Métodos para la preparación de conjugados.

Un metodo para preparar un conjugado que comprende un agente de union a celulas (CBA) conjugado con un compuesto citotoxico con un grupo conector,

comprendiendo el metodo hacer reaccionar un compuesto citotoxico modificado con un CBA modificado a un pH de aproximadamente 4 a aproximadamente 9, en donde:

a) el CBA modificado comprende un residuo de un agente de reticulacion bifuncional unido al CBA, y el residuo comprende el grupo conector y un grupo que reacciona con tiol; y

b) el compuesto citotoxico modificado comprende un grupo tiol, y se representa por una de las siguientes formulas**Fórmula**

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en donde el compuesto citotoxico modificado se produce haciendo reaccionar un compuesto citotoxico que contiene imina que porta el grupo tiol con un reactivo que reacciona con imina, y en donde el compuesto citotoxico que contiene imina se representa por una de las siguientes formulas:**Fórmula**

o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo,

en donde:

el resto -C(Y)-N(H)- en las formulas (I') y (II') se produce a partir de la reaccion del reactivo que reacciona con imina con el compuesto citotoxico que contiene imina;

X' se selecciona de -H, un grupo protector de amina, un alquilo, alquenilo o alquinilo lineal, ramificado o ciclico opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 10 atomos de carbono, una unidad de polietilenglicol -(CH2CH2O)n-Rc, un arilo opcionalmente sustituido que tiene de 6 a 18 atomos de carbono, un anillo heteroarilo de 5 a 18 miembros opcionalmente sustituido que contiene uno o mas heteroatomos seleccionados independientemente de nitrogeno, oxigeno, y azufre, y un anillo heterociclico de 3 a 18 miembros opcionalmente sustituido que contiene de 1 a 6 heteroatomos seleccionados independientemente de O, S, N y P;

Y' se selecciona de -H, un grupo oxo, un alquilo, alquenilo o alquinilo lineal, ramificado o ciclico opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 10 atomos de carbono, un arilo de 6 a 18 miembros opcionalmente sustituido, un anillo heteroarilo de 5 a 18 miembros opcionalmente sustituido que contiene uno o mas heteroatomos seleccionados independientemente de nitrogeno, oxigeno, y azufre, un anillo heterociclico de 3 a 18 miembros opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 6 heteroatomos;

Rc es -H o un alquilo lineal o ramificado sustituido o insustituido que tiene de 1 a 4 atomos de carbono; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' y R4' se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en -H, un alquilo, alquenilo o alquinilo lineal, ramificado o ciclico opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 10 atomos de carbono, una unidad de polietilenglicol -(OCH2CH2)n-Rc, halogeno, guanidinio [-NH(C=NH)NH2], -OR, -NR'R'', -NO2, - NCO, -NR'COR'', -SR, un sulfoxido representado por -SOR', una sulfona representada por -SO2R', un sulfonato - SO3

-M+, un sulfato -OSO3

-M+, una sulfonamida representada por -SO2NR'R'', ciano, un azido, -COR', -OCOR', - OCONR'R'';

R, para cada aparicion, se selecciona independientemente del grupo que consiste en -H, un alquilo, alquenilo o alquinilo lineal, ramificado o ciclico opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 10 atomos de carbono, una unidad de polietilenglicol -(CH2CH2O)n-Rc, un arilo opcionalmente sustituido que tiene de 6 a 18 atomos de carbono, un anillo heteroarilo de 5 a 18 miembros opcionalmente sustituido que contiene uno o mas heteroatomos seleccionados independientemente de nitrogeno, oxigeno, y azufre, o un anillo heterociclico de 3 a 18 miembros opcionalmente sustituido que contiene de 1 a 6 heteroatomos seleccionados independientemente de O, S, N y P;

R' y R'' se seleccionan cada uno independientemente de -H, -OH, -OR, -NHR, -NR2, -COR, un alquilo, alquenilo o alquinilo lineal, ramificado o ciclico opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 10 atomos de carbono, una unidad de polietilenglicol -(CH2CH2O)n-Rc, y un anillo heterociclico de 3 a 18 miembros opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 6 heteroatomos seleccionados independientemente de O, S, N y P;

n es un numero entero de 1 a 24;

W se selecciona de C=O, C=S, CH2, BH, SO y SO2;

R6 es -H, -R, -OR, -SR, -NR'R'', -NO2, o, halogeno; Z y Z' se seleccionan independientemente de -(CH2)n'-, -(CH2)n'-CR7R8-(CH2)na'-, -(CH2)n'-NR9-(CH2)na'-, -(CH2)n'-O- (CH2)na'- y -(CH2)n'-S-(CH2)na'-;

n' y na' son iguales o diferentes, y se seleccionan de 0, 1, 2 y 3;

R7 y R8 son iguales o diferentes, y se seleccionan cada uno independientemente de -H, -OH, -SH, -COOH, -NHR', una unidad de polietilenglicol -(OCH2CH2)n-, un aminoacido, una unidad peptidica que porta de 2 a 6 aminoacidos, un alquilo lineal, ramificado o ciclico opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 10 atomos de carbono; R9 se selecciona independientemente de -H, un alquilo lineal, ramificado o ciclico opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 10 atomos de carbono, una unidad de polietilenglicol -(OCH2CH2)n-;

A y A' son iguales o diferentes, y se seleccionan independientemente de -O-, oxo (-C(=O)-), -CRR'O-, -CRR'-, -S-, -CRR'S-, -N(R5)- y -CRR'N(R5)-, R5 para cada aparicion es independientemente -H o un alquilo lineal o ramificado opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 10 atomos de carbono;

D y D' son iguales o diferentes, y estan independientemente ausentes o se seleccionan del grupo que consiste en un alquilo, alquenilo o alquinilo lineal, ramificado o ciclico opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 10 atomos de carbono, un aminoacido, un peptido que porta de 2 a 6 aminoacidos, y una unidad de polietilenglicol (-OCH2CH2)n-; y L esta ausente, o cuando esta presente, comprende el grupo tiol, o es una unidad de polietilenglicol (-OCH2CH2)n-, un alquilo o alquenilo lineal, ramificado o ciclico que tiene de 1 a 10 atomos de carbono, un grupo fenilo, un anillo heterociclico de 3 a 18 miembros o un anillo heteroarilo de 5 a 18 miembros que tiene de 1 a 6 heteroatomos seleccionados independientemente de O, S, N y P, en donde el alquilo, alquenilo, fenilo, o anillo heterociclico o heteroarilo esta opcionalmente sustituido; y

el reactivo que reacciona con imina se selecciona del grupo que consiste en un sulfito (H2SO3, H2SO2 o una sal de HSO3 -, SO3 2- o HSO2 - formada con un cation), un metabisulfito (H2S2O5 o una sal de S2O5 2- formada con un cation) y una ditionita (H2S2O4 o una sal de S2O4 2- formada con un cation).