Un anticuerpo humanizado o fragmento de unión a epítopo del mismo que comprende al menos una región variable de cadena pesada al menos un 98% idéntica a una secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº:

10 ó 11 y al menos una región variable de cadena ligera al menos un 98% idéntica a una secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 8, en el que dicha al menos una región variable de cadena pesada o fragmento de la misma comprende tres regiones determinantes de complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por las SEC ID Nº: 1, 21 y 3, respectivamente y en el que dicha al menos una región variable de cadena ligera o fragmento de la misma comprende tres regiones determinantes de complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por las SEC ID Nº: 4, 5 y 6 respectivamente

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a un anticuerpo monoclonal murino anti-glucótopo CA6, y versioneshumanizadas o revestidas del mismo. La presente invención también se refiere a fragmentos de unión a epítopo delanticuerpo monoclonal anti-glucótopo CA6, así como a fragmentos de unión a epítopo de versiones humanizadas y revestidas del anticuerpo monoclonal anti-glucótopo CA6.

La presente invención se refiere adicionalmente a conjugados citotóxicos que comprenden un agente deunión celular y un agente citotóxico, composiciones terapéuticas que comprenden el conjugado, métodos para usarlos conjugados en la inhibición del crecimiento celular y el tratamiento de enfermedades, y un kit que comprende elconjugado citotóxico. En particular, el agente de unión celular es un anticuerpo monoclonal, o fragmento de unión a epítopo del mismo, que reconoce y se une al glucótopo CA6 o una versión humanizada o revestida del mismo.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Ha habido numerosos intentos por desarrollar agentes terapéuticos anti-cáncer que destruyan específicamente células cancerosas diana sin dañar las células y el tejido no cancerosas adyacente. Dichos agentesterapéuticos tienen el potencial de mejorar enormemente el tratamiento del cáncer en pacientes humanos.

Un enfoque prometedor ha sido unir agentes de unión celular, tales como anticuerpos monoclonales, confármacos citotóxicos (Sela et al., en Immunoconjugates 189-216 (C. Vogel, ed. 1987); Ghose et al., en Targeted Drugs 1-22 (E. Goldberg, ed. 1983); Diener et al., en Antibody mediated delivery systems 1-23 (J. Rodwell, ed.1988); Pietersz et al., en Antibody mediated delivery systems 25-53 (J. Rodwell, ed. 1988); Bumol et al., en Antibodymediated delivery systems 55-79 (J. Rodwell, ed. 1988). Dependiendo de la selección del agente de unión celular,estos conjugados citotóxicos pueden diseñarse para que reconozcan y se unan solamente a tipos específicos decélulas cancerosas, en base al perfil de expresión de moléculas expresadas sobre la superficie de dichas células.

Se han usado fármacos citotóxicos tales como metotrexato, daunorrubicina, doxorrubicina, vincristina, vinblastina, melfalán, mitomicina C, y clorambucil en dichos conjugados citotóxicos, unidos a una diversidad deanticuerpos monoclonales mirinos. En algunos casos, las moléculas de fármacos se unieron a las moléculas deanticuerpo a través de una molécula vehículo intermediaria tal como albúmina sérica (Garnett et al., 46 Cancer Res. 2407-2412 (1986); Ohkawa et al., 23 Cancer Immunol. Immunother. 81-86 (1986); Endo et al., 47 Cancer Res. 10761080 (1980)), dextrano (Hurwitz et al., 2 Appl. Biochem. 25-35 (1980); Manabi et al, 34 Biochem. Pharmacol. 289291 (1985); Dillman et al., 46 Cancer Res. 4886-4891 (1986); Shoval et al., 85 Proc. Natl. Acad. Sci. 8276-8280(1988)), o ácido poliglutámico (Tsukada et al., 73 J. Natl. Canc. Inst. 721-729(1984); Kato et al., 27 J. Med. Chem.1602-1607 (1984); Tsukada et al., 52 Br. J. Cancer 111-116 (1985)).

