Un procedimiento de detección de células cancerosas en una muestra biológica de mamífero,

comprendiendo el procedimiento la etapa de detectar la presencia de una molécula de ácido nucleico del KCNB que tiene una identidad de secuencia de ácidos nucleicos mayor de un 90 % a lo largo de su longitud con respecto a la secuencia de ácidos nucleicos establecida en la SEQ ID NO: 2, en el que un incremento de 1, 5 veces o más del ácido nucleico del KCNB detectado en comparación con el valor normal indica la presencia de células cancerosas.

KCNB: una proteína del canal de potasio.

Antecedentes de la invención

Los canales de iones de potasio (canales de K+) son proteínas transmembrana ubicuas que son los determinantes principales del potencial de membrana, es decir, la diferencia de voltaje que está presente a través de las membranas plasmáticas de casi todas las células animales. En células excitables, los canales de K+ definen la frecuencia y duración de potenciales de acción, y desempeñan una función fundamental en la integración neuronal, la contracción muscular y la secreción hormonal. En células no excitables, los canales de K+ son fundamentales para el mantenimiento de los potenciales de membrana y la regulación del volumen celular. Por tanto, estos canales son dianas importantes para el desarrollo de moduladores que se pueden usar para regular la electrofisiología celular fundamental, en particular para su uso en aplicaciones terapéuticas.

En un primer aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento de detección de células cancerosas en una muestra biológica de mamífero, comprendiendo el procedimiento la etapa de detectar de la presencia de una molécula de ácido nucleico del KCNB que tiene una identidad de secuencia de ácidos nucleicos mayor de un 90 % a lo largo de su longitud con respecto a la secuencia de ácidos nucleicos establecida en la SEC. ID NO: 2, en la que un incremento de 1, 5 veces o más del ácido nucleico del KCNB detectado cuando se compara con el normal indica la presencia de células cancerosas.

En otro aspecto de la presente invención se proporciona un procedimiento de detección de células cancerosas en una muestra biológica de mamífero, comprendiendo el procedimiento la etapa de detectar la presencia de una molécula de ácido nucleico del KCNB que comprende al menos 50 nucleótidos contiguos del ácido nucleico que tiene la secuencia establecida en la SEQ ID NO: 2 a 5, en la que un incremento de 1, 5 veces o más del ácido nucleico del KCNB detectado cuando se compara con el normal indica la presencia de células cancerosas.

En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento de detección de células cancerosas en una muestra biológica de mamífero, comprendiendo el procedimiento las etapas de:

detectar una sobreexpresión de un polipéptido del KCNB que tiene una secuencia de aminoácidos que es idéntica en un 90 % a lo largo de su longitud con respecto a la secuencia de aminoácidos establecida en la SEQ ID NO: 1 en la muestra, en la que un incremento de 1, 5 veces o más del polipéptido del KCNB detectado cuando se compara con el normal indica la presencia de células cancerosas.

En otro aspecto de la presente invención, se proporciona un procedimiento de detección de células cancerosas en una muestra biológica de mamífero, comprendiendo el procedimiento las etapas de:

detectar una sobreexpresión de un polipéptido del KCNB que tiene al menos 50 péptidos contiguos de la secuencia de aminoácidos establecida en la SEQ ID NO: 1 en la muestra, en la que un incremento de 1, 5 veces o más del polipéptido del KCNB detectado cuando se compara con el normal indica la presencia de células cancerosas.

Además, en otro aspecto de la presente invención se proporciona el uso de un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido del KCNB que comprende una identidad de secuencia de aminoácidos mayor de un 90 % a lo largo de su longitud con respecto a la secuencia de aminoácidos establecida en la SEQ ID NO: 1 para detectar células cancerosas en una muestra biológica de mamífero.

En otro aspecto de la presente invención, se proporciona el uso de un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido del KCNB que comprende al menos 50 péptidos contiguos de la secuencia de aminoácidos establecida en la SEQ ID NO: 1 para detectar células cancerosas en una muestra biológica de mamífero.

