Una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de taxano y un oligonucleótido de LNA en un vehículo farmacéuticamente aceptable,

teniendo dicho oligonucleótido de LNA un total de 12-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA, y comprendiendo la (sub)secuencia siguiente: Me 5'-( Cx Me Cx)(Tx) Me CxAsAstscscsastsgsgs Ax(Gx)(c)-3' (SEC ID Nº: 28); en la que las letras mayúsculas designan un análogo de nucleótido de LNA seleccionado de ß-D-oxi-LNA, ß-D-tio-LNA, ß-D-amino-LNA y α-L-oxi-LNA, las letras minúsculas designan un desoxinucleótido, el subrayado designa un análogo de nucleótido de LNA como se ha definido anteriormente o un desoxinucleótido, el subíndice "s" designa un enlace fosforotioato entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos, y el subíndice "x" designa un enlace fosforotioato o un enlace fosforodiéster entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos; y en la que las unidades de nucleótidos entre paréntesis representan cada una una unidad opcional; y en la que la proporción en peso entre el compuesto o compuestos de taxano y el oligonucleótido de LNA en dicha composición está en el intervalo de 50:1 a 1:25

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente Invención proporciona composiciones farmacéuticas útiles para el tratamiento del cáncer. Las composiciones comprenden un oligonucleótido de LNA particular que tiene excelentes propiedades con respecto a la inhibición de la expresión de Survivina. La presente invención también proporciona un procedimiento para tratar el cáncer y diversos kits.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La Survivina es una de las nuevas dianas del cáncer más atractivas. El papel clínico de la Survivina en el cáncer se ha enfatizado por detección de altos niveles de esta proteína en casi todos los tipos tumorales. Una expresión elevada de Survivina en tumores se asocia generalmente con un aumento de las recidivas del cáncer de mal pronóstico y de la resistencia a terapia, tanto a radiación como a quimioterapia. El hecho de que la expresión de Survivina, con unas pocas excepciones, no se encuentre en tejidos adultos normales hace que la Survivina sea un gen central en el cáncer.

El inhibidor de proteínas apoptóticas (IAP) Survivina está implicado en dos acontecimientos biológicos clave: (i) control de la proliferación celular (mitosis) y (ii) regulación de la muerte celular programada (apoptosis). Además, la Survivina desempeña un papel importante en la angiogénesis tumoral.

Una combinación de ARNic que se dirige a Survivina y Taxol da como resultado una inducción de la apoptosis aumentada en células SHEP en comparación con ARNic y Taxol en solitario (Zangemelster-Wlttke 2003; Ann. N.Y. Acad. Sci. 1002: 90-94).

Wang y col., 2003; Zhonghua Xue Ye Za Zhi 24, 351-54. “Survivin antisense RNA enhances Taxol-induced apoptosis in leukemia cell line HL-60”.

Una amplia variedad de oligonucleótidos de LNA antisentido posibles se describieron en la publicación de solicitud de patente internacional anterior de los solicitantes Nº WO 2004/069991 A2. Sin embargo, las sorprendentemente buenas propiedades de los oligonucleótidos de LNA desveladas en el presente documento no se han descrito todavía en la técnica anterior. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Un primer aspecto principal de la presente Invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de taxano y un oligonucleótido de LNA en un vehículo farmacéuticamente aceptable, teniendo dicho oligonucleótido de LNA un total de 12-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA y comprendiendo la (sub)secuencia siguiente:

MeCx

5'-(MeCx)(Tx)MeCxAsAstscscsastsgsgs Ax(Gx)(C)-3' (SEC ID Nº: 28); en la que las letras mayúsculas designan un análogo de nucleótido de LNA seleccionado de βD-oxi-LNA, β-D-tio-LNA, β-D-amino-LNA y α-L-oxi-LNA, las letras minúsculas designan un desoxinucleótido, el subrayado designa un análogo de nucleótido de LNA como se ha definido anteriormente o un desoxinucleótido, el subíndice “s” designa un enlace fosforotioato entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos y el subíndice “x” designa un enlace fosforotioato o un enlace fosforodiéster entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos; y en la que las unidades de nucleótidos entre paréntesis representan cada una una unidad opcional; y en la que la proporción en peso entre el compuesto o compuestos de taxano y el oligonucleótido de LNA en dicha composición está en el intervalo de 50:1 a 1:25.

