Uso de un anticuerpo para preparar un fármaco para tratar un linfoma cutáneo de células T (CTCL),

en el quedicho anticuerpo se une a una molécula KIR3DL2.

Medios para el diagnóstico y tratamiento de CTCL

5 Campo de la invención

La presente solicitud se refiere a medios novedosos para el diagnóstico y tratamiento de linfomas T y más particularmente de Linfomas Cutaneos de Células T (abreviadamente CTCL) . De hecho la invención proporciona marcadores tumorales novedosos que son universales para CTCL y describe usos biotecnológicos y médicos de los mismos.

Antecedentes de la invención

CTCL es un grupo de Linfomas T que principalmente implican la piel. El grupo CTCL concretamente comprende

Micosis Fungoides (abreviadamente MF) , Síndrome de Sézar y (abreviadamente SS) , Papulosis Linfomatoide (abreviadamente LP) y linfomas CD30+. MF transformado se caracteriza por invasión de la piel por linfocitos T malignos derivados clonalmente que fenotípicamente se parecen a células auxiliares T maduras. Los linfomas LP y CD30+ también se desarrollan en la piel. Las formas más agresivas de CTCL se desarrollan cuando las células malignas se convierten en no epidermotrópicas y están asociadas a implicación extracutánea. SS es una forma más agresiva de CTCL que se caracteriza por una expansión clonal de células T CD4+/CD45RO+ y la aparición de estas células T malignas en la sangre. La mayoría de CTCL es CTCL CD4+, pero existen algunos casos raros de CD8+ CTCL.

La biología de la enfermedad de CTCL está escasamente entendida, ya que es difícil identificar las células malignas,

debido a la carencia de marcadores de superficie de células específicas. En las lesiones cutáneas, por lo tanto es difícil distinguir las células de CTCL de linfocitos T (no tumorales) que se infiltran en los reactivos.

El diagnóstico de linfomas T tales como CTCL en el momento actual se basa principalmente en las observaciones citológicas e histológicas de la presencia o ausencia de células tumorales en una muestra recogida de un área del cuerpo sospechosa (observación del aspecto histopatológico en la biopsia de piel y/o presencia de células SS en la sangre, por medio de la detección de células que muestran un núcleo cebreriforme) . Tal método de diagnóstico no es totalmente fiable, notablemente en las fases tempranas de la transformación de linfocitos cutáneos en linfocitos malignos. Tal método de diagnóstico tampoco permite representar la enfermedad. Técnicamente hablando, es también de larga duración.

Hoy el tratamiento de CTCL se logra tentativamente mediante la inducción de apoptosis de células tumorales mediante quimioterapia no específica.

Por lo tanto existe una necesidad de soluciones más precisas y apropiadas al problema del diagnóstico y tratamiento de enfermedades que implican la proliferación de células T malignas, tales como CTCL.

Sumario de la invención

En vista de esta situación de la técnica, los autores de la presente invención ahora proporcionan soluciones al

45 problema de diagnóstico y tratamiento de CTCL basadas en la molécula de p140 (p140 se refiere también como KIR3DL2) .

La invención de este modo se refiere al uso de un anticuerpo para preparar un fármaco para tratar un linfoma cutáneo de células T (CTCL) , en el que dicho anticuerpo se une a una molécula de KIR3DL2.

De acuerdo con una realización de la invención, dicho anticuerpo se dirige contra una proteína que tiene la SEC ID N.º: 2.

En otra realización, dicho anticuerpo se dirige contra una proteína que tiene la SEC ID N.º: 4.

55 En todavía otra realización el anticuerpo se dirige contra una proteína que tiene la SEC ID N.º: 2 y contra una proteína que tiene la SEC ID N.º: 4.

La invención también se refiere al uso de un anticuerpo tal como se ha definido anteriormente, comprendiendo además un elemento seleccionado entre el grupo que consta de toxinas y radioelernentos tumorales, o comprendiendo adicionalmente una enzima capaz de transformar un profármaco antimitótico en una forma de fármaco activo, tal como una carboxipeptidasa.

Es también un objeto de la invención proporcionar un método para evaluar el porcentaje de células de CTCL CD4+

65 presentes dentro de un cierto compartimiento del cuerpo de un paciente. Dicho método se caracteriza porque comprende las siguientes etapas:

- el porcentaje de células CD4+ que expresa moléculas de KIR3DL2 se mide en una muestra biológica recogida de dicho paciente y

- el porcentaje de células de CTCL CD4+ malignas realmente presentes en compartimiento del cuerpo se considera que cae dentro de un intervalo de ±10 % alrededor de dicho porcentaje medido.

La invención también se refiere a un método para diagnóstico de CTCL, caracterizado porque el porcentaje de células T que expresan moléculas de KIR3DL2 se mide en una muestra biológica recogida de dicho paciente y se compara con el porcentaje promedio observado en seres humanos sin CTCL, decidiéndose un diagnóstico positivo de CTCL cuando el porcentaje medido es significativamente mayor que el porcentaje promedio.

La invención también se refiere a un método para el diagnóstico de CTCL, caracterizado porque la presencia de células CD4+ que expresan KIR3DL2 se busca en una muestra biológica que potencialmente comprende células de

CTCL, concluyéndose un diagnóstico positivo de CTCL cuando tal presencia es realmente y significativamente detectada.

Ventajosamente, en las realizaciones del método anterior, dicha medición del porcentaje hace uso de un elemento seleccionado del grupo que consta de un compuesto de unión a KIR3DL2, ADN de KIR3DL2. el ADN de las SEC ID números. 1 o 3 y la proteína de la SEC ID N.º: 4.

De acuerdo con otro aspecto, la invención se refiere a un kit para evaluar el nivel de desarrollo de un CTCL, o para el diagnóstico de CTCL, que comprende un elemento seleccionado entre el grupo que consta de un compuesto de unión a KIR3DL2, ADN de KIR3DL2, el ADN de las SEC ID números. 1 o 3 y la proteína de la SEC ID N.º: 4.

Todavía de acuerdo con otro aspecto, la invención se refiere a un método in vitro para la identificación de un compuesto que es útil en la paliación, prevención, alivio, tratamiento de una proliferación de células de CTCL malignas, caracterizado por que comprende la detección de un compuesto que es capaz de unirse a una molécula de KIR3DL2 tal como la SEC ID N.º: 2 o la SEC ID N.º: 4.

La molécula p140, se conocía ya que era un receptor inhibidor, pero se ha descrito previamente solamente en los subgrupos de células NK y de células CD3+ CD8+ de seres humanos sanos. Los autores de la presente invención ahora demuestran que p140 se expresa en la superficie de células T tumorales tales como células de CTCL. Además demuestran que p140 se expresa en la superficie de células T CD4+ malignas, tales como células de CTCL 35 CD4+, mientras que otros receptores que usualmente se observan en la superficie de células NK (tales como p58.1, p58.2, p70KIR, CD94/NKG2A) no se encuentran en la superficie de las las células T CD4+ malignas. De nota adicional es que p140 no se ha observado por los autores de la presente invención en la superficie de células T CD4+ recogidas de pacientes que padecen enfermedades dermatológicas no tumorales tales como enfermedades cutáneas inflamatorias (por ejemplo, lupus, liquen) , o necrolisis epidérmica tóxica. En la superficie de células T CD4+ tumorales, se han identificado por los autores de la presente invención dos formas alélicas de p140: clon 24 de la forma alélica de KIR3D (SEC ID N.º: 1) , y clon 1.1 de la forma alélica de p140 (SEC ID N.º: 3) . El clon 24 de la forma alélica de KIR3D (SEC ID N.º: 1) es un nuevo polinucleótido que codifica una nueva proteína (SEC ID N.º: 2) : clon 24 de KIR3D (SEC ID N.º: 1) muestra cinco diferencias cuando se compara con la secuencia de ADN del clon 1.1 de p140 previamente descrito (SEC ID N.º: 3) , dando como resultado cuatro sustituciones de aminoácidos en la

45 proteína madura (SEC ID N.º: 2) cuando se compara con la proteína madura del clon 1.1 de p140 (SEC ID N.º: 4) .

Los autores de la presente invención demuestran que el SC5 y p140 comparten ambos las mismas características técnicas. La molécula SC5 aparece como una nueva proteína bioquímica y funcionalmente, cuyo peso molecular aparente es 96 kD en condiciones reductoras.... [Seguir leyendo]

1. Uso de un anticuerpo para preparar un fármaco para tratar un linfoma cutáneo de células T (CTCL) , en el que

dicho anticuerpo se une a una molécula KIR3DL2. 5

2. Uso de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el anticuerpo está dirigido contra una proteína que tiene la SEC ID N.º: 2.

3. Uso de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el anticuerpo está dirigido contra una proteína 10 que tiene la SEC ID N.º: 4.

4. Uso de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 2 o 3 en el que el anticuerpo está dirigido contra una proteína que tiene la SEC ID N.º: 2 y contra una proteína que tiene la SEC ID N.º: 4.

5. Uso de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende además un elemento seleccionado del grupo que consta de toxinas tumorales y radioelementos.

6. Uso de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende además una

enzima capaz de transformar un profármaco antimitótico en una forma de fármaco activa, tal como una 20 carboxipeptidasa.

7. Método para evaluar el porcentaje de células de CTCL CD4+ malignas presentes dentro de un cierto compartimiento del cuerpo de un paciente, caracterizado porque comprende las siguientes etapas:

- se mide el porcentaje de células CD4+ que expresa moléculas KIR3DL2 en una muestra biológica recogida de dicho paciente y

- el porcentaje de células de CTCL CD4+ malignas realmente presentes en dicho compartimiento del cuerpo se

considera que cae dentro de un intervalo ±10 % alrededor de dicho porcentaje medido. 30

8. Método para el diagnóstico de CTCL, caracterizado porque el porcentaje de células T que expresan moléculas KIR3DL2 se mide en una muestra biológica recogida de dicho paciente y se compara con el porcentaje promedio observado en seres humanos sin CTCL, decidiéndose un diagnóstico positivo de CTCL cuando el porcentaje medido es significativamente mayor que el porcentaje promedio.

9. Método para el diagnóstico de CTCL, caracterizado porque la presencia de células CD4+ que expresan KIR3DL2 se busca en una muestra biológica que comprende potencialmente células CTCL, concluyéndose un diagnóstico positivo de CTCL cuando tal presencia se detecta real y significativamente.

10. Método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, caracterizado porque dicha medición del porcentaje hace uso de un elemento seleccionado entre el grupo que consta de un anticuerpo que se une a KIR3DL2, a ADN de KIR3DL2, al ADN de las SEC ID N.º: 1 o 3 y a la proteína de la SEC ID N.º: 4.

11. Un kit de diagnóstico que comprende un anticuerpo que se une a la proteína KIR3DL2 de la SEC ID N.º: 2. 45

12. Un método in vitro para la identificación de un anticuerpo que es útil en la paliación, prevención, alivio, tratamiento de una proliferación de células de CTCL malignas, caracterizado porque comprende la detección de un anticuerpo que es capaz de unir a una molécula KIR3DL2 tal como la SEC ID N.º: 2 o la SEC ID N.º: 4.