ANTICUERPOS ANTI-TNF, COMPOSICIONES, METODOS Y USOS.

Un anticuerpo que comprende: las regiones determinantes de complementariedad (CDR) de cadena pesada y regiones flanqueantes (FR) variables del mAb TNV148 como se ha descrito en la Figura 4,

y las CDR de cadena ligera y FR variables del mAb TNV148 como se ha descrito en la Figura 5; que comprende opcionalmente además la sustitución especificada de prolina a serina en la FR3 del mAb TNV148B como se ha descrito en la Figura 4

Anticuerpos anti-TNF, composiciones, métodos y usos.

La presente invención se refiere a anticuerpos específicos para proteína factor de necrosis tumoral alfa (TNF).

Técnica relacionada

El TNF alfa es un homotrímero de subunidades de proteína de 17 kD soluble (Smith et al., J. Biol. Chem. 262: 6951-6954 (1987)). También existe una forma precursora de TNF de 26 kD unida a membrana (Kriegler et al., Cell 53: 45-53 (1988)). Para revisiones acerca de TNF, véase Beutler et al., Nature 320: 584 (1986); Old, Science 230: 630 (1986) y Le et al., Lab. Invest. 56: 234 (1987).

Células diferentes a monocitos o macrófagos también producen TNF alfa. Por ejemplo, líneas de células tumorales no monocíticas humanas producen TNF alfa (Rubin et al., J. Exp. Med. 164: 1350 (1986); Spriggs et al., Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 84: 6563 (1987)). Los linfocitos T de sangre periférica CD4+ y CD8+ y algunas líneas de células T y B cultivadas (Cuturi et al., J. Exp. Med. 165: 1581 (1987); Sung et al., J. Exp. Med. 168: 1539 (1988), Turner et al., Eur. J. Immunol. 17: 1807-1814 (1987)) también producen TNF alfa.

TNF alfa provoca acciones pro-inflamatorias que dan como resultado lesión tisular, tal como degradación de cartílago y huesos (Saklatvala, Nature 322: 547-549 (1986); Bertolini, Nature 319: 516-518 (1986)), inducción de moléculas de adhesión, inducción de actividad pro-coagulante en células del endotelio vascular (Pober et al., J. Immunol. 136: 1680 (1986)), aumento de la adherencia de neutrófilos y linfocitos (Pober et al., J. Immunol. 138: 3319 (1987)) y estimulación de la liberación de factor activador de plaquetas a partir de macrófagos, neutrófilos y células endoteliales vasculares (Camussi et al., J. Exp. Med. 166: 1390 (1987)).

La evidencia reciente asocia el TNF alfa con infecciones (Cerami et al., Immunol. Today 9: 28 (1988)), trastornos inmunes, patologías neoplásicas (Oliff et al., Cell 50: 555 (1987)), patologías autoinmunes y patologías de injerto frente a hospedador (Piguet et al., J. Exp. Med. 166: 1280 (1987)). La relación de TNF alfa con cáncer y patologías infecciosas con frecuencia está relacionada con el estado catabólico del hospedador. Los pacientes con cáncer sufren de pérdida de peso, habitualmente asociada con anorexia.

El debilitamiento considerable que está asociado con cáncer y otras enfermedades, se conoce como "caquexia" (Kern y al. J. Parent. Enter. Nutr. 12: 286-298 (1988)). La caquexia incluye pérdida de peso progresiva, anorexia y erosión persistente de masa corporal magra como respuesta a un crecimiento maligno. El estado caquéctico provoca gran parte de morbilidad y mortalidad en cáncer. Existe evidencia de que TNF alfa está implicado en caquexia en cáncer, patología infecciosa y otros estados catabólicos (por ejemplo, véase Beutler y Cerami, Ann. Rev. Immunol. 7: 625-655 (1989)).

Se cree que el TNF alfa juega un papel central en sepsis por gram negativos y choque endotóxico (Michie et al., Br. J. Surg. 76: 670-671 (1989); Debets et al., Second Vienna Shock Forum, págs. 463-466 (1989), Simpson et al., Crit. Care Clin. 5: 27-47 (1989)), incluyendo fiebre, malestar, anorexia y caquexia. La endotoxina activa de forma marcada la producción y secreción de monocitos/macrófagos de TNF alfa y otras citoquinas (Kornbluth et al., J. Immunol. 137: 2585-2591 (1986)). TNF alfa y otras citoquinas derivadas de monocitos median las respuestas metabólicas y neurohormonales a endotoxina (Michie et al., New Engl. J. Med. 318: 1481-1486 (1988)). La administración de endotoxina a voluntarios humanos produce enfermedad aguda con síntomas similares a la gripe incluyendo fiebre, taquicardia, tasa metabólica aumentada y liberación de hormona del estrés (Revhaug et al., Arch. Surg. 123: 162-170 (1988)). El TNF alfa circulante aumenta en pacientes que sufren de sepsis por gram negativos (Waage et al., Lancet 1: 355-357 (1987); Hammerle et al., Second Vienna Shock Forum, págs. 715-718 (1989); Debets et al., Crit. Care. Med 17: 489-497 (1989); Calandra et al., J. Infect. Dis. 161: 982-987 (1990)).

