una proteína DsbC;

en donde la temperatura de crecimiento está en el intervalo de 30 °C a 34 °C durante la fase de crecimiento, en donde la temperatura de producción está en el intervalo de 25 °C a 29 °C durante la fase de producción, en donde la velocidad de agitación del crecimiento es suficiente para lograr una velocidad máxima de consumo de oxígeno de la célula huésped durante la fase de crecimiento en el intervalo de 3,5 a 4,5 mmol/l/min, y en donde la velocidad de agitación de producción es suficiente para lograr una velocidad de consumo de oxígeno de la célula huésped durante la fase de producción en el intervalo de 1,0 a 3,0 mmol/l/min; y

(b) recuperar el ImmTAC biológicamente activo de la célula huésped de E. coli.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2015/059342.

Solicitante: GENENTECH, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1 DNA WAY SOUTH SAN FRANCISCO, CA 94080-4990 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: SIMMONS,LAURA,C, REILLY,DOROTHEA, GIULIANOTTI,JAMES, AURORI,KIERAN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.
  • C07K16/22 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra factores de crecimiento.
  • C07K16/24 C07K 16/00 […] › contra citoquinas, linfoquinas o interferones.
  • C07K16/28 C07K 16/00 […] › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
  • C12N15/63 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Introducción de material genético extraño utilizando vectores; Vectores; Utilización de huéspedes para ello; Regulación de la expresión.
  • C12P21/00 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00).

PDF original: ES-2819256_T3.pdf

 

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