Polipéptido que comprende la SEQ ID n.º 4 o la SEQ ID n.º 5

Antecedentes de la invención

Campo de la invención

La invención descrita en la presente memoria se refiere a los métodos para diseñar vectores que codifican epítopos para uso en composiciones, que incluyen, por ejemplo, composiciones farmacéuticas capaces de inducir una respuesta inmunitaria en un sujeto al que se administran las composiciones. La invención se refiere adicionalmente a los propios vectores. El o los epítopos expresados mediante tales vectores pueden estimular una respuesta inmunitaria celular contra una célula diana que muestra el o los epítopos.

Descripción de la técnica relacionada

El sistema inmunitario se puede clasificar en dos grupos efectores distintos. El primero es la inmunidad innata, en la que intervienen numerosos componentes celulares y factores solubles para responder a todas las exposiciones infecciosas. El otro es la respuesta inmunitaria adaptativa, que se ajusta para responder específicamente a epítopos precisos de los agentes infecciosos. La respuesta inmunitaria adaptativa se divide a su vez en dos grupos efectores conocidos como los sistemas inmunitarios celular y humoral. El grupo humoral se centra en la producción de anticuerpos desde los linfocitos B, mientras que el grupo celular implica la actividad citolítica de los linfocitos T citotóxicos.

Los linfocitos T citotóxicos (LTC) no reconocen los epítopos sobre los propios agentes infecciosos. En lugar de ello, los LTC detectan fragmentos de antígenos procedentes de los agentes infecciosos que se exponen en la superficie de las células infectadas. Como resultado, los antígenos resultan visibles a los LTC sólo después de que hayan sido procesados por las células infectadas y, por lo tanto, se expongan en la superficie de la célula.

Se ha establecido bien el procesamiento de los antígenos y el sistema de exposición en la superficie de las células. Los LTC reconocen antígenos peptídicos cortos, que se exponen en la superficie en asociación no covalente con moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) de clase I. Estos péptidos de clase I proceden a su vez de la degradación de las proteínas citosólicas.

Compendio de la invención

En la presente memoria se describen casetes de expresión, por ejemplo, para uso en vectores de vacuna, que codifican uno o más epítopos de mantenimiento embebidos, y métodos para diseñar y analizar tales casetes de expresión. Los epítopos de mantenimiento se pueden liberar del producto de traducción de tales casetes a través del procesamiento proteolítico mediante el inmunoproteasoma de las células presentadoras de antígenos profesionales (las CPAp). En la presente memoria se describen secuencias que flanquean el o los epítopos de mantenimiento, que se pueden alterar para favorecer la escisión mediante el inmunoproteasoma en la o las posiciones deseadas. Los epítopos de mantenimiento, sus usos y su identificación se describen en las solicitudes de patente de los EE.UU. n.º 09/560 465 y 09/561 074 tituladas EPITOPE SYNCRHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS y METHOD OF EPITOPE DISCOVERY, respectivamente; ambas se registraron el 28 de abril de 2000.

Ejemplos de epítopos de mantenimiento se describen en las solicitudes de patente de los EE.UU. provisionales tituladas EPITOPE SEQUENCES, n.º 60/282 211 registrada el 6 de abril de 2001; 60/337 017, registrada el 7 de noviembre de 2001; 60/363 210 registrada el 3/7/02; y 60/409 123, registrada el 5 de septiembre de 2002; y la solicitud de patente de los EE.UU. n.º 10/117 937, registrada el 4 de abril de 2002, que también se titula EPITOPE SEQUENCES.

En la presente memoria se describen el o los epítopos de mantenimiento que pueden estar flanqueados por secuencias arbitrarias o por secuencias que incorporan restos que se sabe que son favoritos en los sitios de escisión del inmunoproteasoma. Tal y como se utiliza en la presente memoria, la terminología «secuencias arbitrarias» se refiere a las secuencias elegidas sin tener en cuenta contexto de la secuencia nativa del epítopo, ni su capacidad para favorecer el procesamiento ni la función inmunitaria. En otras realizaciones de la invención se pueden disponer numerosos epítopos en orden de cabeza con cola. Estas disposiciones pueden estar construidas completamente a base de epítopos de mantenimiento. Asimismo, las disposiciones puede incluir una alternancia de epítopos de mantenimiento y de epítopos inmunitarios. Alternativamente, las disposiciones pueden incluir epítopos de mantenimiento flanqueados por epítopos inmunitarios, bien completos o truncados en su extremo distal. Además, las disposiciones pueden tener cualquier otro ordenamiento similar. No hay restricción sobre la colocación de un epítopo de mantenimiento en las posiciones terminales de la disposición. Los vectores pueden contener adicionalmente secuencias codificantes de proteínas auténticas o segmentos de las mismas que contienen agrupamientos de epítopos como fuente de epítopos inmunitarios. La terminología «auténtico» se refiere a secuencias de proteínas naturales.

Los agrupamientos de epítopos y sus usos se describen en las solicitudes de patente de los EE.UU. n.º 08/561 571 titulada EPITOPE CLUSTERS, registrada el 28 de abril de 2000; 10/005 905 titulada EPITOPE SYNCRHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS, registrada el 7 de noviembre de 2001; y 10/026 066, registrada el 7 de diciembre de 2001, también titulada EPITOPE SYNCRHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS.

**(Ver fórmula)**

En la presente memoria se describen métodos para detectar selectivamente las construcciones cuyo epítopo de mantenimiento se ha liberado. En las construcciones que contienen numerosos epítopos de mantenimiento, las realizaciones pueden incluir la detección para determinar qué epítopos están liberados. También se describe en la presente memoria un vector que contiene un epítopo embebido que se puede utilizar para inmunizar ratones transgénicos HLA, y a los LTC resultantes se les puede analizar su capacidad para reconocer las células diana que presentan el epítopo maduro. Las células diana que expresan el inmunoproteasoma se pueden transformar con el vector. La célula diana puede expresar el inmunoproteasoma bien constitutivamente, debido al tratamiento con interferón (IFN), o bien mediante manipulación genética, por ejemplo. A los LTC que reconocen el epítopo maduro se les puede analizar su capacidad para reconocer estas células diana. El epítopo embebido se puede preparar como un péptido sintético. El péptido sintético se puede someter entonces a digestión mediante una preparación de inmunoproteasoma in vitro, y los fragmentos resultantes se pueden analizar para determinar los sitios de escisión. Tales polipéptidos, recombinantes o sintéticos, de los cuales se pueden liberar con éxito los epítopos embebidos, también se pueden incorporar en composiciones inmunógenas.

La invención descrita en la presente memoria se refiere a la identificación de un polipéptido adecuado para la liberación de epítopos. En la presente memoria se describe un método para identificar un polipéptido adecuado para la liberación de epítopos que incluye, por ejemplo, las etapas de identificar un epítopo de interés; proporcionar una secuencia polipeptídica de sustrato que incluye el epítopo, en el que el polipéptido de sustrato permite el procesamiento por un proteasoma; poner en contacto el polipéptido de sustrato con una composición que incluye el proteasoma en unas condiciones que posibilitan que el proteasoma procese el polipéptido de sustrato; y analizar la liberación del epítopo.

El epítopo puede estar embebido en el polipéptido de sustrato, y, en algunos aspectos, el polipéptido de sustrato puede contener más de un epítopo, por ejemplo. Así mismo, el epítopo puede ser un epítopo de mantenimiento.

Se describe que el polipéptido de sustrato puede ser un péptido sintético. Opcionalmente, el polipéptido de sustrato puede estar incluido en una formulación que favorece la transferencia de proteínas. Alternativamente, el polipéptido de sustrato puede ser una proteína de fusión. La proteína de fusión puede contener además un dominio proteico que posea actividad de transferencia de proteínas. Además, la etapa de puesta en contacto puede incluir la inmunización con el polipéptido de sustrato.

En la presente memoria se describe que el polipéptido de sustrato puede estar codificado por un polinucleótido. La etapa de puesta en contacto puede incluir la inmunización con un vector que incluye el polinucleótido, por ejemplo. La inmunización... [Seguir leyendo]

1. Polipéptido que comprende la SEQ ID n.º 4 o la SEQ ID n.º 5. 5 2. Polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1, para usar en la inmunización de un mamífero. 3. Vector que codifica el polipéptido de la reivindicación 1, comprendiendo el vector la secuencia de SEQ ID n.º 9. 4. Vector que codifica el polipéptido de la reivindicación 1, que comprende la secuencia de SEQ ID n.º 4. 5. Célula transformada con un vector de acuerdo con la reivindicación 3 o 4. 6. Procedimiento in vitro para activar un linfocito T que comprende poner en contacto el vector de la reivindicación 3 o 4 con una CPA y poner en contacto dicha CPA con un linfocito T. 7. Vector de acuerdo con la reivindicación 3 o 4 para usar en la inmunización de un mamífero.