Un segundo aspecto principal de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de taxano y un conjugado en un vehículo farmacéuticamente aceptable, consistiendo dicho conjugado en un oligonucleótido de LNA y al menos un resto no nucleotídico/no polinucleotídico unido covalentemente a dicho oligonucleótido, teniendo dicho oligonucleótido de LNA un total de 12-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA y comprendiendo la (sub)secuencia siguiente:

)MeCxMeCx

5'-(MeCx)(TxAsAstscscsastsgsgs Ax(Gx)(c)-3' (SEC ID Nº: 28), que tiene preferentemente un total de 16-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA y que comprende la (sub)secuencia siguiente:

)MeCxMeCx

5'-(MeCx)(TxAsAstscscsastsgsgs Ax(Gx)(c)-3' (SEC ID Nº: 1), en la que las letras mayúsculas designan un análogo de nucleótido de LNA seleccionado de β-D-oxi-LNA, β-D-tio-LNA, β-D-amino-LNA y α-L-oxi-LNA, las letras minúsculas designan un desoxinucleótido, el subrayado designa un análogo de nucleótido de LNA como se ha definido anteriormente o un desoxinucleótido, el subíndice “s” designa un enlace fosforotioato entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos y el subíndice “x” designa un enlace fosforotioato o un enlace fosforodiéster entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos; y en la que la proporción en peso entre el compuesto o compuestos de taxano y la parte de oligonucleótido de LNA del conjugado en dicha composición está en el intervalo de 50:1 a

1:25. Un tercer aspecto principal de la presente invención se refiere a un kit que comprende

(a) un primer componente que contiene una o más dosis de solución inyectable de un oligonucleótido de LNA, y

(b) un segundo componente que contiene una o más soluciones inyectables de uno o más compuestos de taxano;

en el que dicho oligonucleótido de LNA tiene un total de 12-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA y comprende la (sub)secuencia siguiente:

)MeCxMeCx

5'-(MeCx)(TxAsAstscscsastsgsgs Ax(Gx)(c)-3' (SEC ID Nº: 28), que tiene preferentemente un total de 16-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA y que comprende la (sub)secuencia siguiente:

)MeCxMeCx

5'-(MeCx)(TxAsAstscscsastsgsgs AxGxc-3' (SEC ID Nº: 1), en la que las letras mayúsculas designan un análogo de nucleótido de LNA seleccionado de β-D-oxi-LNA, β-D-tio-LNA, β-D-amino-LNA y α-L-oxi-LNA, las letras minúsculas designan un desoxinucleótido, el subrayado designa un análogo de nucleótido de LNA como se ha definido anteriormente o un desoxinucleótido, el subíndice “s” designa un enlace fosforotioato entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos y el subíndice “x” designa un enlace fosforotioato o un enlace fosforodiéster entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos; y en la que la proporción en peso entre el al menos un compuesto de taxano en una solución del segundo componente y al menos un oligonucleótido de LNA en una solución del primer componente está en el intervalo de 50:1 a 1:25.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra la estabilidad de la SEC ID Nº: 2 en plasma de ratón y humano en comparación con la SEC ID Nº: 25 de control. Los oligonucleótidos se incubaron a concentraciones de 20 µM a 37ºC durante 0, 1, 2, 4, 24, 48 ó 96 horas. No pueden detectar productos de degradación de la SEC ID Nº: 2 incluso después de 96 horas de digestión en cualquier suero. La Figura 2A muestra la regulación negativa de la proteína Survivina en células de cáncer de próstata 15PC3 transfectadas con SEC ID Nº: 2. Las células 15PC3 se transfectaron con 1, 10 y 25 nM de la SEC ID Nº: 2 y se analizaron a los puntos temporales de 12, 24 y 48 horas para determinar la regulación negativa de la proteína Survivina por transferencia de Western. Las células transfectadas con SEC ID Nº: 2 o con transfección simulada se recogieron y se compararon para determinar la expresión de proteína Survivina. Se controló al mismo tiempo la proteína Bcl-2. La Figura 2B muestra una cuantificación de la proteína Survivina usando ELISA después del tratamiento de células 15PC3 con SEC ID Nº: 2 en comparación con las tratadas con el control negativo SEC ID Nº: 24 y las de tratamiento simulado durante 24 horas. Las células 15PC3 se transfectaron con SEC ID Nº: 2 a cuatro concentraciones que variaban de 0,045 nM o con el control negativo SEC ID Nº: 24 a 5 nM. La Figura 2C muestra la expresión de las 3 isoformas diferentes de ARNm de Survivina (Survivina de longitud completa, Survivina2B y SurvivinaAex3) en células 15PC3 después del tratamiento con SEC ID Nº: 2 5 nM, en comparación con la SEC ID Nº: 24 5 nM o con tratamiento simulado. La expresión se normaliza respecto a la expresión de GAPDH y se relaciona con el promedio de la expresión en las células con tratamiento simulado. Es evidente que la SEC ID Nº: 2 es capaz de regular negativamente todas las isoformas...