Por tanto, TNF alfa ha estado implicado en enfermedades inflamatorias, enfermedades autoinmunes, infecciones virales, bacterianas y parasitarias, malignidades y/o enfermedades neurodegenerativas y es una diana útil para terapia biológica específica en enfermedades, tales como artritis reumatoide y enfermedad de Crohn. Los efectos beneficiosos en experimentos de etiqueta descubierta con un anticuerpo monoclonal quimérico para TNF alfa (cA2) se han presentado con supresión de inflamación y con retratamiento satisfactorio después de recaída en artritis reumatoide (Elliott et al., Arthritis Rheum. 36: 1681-1690 (1993) y Elliott et al., Lancet 344: 1125-1127 (1994)) y en la enfermedad de Crohn (Van Dullemen et al., Gastroenterology 109: 129-135 (1995)). También se han presentado los resultados beneficiosos en un experimento aleatorizado, doble ciego y controlado con placebo con cA2 en artritis reumatoide con supresión de inflamación (Elliott et al., Lancet 344: 1105-1110 (1994)). Los anticuerpos para un material "modulador" que se caracterizó como caquectina (que posteriormente se encontró que era idéntico a TNF) se han descrito por Cerami et al., (Publicación de Patente EPO 0212489, 4 de marzo de 1987). Se ha dicho que tales anticuerpos son útiles en inmunoensayos de diagnóstico y en terapia de choque en infecciones bacterianas. Rubin et al., (Publicación de Patente EPO 0218868, 22 de abril de 1987) describieron anticuerpos monoclonales para TNF humano, los hibridomas que secretan tales anticuerpos, métodos para producir tales anticuerpos y el uso de tales anticuerpos en inmunoensayo de TNF. Yone et al., (Publicación de Patente EPO 0288088, 26 de octubre de 1988) describieron anticuerpos anti-TNF, incluyendo mAb y su utilidad en el diagnóstico con inmunoensayo de patologías, en particular patología de Kawasaki e infección bacteriana. Los líquidos corporales de pacientes con patología de Kawasaki (síndrome de nódulo linfático mucocutáneo febril agudo infantil; Kawasaki, T., Allergy 16: 178 (1967), Kawasaki, T., Shonica (Pediatrics) 26: 935 (1985)) se ha dicho que contienen niveles de TNF elevados que estaban relacionados con el progreso de la patología (Yone et al., mencionado anteriormente).

Otros investigadores han descrito mAb específicos para TNF humano recombinante que tenían actividad neutralizante in vitro (Liang, C. M. et al., (Biochem. Biophys. Res. Comm. 137: 847-854 (1986); Meager, A. et al., Hybridoma 6: 305-311 (1987); Fendly et al., Hybridoma 6: 359-369 (1987); Bringman, T. S. et al., Hybridoma 6: 489-507 (1987); Hirai, M. et al., J. Immunol. Meth. 96: 57-62 (1987); Moller, A. et al., (Cytokine 2: 162-169 (1990)). Algunos de estos mAb se usaron para cartografiar epítopos de TNF humano y desarrollar inmunoensayos enzimáticos (Fendly et al., mencionado anteriormente; Hirai et al., mencionado anteriormente; Moller et al., mencionado anteriormente) y para ayudar en la purificación de TNF recombinante (Bringman et al., mencionado anteriormente). Sin embargo, estos estudios no proporcionan una base para producir anticuerpos neutralizantes de TNF que se pueden usar para usos de diagnóstico o terapéutico in vivo en seres humanos, debido a inmunogenicidad, carencia de especificidad y/o idoneidad farmacéutica.

Los antisueros o mAb neutralizantes para TNF han demostrado en mamíferos diferentes al hombre que anulan los cambios fisiológicos adversos y evitan la muerte después de exposición mortal en endotoxemia experimental y bacteriemia. Este efecto se ha demostrado, por ejemplo, en ensayos de mortalidad de roedores y en sistemas de modelo de patología de primate (Mathison, J C et al., J. Clin. Invest. 81: 1925-1937 (1988); Beutler, B. et al., Science 229: 869-871 (1985); Tracey, K J, et al., Nature 330: 662-664 (1987); Shimamoto, Y. et al., Immunol. Lett. 17: 311-318 (1988) Silva, A. T., et al., J. Infect. Dis. 162: 421-427 (1990), Opal, S. M., et al., J. Infect: Dis. 161: 1148-1152 (1990); Hinshaw, L. B., et al., Circ. Shock 30: 279-292 (1990)).

Los loci de unión a supuesto receptor de hTNF se han descrito por Eck y Sprang (J. Biol. Chem. 264 (29), 17595-17605 (1989)), que identificaron los loci de unión a receptor de TNF-a que consistían en los aminoácidos 11-13, 37-42,...

1. Un anticuerpo que comprende: