ANTICUERPOS HUMANOS MODIFICADOS ANTI-IGF-1R.

Un anticuerpo humano monoclonal o una porción de unión a antígeno del mismo que se une específicamente al receptor del factor de crecimiento insulinoide I humano (IGF-IR),

que comprende al menos una mutación somática contenida en una región de marco estructural de una región variable de dicho anticuerpo que se ha sustituido por un correspondiente residuo de aminoácido de línea germinal, en el que la región variable de la cadena ligera comprende los números de aminoácidos 23 a 130 de la SEC INº 5

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El factor de crecimiento insulinoide (IGF-I) es un polipéptido de 7,5 kDa que circula en el plasma a elevadas concentraciones y se detecta en la mayoría de los tejidos. El IGF-I estimula la diferenciación celular y la proliferación celular, y la mayoría de los tipos de células de mamíferos lo requieren para una proliferación constante. Estos tipos celulares incluyen, entre otros, fibroblastos diploides humanos, células epiteliales, células de músculo liso, linfocitos T, células nerviosas, mielocitos, condrocitos, osteoblastos y células troncales de la médula espinal.

La primera etapa en la ruta de transducción que da lugar a la proliferación o la diferenciación celular estimulada por IGF-I es la unión de IGF-I o IGF-II (o insulina a concentraciones suprafisiológicas) al receptor de IGF-I. El receptor de IGF-I está compuesto por dos tipos de subunidades: la subunidad alfa (una proteína de 130-135 kDa que es completamente extracelular y participa en la unión del ligando) y una subunidad beta (una proteína transmembrana de 95 kDa, con dominios citoplásmicos y transmembrana). El IGF-IR pertenece a la familia de los receptores de factores de crecimiento tirosina quinasa (Ullrich et al., Cell 61: 203-212, 1990), y es similar estructuralmente al receptor de la insulina (Ullrich et al., EMBO J. 5: 2503-2512, 1986). El IGF-IR se sintetiza inicialmente como un polipéptido prorreceptor de cadena única, que se procesa por glicosilación, proteólisis y unión covalente para configurar un heterotetrámero maduro de 460 kDa que comprende dos subunidades alfa y dos subunidades beta. La(s) subunidad(es) beta posee(n) una actividad tirosina quinasa activada por ligando. Esta actividad está involucrada en las rutas de señalización que median la acción del ligando, lo que implica la autofosforilación de la subunidad beta y la fosforilación de los sustratos de IGF-IR.

Hay evidencias considerables del papel de IGF-I o IGF-IR en el mantenimiento de las células tumorales in vitro e in vivo. Los niveles de IGF-IR están elevados en los tumores de pulmón (Kaiser et al., J. Cancer Res. Clin Oncol. 119: 665-668, 1993; Moody et al., Life Sciences 52: 1161-1173, 1993; Macauley et al., Cancer Res., 50: 2511-2517, 1990), mama (Pollak et al., Cancer Lett. 38: 223-230, 1987; Foekens et al., Cancer Res. 49: 7002-7009, 1989; Cullen et al., Cancer Res. 49: 7002-7009, 1990; Arteaga et al., J. Clin. Invest. 84: 14181423, 1989), próstata y colon (Remaole-Bennet et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 75: 609616, 1992; Guo et al., Gastroenterol. 102: 1101-1108, 1992). La expresión desregulada de IGF-I en el epitelio prostático conduce a una neoplasia en ratones transgénicos (DiGiovanni et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 3455-60, 2000). Además, IGF-I parece ser un estimulante autocrino de los gliomas humanos (Sandberg-Nordqvist et al., Cancer Res. 53: 2475-2478, 1993), mientras que IGF-I estimula el crecimiento de los fibrosarcomas que sobreexpresan IGF-IR (Butler et al., Cancer Res. 58: 3021-27, 1998). Por otro lado, las personas con concentraciones «normales elevadas» de IGF-I tienen un riesgo aumentado de cáncer común comparado con personas con concentraciones de IGF-I en el intervalo de «normal bajo» (Rosen et al., Trends Endocrinol. Metab. 10: 136-41, 1999). Para una recapitulación del papel que juega la interacción entre IGF-I y el receptor de IGF-I en el crecimiento de varios tumores humanos, véase Macaulay, Br. J. Cancer, 65: 311-320, 1992.

La restricción calórica es la intervención más eficaz y reproducible para aumentar la esperanza de vida en una variedad de especies animales, incluidos los mamíferos. También es el tratamiento más potente, que actúa ampliamente en la prevención del cáncer en modelos experimentales de carcinogénesis. Un mecanismo biológico clave, causante de muchos de sus efectos beneficiosos, es la ruta del factor de crecimiento insulinoide 1 (Hursting et al., Annu. Rev. Med. 54:131-52, 2003).

El documento EP-0629240B1 se refiere a la conversión de una secuencia de un anticuerpo en una secuencia de la línea germinal, mediante tecnología de ADN recombinante, para intentar disminuir la capacidad inmunógena cuando se administra a un paciente. El documento WO02/066058A1 se refiere a anticuerpos dirigidos frente al receptor del EGF (HER1) que están modificados de otra manera para reducir su propensión a inducir una respuesta inmune.

Considerando las funciones que tienen IGF-I y IGF-IR en trastornos tales como el cáncer y otros trastornos proliferativos cuando se sobreexpresan IGF-I y/o IGF-IR, y las funciones que tienen IGF-I y IGF-IR a bajas concentraciones en trastornos, cuando tanto IGF-I y/o IGF-IR se subexpresan, es deseable generar anticuerpos frente a IGF-IR que se puedan usar tanto para inhibir como para estimular IGF-IR. Tales anticuerpos se describen, por ejemplo, en el documento WO 02/05359, publicado el 11 de julio de 2002. El texto de esta publicación, incluyendo todas las secuencias descritas, se incorpora en la presente memoria como referencia. Los anticuerpos frente al IGF-IR también se describen en los documentos WO 03/100008, publicado el 4 de diciembre de 2003, WO 03/106621, publicado el 24 de diciembre de 2003 y WO 03/59951, publicado el 24 de julio de 2003. SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un anticuerpo monoclonal humano o una porción de unión a antígeno del mismo que se une específicamente al receptor del factor de crecimiento insulinoide I humano (IGF-IR), que comprende al menos una mutación somática contenida en una región variable de dicho anticuerpo que se ha sustituido por un correspondiente residuo de aminoácido de línea germinal, en el que la región variable de la cadena ligera comprende los

números de aminoácidos 23 a 130 de la SEC Nº 5.

En otra realización, la secuencia de la región variable de la cadena ligera del anticuerpo comprende tres mutaciones de marco conservado que la convierten en una secuencia de aminoácidos codificada por un gen A30 de la línea germinal. En una realización preferida, la región variable de la cadena ligera comprende los aminoácidos 23 a 130 de la secuencia de aminoácidos de ID SEC Nº 5. En una realización aún más preferida, la cadena ligera del anticuerpo humano comprende los aminoácidos 23 a 236 de ID SEC Nº 5.

En una realización de la invención, la secuencia de la región variable de la cadena pesada del anticuerpo comprende dos mutaciones de marco conservado que la convierten en la secuencia de aminoácidos codificada por un gen DP-35 de la línea germinal. En una realización preferida, la región variable de la cadena pesada comprende los aminoácidos 20 a 144 de ID SEC Nº 3. En una realización aún más preferida, la cadena pesada del anticuerpo humano comprende los aminoácidos 20 a 470 de ID SEC Nº 3 y la cadena ligera comprende los aminoácidos 23 a 236 de ID SEC Nº 5.

En otra realización, la cadena pesada del anticuerpo de la invención carece de una lisina terminal. En concreto, la invención se refiere a un anticuerpo en el que la cadena pesada comprende los aminoácidos 20 a 469 de ID SEC Nº 3 y la cadena ligera comprende los aminoácidos 23 a 236 de ID SEC Nº 5.

La invención se refiere también a una composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer, composición farmacéutica que comprende el anticuerpo humano modificado de la invención, en combinación con un agente antineoplásico, un agente quimioterapéutico o un agente antitumoral y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención se refiere también a un anticuerpo humano o una porción de unión a antígeno del mismo de la invención para su uso en el tratamiento del cáncer en seres humanos. En una realización, el tratamiento comprende la administración de un agente antineoplásico, antitumoral, antiangiogenético o quimioterapéutico junto con el anticuerpo de la presente invención.

La invención también se refiere a un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de aminoácidos que codifica una cadena pesada o una porción de unión a antígeno de ésta o una cadena ligera o una porción de unión a antígeno de ésta del anticuerpo de la presente invención. En una realización de la invención, la invención proporciona también un procedimiento para tratar un individuo en necesidad de ello con una cantidad eficaz de un ácido nucleico que codifica la cadena pesada y/o ligera o las porciones de unión a antígeno de éstas de un anticuerpo anti-IGF-IR.

La invención proporciona un vector que comprende un ácido nucleico aislado y una

1. Un anticuerpo humano monoclonal o una porción de unión a antígeno del mismo que se une específicamente al receptor del factor de crecimiento insulinoide I humano (IGF-IR), que comprende al menos una mutación somática contenida en una región de marco estructural de una región variable de dicho anticuerpo que se ha sustituido por un correspondiente residuo de aminoácido de línea germinal, en el que la región variable de la cadena ligera comprende los números de aminoácidos 23 a 130 de la SEC INº 5.

2. El anticuerpo humano o una porción de unión a antígeno de éste de acuerdo con la reivindicación 1 en el que la región variable de la cadena ligera comprende los aminoácidos 23 a 236 de ID SEC Nº 5.

3. El anticuerpo humano o una porción de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1 en el que la región variable de la cadena pesada comprende los aminoácidos 20 a 144 de ID SEC Nº 3.

4. El anticuerpo humano o una porción de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 3 en el que la cadena pesada comprende los aminoácidos 20 a 470 de ID SEC Nº 3 y la cadena ligera comprende los aminoácidos 23 a 236 de ID SEC Nº 5.

5. El anticuerpo humano o una porción de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 3 en el que la cadena pesada de dicho anticuerpo está constituida por los aminoácidos 20 a 470 de ID SEC Nº 3 y la cadena ligera está constituida por los aminoácidos 23 a 236 de ID SEC Nº 5.

6. El anticuerpo humano o porción de unión a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, estando el anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo que deriva o está unido a otra molécula.

7. El anticuerpo humano o porción de unión a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, estando el anticuerpo o porción de unión a antígeno está unido a otra proteína o péptido.

8. Una composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer que comprende el anticuerpo o una porción de unión a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 8 que comprende además un agente antineoplásico, quimioterapéutico o antitumoral.

10. Un anticuerpo humano o porción de unión a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para usar en el tratamiento del cáncer en un ser humano.

11. El uso de un anticuerpo humano o porción de unión a antígeno del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 en la fabricación de un medicamento para tratar el cáncer en un ser humano.

12. . Un polinucleótido aislado que comprende una secuencia de un ácido nucleico que codifica una cadena pesada o una porción de unión a antígeno de ésta o una cadena ligera o una porción de unión a antígeno de ésta de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7.

13. Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico aislada de la reivindicación 12.

14. Una célula huésped que comprende el vector de la reivindicación 13.

15. Un procedimiento de producción de un anticuerpo monoclonal o una porción de unión a antígeno del mismo que comprende el cultivo de la célula huésped de la reivindicación 14 y la recuperación de dicho anticuerpo.