Procedimiento de preparación de compuestos quirales.

Un procedimiento que comprende la etapa de hacer reaccionar acetaldehído con un sustrato de aminoaldehído N-protegido seleccionado del grupo que consiste en 3-ftalimidopropionaldehído y 3-succinimidopropionaldehído en condiciones de condensación aldólica catalizada por aldolasa para formar el correspondiente lactol.

Procedimiento de preparación de compuestos quirales La presente invención se refiere a un procedimiento quimioenzimático con 2-desoxirribosa-5-fosfato aldolasa (DERA) de pre`paración de compuestos quirales.

Se ha descrito el uso de la familia DERA (desoxirribosa aldolasa) de aldolasas en procedimientosquimioenzimáticos. Véanse la patente estadounidense nº 5.795.749, los documentos WO 03/006656, WO 2004/027075, WO 2005/012246; Gijsen, H. J. M., et al. JACS, 1994, 116, 8422-8423; Gijsen, H. J. M., et al., JACS, 1995, 117, 7585-7591; Greenberg, W. A., et al., PNAS, 2004, 101, 5788-5793, patente estadounidense nº 6.964.863 y Biotechonol J, 101, páginas 537-548 (2006) . Sin embargo, algunos de los procedimientos proporcionaron un mal

rendimiento global así como una mezcla de productos. Además, los procedimientos se limitaron a sustratos específicos. Por consiguiente, existe una necesidad en la técnica de un procedimiento quimioenzimático que seaeficaz y eficiente para sustratos alternativos. La publicación de patente internacional WO – 2006/134482 describe un procedimiento que comprende la etapa de reaccionar un aldehído con un sustrato de aminoaldehído, un sustratode aminoaldehído N-protegido o un sustrato de pirolaldehído en condiciones de condensación de aldol catalizado por aldolsa para formar el lactol correspondiente. Se describe el uso de varias aldolasas DERA y se recomienda el uso de grupos de N-protección de benciloxicarbonilo, buroxicarbonilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo, bencilo y dibencilo.

Sumario de la invención La presente invención se refiere a un procedimiento que comprende la etapa de hacer reaccionar acetaldehído conun sustrato de aminoaldehído N-protegido seleccionado del grupo que consiste en 3-ftalimidopropionaldehído y 320 succinimido-propionaldehído en condiciones de condensación aldólica catalizada por aldolasa para formar el correspondiente lactol.

La presente invención se refiere también a un procedimiento en el que dicha aldolasa es una aldolasa 2desoxirribosa-5-fosfato aldolasa (DERA) .

La presente invención se refiere también a un procedimiento en el que dicha aldolasa es DERA 04 que comprende

una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 2 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 17; DERA 06 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 3 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 18;DERA 101 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 8 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 23;

DERA 102 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 9 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 24;DERA 103 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 10 o una secuencia de aminoácidos deSEC ID Nº : 25;DERA 104 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 11 o una secuencia de aminoácidos de

SEC ID Nº : 26; DERA 105 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 12 o una secuencia de aminoácidos deSEC ID Nº : 27;DERA 106 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 13 o una secuencia de aminoácidos deSEC ID Nº : 28;

DERA 107 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 14 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 29;DERA 108 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 15 o una secuencia de aminoácidos deSEC ID Nº : 30;

o una aldolasa que tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de al menos aproximadamente el 20% con las 45 mismas.

Más específicamente, la presente invención se refiere también a un procedimiento en el que dicha aldolasa esDERA 04 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 2 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 17; DERA 06 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 3 o una secuencia de aminoácidosde SEC ID Nº : 18 o DERA 102 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 9 o una secuencia de 50 aminoácidos de SEC ID Nº : 24.

Más específicamente, la presente invención se refiere también a un procedimiento en el que dicha aldolasa esDERA 04 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 2 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 17.