La presente divulgación proporciona ácidos nucleicos aislados que codifican una proteína del canal de K+, KCNB (canal de potasio expresado en la mama) . Las secuencias dadas a conocer en el presente documento se pueden usar para cualquiera de una serie de objetivos, incluyendo para la detección específica de células que expresan el KCNB, para la identificación de moléculas que se asocian con y/o modulan la actividad del KCNB, o, y de acuerdo con la invención, para el diagnóstico de cualquiera de una serie de afecciones asociadas con la actividad del canal de K+ o la expresión, por ejemplo, cáncer. El ácido nucleico y el receptor novedoso que lo codifica se denominan en el presente documento, entre otros, KCNB.

En un aspecto, la presente divulgación proporciona un ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido que comprende al menos una identidad de secuencia de aminoácidos de un 70 %, a menudo una identidad de secuencia mayor de un 90 % o de un 95 %, con respecto a la SEQ ID NO: 1. En una realización, el ácido nucleico codifica un polipéptido que se une específicamente a los anticuerpos policlonales generados contra una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. En otra realización, el ácido nucleico codifica un polipéptido que tiene una actividad de canal de potasio. En otra realización, el ácido nucleico codifica una proteína que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

En otras realizaciones, el ácido nucleico comprende una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 5 o se puede amplificar por cebadores que se hibridan específicamente bajo condiciones restrictivas a un ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 5.

En otro aspecto, la divulgación proporciona un ácido nucleico aislado que se hibrida específicamente bajo condiciones de hibridación restrictivas a un ácido nucleico que tiene una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1.

En otro aspecto, la divulgación proporciona un ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido que comprende una identidad de aminoácidos de al menos un 70 %, a menudo una identidad de secuencia mayor de un 90 % o de un 95 %, con respecto a un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, en la que el ácido nucleico se hibrida de forma selectiva bajo condiciones de hibridación moderadamente restrictivas a una secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1.

En otra realización, la divulgación proporciona un polipéptido aislado que comprende una identidad de secuencia de aminoácidos de al menos un 70 %, a menudo una identidad de secuencia mayor de un 90 % o de un 95 %, con respecto a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. En una realización, el polipéptido se une específicamente a los anticuerpos policlonales generados contra la SEQ ID NO: 1. En otra realización, el polipéptido tiene una actividad de canal de potasio. En una realización adicional, el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

En otro aspecto, la divulgación proporciona un anticuerpo que se une selectivamente a un polipéptido que comprende una identidad de aminoácidos de al menos un 70 %, a menudo una identidad de secuencia mayor de un 90 % o de un 95 %, con respecto a una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

En otro aspecto, la divulgación proporciona un vector de expresión que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende una identidad de secuencia de aminoácidos de al menos un 70 %, a menudo una identidad de secuencia mayor de un 90 % o de un 95 %, con respecto a la SEQ ID NO: 1. En otro aspecto, la invención proporciona una célula huésped transfectada con el vector.

La presente divulgación también proporciona un procedimiento de identificación de un compuesto que modula la actividad del canal de potasio, comprendiendo el procedimiento: (i) poner en contacto el compuesto con un polipéptido que comprende una identidad de secuencia de aminoácidos de al menos un 70 %, a menudo una identidad de secuencia mayor de un 90 % o de un 95 %, con respecto a la SEQ ID NO: 1; y ii) determinar el efecto funcional del compuesto sobre el polipéptido. En una realización, el polipéptido está unido a una fase sólida, por ejemplo, unido covalentemente a una fase sólida.

En una realización, el efecto funcional se determina midiendo los cambios en el flujo de iones. En otra realización, el efecto funcional se determina midiendo la unión del compuesto al polipéptido. En otra realización, el polipéptido es recombinante. En algunas realizaciones, el polipéptido... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de detección de células cancerosas en una muestra biológica de mamífero, comprendiendo el procedimiento la etapa de detectar la presencia de una molécula de ácido nucleico del KCNB que tiene una identidad de secuencia de ácidos nucleicos mayor de un 90 % a lo largo de su longitud con respecto a la secuencia de ácidos nucleicos establecida en la SEQ ID NO: 2, en el que un incremento de 1, 5 veces o más del ácido nucleico del KCNB detectado en comparación con el valor normal indica la presencia de células cancerosas.

2. Un procedimiento de detección de células cancerosas en una muestra biológica de mamífero, comprendiendo el procedimiento la etapa de detectar la presencia de una molécula de ácido nucleico del KCNB que comprende al menos 50 nucleótidos contiguos del ácido nucleico que tiene la secuencia establecida en la SEQ ID NO: 2 ó 5, en el que un incremento de 1, 5 veces o más del ácido nucleico del KCNB detectado en comparación con el valor normal indica la presencia de células cancerosas.

3. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, en el que el ácido nucleico del KCNB que se detecta comprende la secuencia establecida en la SEQ ID NO: 2.

4. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que el ácido nucleico del KCNB que se detecta comprende la secuencia establecida en la SEQ ID NO: 5.

5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la molécula de ácido nucleico se pone en contacto con una sonda que se hibrida selectivamente al ácido nucleico del KCNB bajo condiciones en las que la sonda se hibrida selectivamente a la molécula de ácido nucleico para formar un complejo de hibridación estable, y detectar el complejo de hibridación.

6. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que la etapa de puesta en contacto comprende además la etapa de amplificación del ácido nucleico del KCNB en una reacción de amplificación.

7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que la reacción de amplificación es una reacción en cadena de la polimerasa.

8. Un procedimiento de detección de células cancerosas en una muestra biológica de mamífero, comprendiendo el procedimiento las etapas de:

detectar una sobreexpresión de un polipéptido del KCNB que tiene una secuencia de aminoácidos que es idéntica en un 90 % a lo largo de su longitud con respecto a la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 1 en la muestra, en la que un incremento de 1, 5 veces o más del polipéptido del KCNB detectado cuando se compara con el normal indica la presencia de células cancerosas.

9. Un procedimiento de detección de células cancerosas en una muestra biológica de mamífero, comprendiendo el procedimiento las etapas de:

detectar una sobreexpresión de un polipéptido del KCNB que tiene al menos 50 péptidos contiguos de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 1 en la muestra, en la que un incremento de 1, 5 veces o más del polipéptido del KCNB detectado cuando se compara con el normal indica la presencia de células cancerosas.

10. El procedimiento de la reivindicación 8 ó 9, en el que el polipéptido del KCNB que se detecta comprende la secuencia establecida en la SEQ ID NO: 1.

11. El procedimiento de la reivindicación 8, 9 ó 10, en el que el polipéptido del KCNB se detecta usando un anticuerpo que se une específicamente al polipéptido.

12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que se marca el anticuerpo.

13. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la muestra es una muestra biológica humana.

14. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que las células cancerosas se seleccionan del grupo que consiste en células de cáncer de mama, células de cáncer de pulmón, células de cáncer de colon y células de cáncer de próstata.

15. El procedimiento de la reivindicación 14, en el que las células cancerosas son células de cáncer de mama.

16. El procedimiento de la reivindicación 14, en el que las células cancerosas son células de cáncer de pulmón.

17. El uso de un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido del KCNB que comprende una identidad de secuencia de aminoácidos mayor de un 90 % a lo largo de su longitud con respecto a la secuencia de

aminoácidos establecida en la SEQ ID NO: 1 para detectar células cancerosas en una muestra biológica de mamífero.

18. El uso de un anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido del KCNB que comprende al menos 50

péptidos contiguos de la secuencia de aminoácidos establecida en la SEQ ID NO: 1 para detectar células 5 cancerosas en una muestra biológica de mamífero.

19. El uso de la reivindicación 17, en el que se marca el anticuerpo.

20. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 17 ó 18, en el que la muestra es una muestra biológica humana.

21. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 17 a 20, en el que las células cancerosas se seleccionan del

grupo que consiste en células de cáncer de mama, células de cáncer de pulmón, células de cáncer de colon y 10 células de cáncer de próstata.

22. El uso de la reivindicación 21, en el que las células cancerosas son células de cáncer de mama.

23. El uso de la reivindicación 21, en el que las células cancerosas son células de cáncer de pulmón.

Figura 1

Figura 2

Figura 3

Figura 4