Como ejemplo de un conjugado específico que se ha mostrado algo prometedor, está el conjugado delanticuerpo C242, dirigido contra CanAg, un antígeno expresado en tumores colorrectales y pancreáticos, y elderivado de maitansina DM1 (Liu et al., Proc Natl Acad Sci USA, 93: 8618-8623 (1996)). La evaluación in vitro de este conjugado indicó que su afinidad de unión hacia CanAg expresada sobre la superficie celular era elevada con un valor de Kd aparente de 3 x 10-11 M, y su potencia citotóxica para células CanAg positivas era elevada con una IC50 de 6 x 10-11 M. Esta citotoxicidad era dependiente de antígeno ya que se bloqueaba por un exceso de anticuerpo no conjugado, y ya que las células negativas para el antígeno eran más de 100 veces menos sensibles alconjugado. Otros ejemplos de conjugados de anticuerpo-DM1 tanto con alta afinidad por células diana respectivas y alta citotoxicidad selectiva de antígeno incluyen los de huN901, una versión humanizada de un anticuerpo contra CD56 humano; huMy9-6, una versión humanizada de un anticuerpo contra CD33 humana; huC242, una versiónhumanizada de un anticuerpo contra el epítopo CanAg Muc1; huJ591, un anticuerpo desinmunizado contra PSMA;trastuzumab, un anticuerpo humanizado contra Her2/neu; y bivatuzumab, un anticuerpo humanizado contra CD44v6.

El desarrollo de conjugados citotóxicos adicionales que reconozcan específicamente tipos particulares de células cancerosas será importante en la mejora continuada de los métodos usados para tratar a pacientes concáncer.

Para ese fin, la presente invención se refiere al desarrollo de anticuerpos que reconozcan y se unan amoléculas/receptores expresados sobre la superficie de células cancerosas, y al desarrollo de nuevos conjugados citotóxicos que comprendan agentes de unión celular, tales como anticuerpos, y agentes citotóxicos que se dirijanespecíficamente a las moléculas/receptores expresados sobre la superficie de células cancerosas.

Más específicamente, la presente invención se refiere a la caracterización de un nuevo sialoglucótopo CA6 en el receptor de mucina Muc1 expresado por células cancerosas, y a la provisión de anticuerpos, preferiblemente anticuerpos humanizados, que reconozcan el nuevo sialoglucótopo CA6 de la mucina Muc1 y quepuedan usarse para inhibir el crecimiento de una célula que expresa el glucótopo CA6 en el contexto de un agentecitotóxico.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona anticuerpos humanizados que reconocen específicamente y se unen aun nuevo sialoglucótopo CA6 del receptor de mucina Muc1, o un fragmento de unión a epítopo del mismo. En otrarealización, la presente invención incluye un anticuerpo humanizado, o un fragmento de unión a epítopo del mismo,que reconoce el nuevo sialoglucótopo CA6 ("el glucótopo CA6") del receptor de mucina Muc1. En un primer aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo humanizado de acuerdo con la reivindicación 1.

La invención se refiere a versiones revestidas o humanizadas del anticuerpo monoclonal murino anti-CA6,DS6 donde los restos expuestos en superficie del anticuerpo, o sus fragmentos de unión a epítopo, estánreemplazados tanto en la cadena ligera como en la cadena pesada para parecerse mucho más a las superficies deanticuerpos humanos conocidos. Los anticuerpos humanizados y los fragmentos de unión a epítopo de los mismos5 de la presente invención tienen propiedades mejoradas ya que son mucho menos inmunogénicos (o completamente no inmunogénicos) en sujetos humanos a los que se administran que las versiones completamente murina. Portanto, los anticuerpos DS6 humanizados y los fragmentos de unión a epítopo de los mismos de la presente invenciónreconocen específicamente un nuevo sialoglucótopo en el receptor de mucina Muc1, es decir, el glucótopo CA6, mientras que no son inmunogénicos para un ser humano. Los anticuerpos humanizados y los fragmentos de unión aepítopo de los mismos pueden conjugarse con un fármaco, tal como un maitansinóide, para formar un profármaco que tenga citotoxicidad específica hacia células que expresan el antígeno dirigiendo el fármaco al sialoglucótopo CA6 Muc1. Los conjugados citotóxicos que comprenden dichos anticuerpos y fármacos pequeños, altamente tóxicos (por ejemplo, maitansinóides, taxanos, y análogos de CC-1065) por tanto pueden usarse como agente terapéuticopara el tratamiento de tumores, tales como tumores de mama y ovario.