Más específicamente, la presente invención se refiere también a un procedimiento en el que dicha aldolasa es55 DERA 102 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 9 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 24.

La presente invención se refiere también a un procedimiento en el que dicho sustrato de aminoaldehído N-protegido es 3-ftalimidopropionaldehído.

La presente invención se refiere también a un procedimiento en el que dicho sustrato de aminoaldehído N-protegido 60 es 3-succinimidopropionaldehído.

La presente invención se refiere a un procedimiento que comprende la etapa de:

(a) hacer reaccionar un aldehído con un sustrato de aminoaldehído N-protegido seleccionado del grupo constituido por 3-ftalimidopropionaldehído y 3-succinimido-propionaldehído en condiciones de condensación

aldólica catalizada por aldolasa para formar el correspondiente lactol;

(b) oxidar el lactol así formado para proporcionar la correspondiente lactona;

(c) hacer reaccionar la lactona así formada con alcohol isopropílico y acetona en catálisis ácida para proporcionar el correspondiente éster de isopropil-acetónido;

(d) tratar el éster de isopropil-acetónido así formado con una base para proporcionar el correspondiente éster isopropílico de amino-acetónido.

La presente invención se refiere a un procedimiento que comprende la etapa de:

(a) hacer reaccionar un aldehído con un sustrato de aminoaldehído N-protegido seleccionado del grupo constituido por 3-ftalimidopropionaldehído y 3-succinimido-propionaldehído en condiciones de condensación 10 aldólica catalizada por aldolasa para formar el correspondiente lactol;

(b) oxidar el lactol así formado para proporcionar la correspondiente lactona;

(c) hacer reaccionar la lactona así formada con ciclopentanona para proporcionar el correspondiente éster isopropílico de ciclopentiliden-ftalimido; y

(d) tratar el éster isopropílico de ciclopentiliden-ftalimido así formado con base para proporcionar el 15 correspondiente éster isopropílico de amino-ciclopentilideno.

La presente invención se refiere a un procedimiento que comprende las etapas de:

(a) hacer reaccionar un aldehído con un sustrato de aminoaldehído N-protegido seleccionado del grupo constituido por 3-ftalimidopropionaldehído y 3-succinimido-propionaldehído en condiciones de condensación aldólica catalizada por aldolasa para formar el correspondiente lactol;

(b) deshidrogenar el lactol así formado en condiciones de deshidrogenación catalítica para proporciona el correspondiente ácido heptanoico;

(c) tratar dicho ácido 3, 5-dihidroxiheptanoico así formado con diciclohexilamina para formar la correspondiente sal;

(d) hacer reaccionar la sal así formada con ortoformiato de triisopropilo y acetona en catálisis ácida para 25 proporciona el correspondiente éster de isopropil-acetónido; y

(e) tratar el éster de isopropil-acetónido así formado con base para proporciona el correspondiente éster isopropílico de amino-diciclohexilamina.

La presente invención se refiere a un procedimiento que comprende las etapas de:

(a) hacer reaccionar un aldehído con un sustrato de aminoaldehído N-protegido seleccionado del grupo constituido por 3-ftalimidopropionaldehído y 3-succinimido-propionaldehído en condiciones de condensación aldólica catalizada por aldolasa para formar el correspondiente lactol;

(b) oxidar el lactol así formado para proporcionar el correspondiente ácido 3, 5-dihidroxiheptanoico;

(c) tratar dicho ácido 3, 5-dihidroxiheptanoico con diciclohexilamina para formar la correspondiente sal; y

(d) hacer reaccionar la sal así formada con ortoformiato de triisopropilo para proporcionar el correspondiente 35 éster de isopropil-acetónido; y

(e) tratar el éster de isopropil-acetónido así formado con base para proporcionar el correspondiente éster isopropílico de amino-acetónido.

La presente invención se refiere también a un procedimiento en el que dicha aldolasa es DERA 102.