15 [0012] Las versiones humanizadas del anticuerpo DS6 de la presente invención se caracterizan completamenteen este documento con respecto a sus secuencias de aminoácidos respectivas de las regiones variables tanto de lacadena ligera como de la cadena pesada, las secuencias de ADN de los genes de las regiones variables de cadenaligera y cadena pesada, la identificación de las CDR, la identificación de sus aminoácidos de superficie, y descripción de un medio para su expresión en forma recombinante.

El anticuerpo DS6 humanizado o un fragmento de unión a epítopo del mismo tiene una cadena pesadaque incluye las CDR que tienen las secuencias de aminoácidos representadas por las SEC ID Nº: 1, 21 y 3. S Y N M H (SEC ID Nº: 1), Y I Y P O N G A T N (SEC ID Nº: 21) G D S V P F A Y (SEC ID Nº: 3),

y que tiene una cadena ligera que comprende las CDR que tienen las secuencias de aminoácidos representadas por30 las SEC ID Nº: 4-6:

S A H S S V SF M H (SEC ID Nº: 4), S T S S L... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo humanizado o fragmento de unión a epítopo del mismo que comprende al menos una regiónvariable de cadena pesada al menos un 98% idéntica a una secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 10 ó5 11 y al menos una región variable de cadena ligera al menos un 98% idéntica a una secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 8, en el que dicha al menos una región variable de cadena pesada ofragmento de la misma comprende tres regiones determinantes de complementariedad secuenciales quetienen secuencias de aminoácidos representadas por las SEC ID Nº: 1, 21 y 3, respectivamente y en el quedicha al menos una región variable de cadena ligera o fragmento de la misma comprende tres regiones

10 determinantes de complementariedad secuenciales que tienen secuencias de aminoácidos representadas por las SEC ID Nº: 4, 5 y 6 respectivamente.

2. El anticuerpo o fragmento de unión a epítopo del mismo de la reivindicación 1, en el que dicha regiónvariable de cadena ligera o fragmento de la misma tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 8.

3. El anticuerpo o fragmento de unión a epítopo del mismo de la reivindicación 1, en el que dicha regiónvariable de cadena pesada o fragmento de la misma tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº:10 ola SEC ID Nº:11.

15

20 4. Un polinucleótido que codifica un anticuerpo o un fragmento de unión a epítopo del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2.

5. Un polinucleótido que codifica una cadena ligera o pesada de un anticuerpo o un fragmento de unión aepítopo del mismo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2.

6. Un vector que comprende el polinucleótido de la reivindicación 4.

7. Un vector que comprende el polinucleótido de la reivindicación 5.

30 8. El vector de la reivindicación 6, siendo dicho vector un vector de expresión que expresa dicho anticuerpo o fragmento de unión a epítopo.

25

9. El vector de la reivindicación 7, siendo dicho vector un vector de expresión que expresa dicho anticuerpo ofragmento de unión a epítopo.

35

10. Un conjugado citotóxico que comprende un agente de unión celular y un agente citotóxico, en el que dicho agente de unión celular comprende el anticuerpo humanizado o fragmento de unión a epítopo del mismo delas reivindicaciones 1-3.

40 11. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 10, en el que dicho agente de unión celular y dicho agente citotóxico están unidos covalentemente.

12. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 10, en el que dicho agente de unión celular y dichoagente citotóxico están unidos covalentemente a través de un grupo enlazador de PEG.

45

13. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 10, en el que dicho agente de unión celular y dichoagente citotóxico están unidos covalentemente a través de una funcionalidad tiol o disulfuro de dicho agentecitotóxico.

50 14. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 10, en el que dicho fragmento de un anticuerpo se selecciona entre el grupo compuesto por un fragmento Fab, un fragmento Fab', un fragmento F(ab')2, unfragmento Fd, un fragmento Fv de cadena sencilla (scFv), un anticuerpo de cadena sencilla, un fragmento Fvunido por disulfuro (sdFv) y un fragmento que comprende un dominio VL o VH.

55 15. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 10, en el que dicho agente citotóxico es un miembro seleccionado entre el grupo compuesto por un compuesto maitansinoide, un compuesto taxoide, un compuesto CC-1065, un compuesto de dolastatina, un compuesto de daunorrubicina, y un compuesto dedoxorrubicina.

60 16. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 15, en el que dicho agente citotóxico es la maitansina DM1 de fórmula (I):

**(Ver fórmula)**

17. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 15, en el que dicho agente citotóxico es la maitansina DM4 de fórmula (II):

18. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 15, en el que dicho agente citotóxico es unamaitansina de fórmula (III):

en la que: Y' representa (CR7CR8)l(CR9=CR10)pC=CqAr(CR5CR6)mDu(CR11=CR12)rC=C)sBt(CR3CR4)nCR1R2SZ, donde:

15 R1 y R2 son cada uno independientemente CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, fenilo, fenilosustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo, y además R2 puede ser H; A, B, D son cicloalquilo o cicloalquenilo que tiene 3-10 átomos de carbono, arilo simple o sustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo;

20 R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R11, y R12 son cada uno independientemente H, CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10átomos de carbono, fenilo, fenilo sustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo; l, m, n, o, p, q, r, s, y t son cada uno independientemente 0 o un número entero de 1 a 5, con la condición deque al menos dos de l, m, n, o, p, q, r, s y t no sean cero en cualquier momento dado; y Z es H, SR o -COR, donde R es alquilo o alquenilo lineal que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo oalquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, o arilo simple o sustituido o un radicalheterocíclico aromático o heterocicloalquilo.

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

19. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 18, en el que R1 es H, R2 es metilo y Z es H.

20. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 18, en el que R1 y R2 son metilo y Z es H.

21. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 18, en el que R1 es H, R2 es metilo, y Z es -SCH3.

22. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 18, en el que R1 y R2 son metilo, y Z es -SCH3.

15 23. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 15, en el que dicho agente citotóxico es una maitansina seleccionada entre el grupo compuesto por las fórmulas (IV-L), (IV-D), y (IV-D,L):

R1 y R2 son cada uno independientemente CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal que tiene de 1 a 10 0 átomosde carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, fenilo, fenilosustituido, o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo, y además R2 puede ser H; R3, R4, R5, R6, R7 y R8 son cada uno independientemente H, CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal que tiene de

25 1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, fenilo, fenilo sustituido, o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo; l, m y n son cada uno independientemente un número entero de 1 a 5, y además n puede ser 0; Z es H, SR o -COR donde R es alquilo o alquenilo lineal o ramificado que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, o arilo simple o sustituido o un radicalheterocíclico aromático o heterocicloalquilo; y May representa un maitansinoide que alberga la cadena lateral en C-3, C-14 hidroximetilo, C-15 hidroxi o C20 desmetilo.

24. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 23, en el que R1 es H, R2 es metilo, R5, R6, R7, y R835 son cada uno H, l y m son cada uno 1, n es 0, y Z es H.

25. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 23, en el que R1 y R2 son metilo, R5, R6, R7, R8 son cada uno H, l y m son 1, n es 0, y Z es H.

26. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 23, en el que R1 es H, R2 es metilo, R5, R6, R7, y R8 son cada uno H, l y m son cada uno 1, n es 0, y Z es -SCH3.

27. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 23, en el que R1 y R2 son metilo, R5, R6, R7, R8 son cada uno H, l y m son 1, n es 0, y Z es -SCH3.

45

28. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 23, en el que el agente citotóxico está representadopor la fórmula (IV-L).

29. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 15, en el que dicho agente citotóxico es unamaitansina de fórmula (V):

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

en la que: Y representa (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2SZ, donde:

5 R1 y R2 son cada uno independientemente CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, fenilo, fenilosustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo, y además R2 puede ser II;R3, R4, R5, R6, R7 y R8 son cada uno independientemente H, CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal que tiene de1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono,

10 fenilo, fenilo sustituido, o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo; l, m y n son cada uno independientemente un número entero de 1 a 5, y además n puede ser 0; yZ es H, SR o -COR, donde R es alquilo o alquenilo lineal que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo oalquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, o arilo simple o sustituido o un radicalheterocíclico aromático o heterocicloalquilo.

15

30. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 29, en el que R1 es H, R2 es metilo, R5, R6, R7, y R8 son cada uno H; l y m son cada uno 1; n es 0; y Z es H.

31. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 29, en el que R1 y R2 son metilo; R5, R6, R7, R8 son20 cada uno H, l y m son 1; n es 0; y Z es H.

32. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 29, en el que R1 es H, R2 es metilo, R5, R6, R7, y R8 son cada uno H, l y m son cada uno 1, n es 0, y 7, es -SCH3.

25 33. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 29, en el que R1 y R2 son metilo, R5, R6, R7, R8 son cada uno H, l y m son 1, n es 0, y Z es -SCH3.

**(Ver fórmula)**

R1 y R2 son cada uno independientemente CH3, C2H2, alquilo o alquenilo lineal que tiene de 1 a 10 átomos

35 de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, fenilo, fenilo sustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo, y además R2 puede ser H; R3, R4, R5, R6, R7 y R8 son cada uno independientemente H, CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal o cíclico que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos decarbono, fenilo, fenilo sustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo;

40 l, m y n son cada uno independientemente un número entero de 1 a 5, y además n puede ser 0; Z2 es SR o COR, donde R es alquilo o alquenilo lineal que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, o arilo simple o sustituido o un radicalheterocíclico aromático o heterocicloalquilo; y May es un maitansinoide.

**(Ver fórmula)**

R1 y R2 son cada uno independientemente CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal o ramificado que tiene de 1 a10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, fenilo, fenilosustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo, y además R2 puede ser H;

15 A, B, y D cada uno independientemente es cicloalquilo o cicloalquenilo que tiene 3 a 10 átomos de carbono, arilo simple o sustituido, o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo; R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R11, y R12 son cada uno independientemente H, CH3, C2H5, alquilo o alquenilolineal que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10átomos de carbono, fenilo, fenilo sustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo;

20 l, m, n, o, p, q, r, s, y t son cada uno independientemente 0 o un número entero de 1 a 5, con la condición de que al menos dos de l, m, n, o, p, q, r, s y t no sean cero en cualquier momento dado; y Z2 es SR o -COR, donde R es alquilo o alquenilo lineal que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo oalquenilo ramificado o cíclico que tiene 3-10 átomos de carbono, o arilo simple o sustituido o un radicalheterocíclico aromático o heterocicloalquilo.

25

36. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 35, en el que R1 es H y R2 es metilo.

37. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 15, en el que dicho agente citotóxico es unamaitansina de fórmula (VIII):

30

**(Ver fórmula)**

en la que: Y1' representa(CR7CR8)l(CR9=CR10)p(C≡C)qAr(CR5CR6)mDu(CR11=CR12)r(C≡C)sBt(CR3CR4)nCR1R2S-, donde:

5 A, B, y D, cada uno independientemente es cicloalquilo o cicloalquenilo que tiene 3-10 átomos de carbono, arilo simple o sustituido, o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo; R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R11, y R12 son cada uno independientemente H, CH3, C2H5, alquilo o alquenilolineal que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10átomos de carbono, fenilo, fenilo sustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo; y

10 l, m, n, o, p, q, r, s, y t son cada uno independientemente 0 o un número entero de 1 a 5, con la condición de que al menos dos de l, m, n, o, p, q, r, s y t no sean cero en cualquier momento dado.

38. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 37, en el que R1 es H y R2 es metilo.

15 39. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 37, en el que R1 y R2 son metilo.

de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, fenilo, fenilo

25 sustituido, un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo, y además R2 puede ser H; R3, R4, R5, R6, R7 y R8 son cada uno independientemente H, CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal que tiene de1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono,fenilo, fenilo sustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo; l, m y n son cada uno independientemente un número entero de 1 a 5, y además n puede ser 0; y

30 May representa un maitansinol que alberga la cadena lateral en C-3, C-14 hidroximetilo, C-15 hidroxi o C-20 desmetilo.

41. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 40, en el que R1 es H y R2 es metilo o R1 y R2 son metilo.

42. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 40, en el que R1 es H, R2 es metilo, R5, R6, R7 y R8 son cada uno H; l y m son cada uno 1; n es 0.

35

43. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 40, en el que R1 y R2 son metilo; R5, R6, R7 y R8 son40 cada uno H; l y m son 1; n es 0.

44. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 41, en el que el maitansinoide está representado porla fórmula (IX-L).

45 45. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 42, en el que el maitansinoide está representado por la fórmula (IX-L).

46. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 43, en el que el maitansinoide está representado porla fórmula (IX-L).

50

47. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 15, en que dicho agente citotóxico es una maitansina de fórmula (X):

**(Ver fórmula)**

en la que: Y1 representa (CR7R8)l(CR5R6)m(CR3R4)nCR1R2S-, donde:

5 R1 y R2 son cada uno independientemente CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal que tiene de 1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono, fenilo, fenilosustituido, un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo, y además R2 puede ser H; R3, R4, R5, R6, R7 y R8 son cada uno independientemente H, CH3, C2H5, alquilo o alquenilo lineal que tiene de1 a 10 átomos de carbono, alquilo o alquenilo ramificado o cíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono,

10 fenilo, fenilo sustituido o un radical heterocíclico aromático o heterocicloalquilo; l, m y n son cada uno independientemente un número entero de 1 a 5, y además n puede ser 0; yMay representa un maitansinol que alberga la cadena lateral en C-3, C-14 hidroximetilo, C-15 hidroxi o C-20 desmetilo.

15 48. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 47, en el que R1 es H, R2 es metilo, R5, R6, R7 y R8 son cada uno H, l y m son cada uno 1, y n es 0.

49. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 47, en el que R1 y R2 son metilo; R5, R6, R7 y R8 son cada uno H; l y m son 1; y n es 0.

50. El conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 10, en el que dicho agente citotóxico es DM1 o DM4.

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52. Un método in vitro para inhibir el crecimiento de una célula que expresa el glucótopo CA6, que comprende poner en contacto una célula que expresa el glucótopo CA6 con el conjugado citotóxico de acuerdo con lareivindicación 10.

53. El método para inhibir el crecimiento de una célula que expresa el glucótopo CA6 de acuerdo con lareivindicación 52, en el que el conjugado citotóxico comprende una versión humanizada del anticuerpomurino DS6 o un fragmento de unión a epítopo del mismo como agente de unión celular y DM1 o DM4 comoagente citotóxico.

54. El método para inhibir el crecimiento de una célula que expresa el glucótopo CA6 de acuerdo con lareivindicación 52, en el que el conjugado citotóxico comprende una versión humanizada del anticuerpo

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murino DS6 o un fragmento de unión a epítopo del mismo como agente de unión celular y un taxano comoagente citotóxico.

55. El método para inhibir el crecimiento de una célula que expresa el glucótopo CA6 de acuerdo con la5 reivindicación 52, en el que dicha inhibición del crecimiento provoca la muerte de la célula.

56. El método para inhibir el crecimiento de una célula que expresa el glucótopo CA6 de acuerdo con lareivindicación 52, en el que dicho método se realiza ex vivo.

10 57. Una composición terapéutica, que comprende un conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 10 y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

58. La composición terapéutica de acuerdo con la reivindicación 57, en la que el conjugado citotóxico comprende

una versión humanizada del anticuerpo murino DS6 o un fragmento de unión a epítopo del mismo como15 agente de unión celular y DM1 o DM4 como agente citotóxico.

59. La composición terapéutica de acuerdo con la reivindicación 57, en la que el conjugado citotóxico comprendeuna versión humanizada del anticuerpo murino DS6 o un fragmento de unión a epítopo del mismo comoagente de unión celular y un taxano como agente citotóxico.

60. Uso de la composición terapéutica de acuerdo con la reivindicación 57, en la preparación de un medicamentopara tratar el cáncer.

61. La composición terapéutica de la reivindicación 57, para su uso en el tratamiento del cáncer.

62. El uso o composición de las reivindicaciones 60 y 61, en el que el conjugado citotóxico comprende unaversión humanizada del anticuerpo murino DS6 o un fragmento de unión a epítopo del mismo como agentede unión celular y DM1 o DM4 como agente citotóxico.

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30 63. El uso o composición de las reivindicaciones 60 y 61, en el que el conjugado citotóxico comprende una versión humanizada del anticuerpo murino DS6 o un fragmento de unión a epítopo del mismo como agentede unión celular y un taxano como agente citotóxico.

64. El uso o composición de las reivindicaciones 60 y 61, en el que el cáncer es uno en el que se expresa o 35 sobre-expresa el glucótopo CA6.

65. El uso o composición de las reivindicaciones 60 y 61, en el que el cáncer se selecciona entre el grupocompuesto por carcinoma de ovario seroso, carcinoma de ovario endometrioide, neoplasma del cuello delútero, neoplasma del endometrio, neoplasma de la vulva, carcinoma de mama, tumor pancreático, y tumor

40 del urotelio.

66. Un kit que comprende un conjugado citotóxico de acuerdo con la reivindicación 10, que comprende adicionalmente: a) un compartimiento que comprende el conjugado citotóxico.

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67. El kit de acuerdo con la reivindicación 66, en el que dicho conjugado citotóxico comprende una versiónhumanizada del anticuerpo murino DS6 o un fragmento de unión a epítopo del mismo como agente de unión celular y DM1 o DM4 como agente citotóxico.

50 68. El kit de acuerdo con la reivindicación 66, en el que dicho conjugado citotóxico comprende una versión humanizada del anticuerpo murino DS6 o un fragmento de unión a epítopo del mismo como agente de unión celular y un taxano como agente citotóxico.

69. Un kit que comprende una composición terapéutica de acuerdo con la reivindicación 57, que comprende

55 adicionalmente: a) un compartimiento que comprende la composición terapéutica.

70. El kit de acuerdo con la reivindicación 69, en el que el conjugado citotóxico de la composición terapéutica

comprende una versión humanizada del anticuerpo murino DS6 o un fragmento de unión a epítopo del60 mismo como agente de unión celular y DM1 o DM4 como agente citotóxico.

71. El kit de acuerdo con la reivindicación 69, en el que el conjugado citotóxico de la composición terapéutica comprende una versión humanizada del anticuerpo murino DS6 o un fragmento de unión a epítopo delmismo como agente de unión celular y un taxano como agente citotóxico.