Breve descripción de los dibujos La figura 1 es un patrón de difracción de rayos X de polvo experimental para 4-fluoro-alfa-[2-metil-1-oxopropil]gamma-oxo-N, beta-difenilbencenbutanamida. La escala de abscisas es grados de dos-theta. La ordenada es la intensidad de las cuentas.

La figura 2 es el termograma de calorimetría diferencial de barrido... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento que comprende la etapa de hacer reaccionar acetaldehído con un sustrato de aminoaldehído N-protegido seleccionado del grupo que consiste en 3-ftalimidopropionaldehído y 3-succinimidopropionaldehído en condiciones de condensación aldólica catalizada por aldolasa para formar el correspondiente lactol.

2. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicha aldolasa es una aldolasa 2-desoxirribosa-5-fosfato aldolasa (DERA) .

3. El procedimiento según la reivindicación 2, en el que dicha aldolasa es DERA 04 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 2 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 17; DERA 06 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 3 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 18; DERA 101 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 8 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 23; DERA 102 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 9 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 24; DERA 103 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 10 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 25; DERA 104 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 11 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 26; DERA 105 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 12 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 27; DERA 106 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 13 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 28; DERA 107 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 14 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 29; DERA 108 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 15 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 30;

o una aldolasa que tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de al menos aproximadamente el 70% con las mismas.

4. El procedimiento según la reivindicación 2, en el que dicha aldolasa es DERA 04 que comprende una secuenciade nucleótidos de SEC ID Nº : 2 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 17; DERA 06 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 3 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 18 o DERA 102 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 9 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 24.

5. El procedimiento según la reivindicación 2, en el que dicha aldolasa es DERA 04 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 2 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 17.

6. El procedimiento según la reivindicación 2, en el que dicha aldolasa es DERA 102 que comprende una secuencia de nucleótidos de SEC ID Nº : 9 o una secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 24.

7. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicho sustrato de aminoaldehído N-protegido es 3ftalimidopropionaldehído.

8. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicho sustrato de aminoaldehído N-protegido es 3succinimido-propionaldehído.

9. El procedimiento según la reivindicación 1, que incluye además oxidar el lactol así formado para proporcionar la correspondiente lactona.

10. El procedimiento según la reivindicación 9, que incluye además hacer reaccionar la lactona así formada con alcohol isopropílico y acetona para proporcionar el correspondiente éster de isopropil-acetónido.

11. El procedimiento según la reivindicación 9, que incluye además hacer reaccionar la lactona así formada con ciclopentanona y alcohol isopropílico para proporcionar el correspondiente éster isopropílico de ciclopentilidenftalimido.

12. El procedimiento según la reivindicación 1, que incluye además:

(a) deshidrogenar el lactol así formado en condiciones de deshidrogenación catalítica para proporcionar el correspondiente ácido 3, 5-dihidroxiheptanoico;

(b) tratar dicho ácido 3, 5-dihidroxiheptanoico con diciclohexilamina para formar la correspondiente sal; y

(c) hacer reaccionar la sal así formada con ortoformiato de triisopropilo y acetona para proporcionar el correspondiente éster de isopropil-acetónido.

13. El procedimiento según la reivindicación 1, que incluye además:

(a) oxidar el lactol así formado para proporcionar el correspondiente ácido 3, 5-dihidroxiheptanoico;

(b) tratar dicho ácido 3, 5-dihidroxiheptanoico con diciclohexilamina para formar la correspondiente sal; y

(c) hacer reaccionar la sal así formada con ortoformiato de triisopropilo y acetona para proporcionar el correspondiente éster de isopropil-acetónido.

14. El procedimiento según las reivindicaciones 10, 12 o 13, que incluye además tratar el éster de isopropilacetónido, en el que dicho sustrato de aminoaldehído N-protegido es 3-ftalimidopropionaldehído así formado con una base para proporcionar el correspondiente éster isopropílico de amino-acetónido.