1. Una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de taxano y un oligonucleótido de LNA en un vehículo farmacéuticamente aceptable, teniendo dicho oligonucleótido de LNA un total de 12-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA, y comprendiendo la (sub)secuencia siguiente:

MeCx

5'-(MeCx)(Tx)MeCxAsAstscscsastsgsgs Ax(Gx)(c)-3' (SEC ID Nº: 28);

en la que las letras mayúsculas designan un análogo de nucleótido de LNA

seleccionado de β-D-oxi-LNA, β-D-tio-LNA, β-D-amino-LNA y α-L-oxi-LNA, las letras

minúsculas designan un desoxinucleótido, el subrayado designa un análogo de

nucleótido de LNA como se ha definido anteriormente o un desoxinucleótido, el

subíndice “s” designa un enlace fosforotioato entre nucleótidos/análogos de nucleótidos

de LNA vecinos, y el subíndice “x” designa un enlace fosforotioato o un enlace

fosforodiéster entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos; y en la que

las unidades de nucleótidos entre paréntesis representan cada una una unidad

opcional; y

en la que la proporción en peso entre el compuesto o compuestos de taxano y el

oligonucleótido de LNA en dicha composición está en el intervalo de 50:1 a 1:25.

2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en la que el oligonucleótido de LNA tiene un total de 16-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA y comprende la (sub)secuencia siguiente:

MeCxMeCx

5'-MeCxTx AsastsCsCsastsgsgs AxGxc-3' (SEC ID Nº: 1).

3. La composición de una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que todos los análogos de nucleótidos de LNA son β-D-oxi-LNA.

4. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el oligonucleótido de LNA es un compuesto seleccionado del grupo que consiste en

MeCsMeCs

5'-MeCsTs AsastsCsCsastsgsgs AsGsC-3' (SEC ID Nº: 2),

5'-MeCTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAGsc-3' (SEC ID Nº: 3),

5'-MeCTMeCAsastsCscsastsgsgsMeCAGc-3' (SEC ID Nº: 4), MeCsMeCs

5'-MeCsTs AsastsCscsastsgsgs Asgsc-3' (SEC ID Nº: 5), MeCsMeCs

5'-CsTs AsastsCscsastsgsgs AsGsc-3' (SEC ID Nº: 6), 5'-MeCTMeCAsastsCsCsastsgsgsMeCAgsc-3' (SEC ID Nº: 7),

5'-csTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAGsc-3' (SEC ID Nº: 8), 5'-MeCTMeCAsastsCsCsastsgsgsMeCAgc-3' (SEC ID Nº: 9) y 5'-cTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAGc-3' (SEC ID Nº: 10).

5. La composición de acuerdo con la reivindicación 4, en la que el oligonucleótido de LNA

MeCsMeCs

es el compuesto con la secuencia 5'-MeCsTs Asastscscsastsgsgs AsGsc-3' (SEC ID Nº: 2).

6. Una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de taxano y un conjugado en un vehículo farmacéuticamente aceptable, consistiendo dicho conjugado en un oligonucleótido de LNA y al menos un resto no nucleotídico/no polinucleotídico unido covalentemente a dicho oligonucleótido, teniendo dicho oligonucleótido de LNA un total de 12-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA, y comprendiendo la (sub)secuencia siguiente:

MeCx

5'-(MeCx)(Tx)MeCxAsAstscscsastsgsgs Ax(Gx)(c)-3' (SEC ID Nº: 28); en la que las letras mayúsculas designan un análogo de nucleótido de LNA seleccionado de β-D-oxi-LNA, β-D-tio-LNA, β-D-amino-LNA y α-L-oxi-LNA, las letras minúsculas designan un desoxinucleótido, el subrayado designa un análogo de nucleótido de LNA como se ha definido anteriormente o un desoxinucleótido, el subíndice “s” designa un enlace fosforotioato entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos y el subíndice “x” designa un enlace fosforotioato o un enlace fosforodiéster entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos; y en el que las unidades de nucleótidos entre paréntesis representan cada una una unidad opcional; y en la que la proporción en peso entre el compuesto o compuestos de taxano y la parte de oligonucleótido de LNA del conjugado en dicha composición está en el intervalo de

50:1 a 1:25.

7. La composición de acuerdo con la reivindicación 6, en la que el oligonucleótido de LNA tiene un total de 16-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA y comprende la (sub)secuencia siguiente:

MeCxMeCx

5'-MeCxTx Asastscscsastsgsgs AGxc-3' (SEC ID Nº: 1).

8. Uso de una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de un mamífero, en particular un ser humano, que padece o es susceptible de padecer una enfermedad cancerosa.

9. El uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el oligonucleótido de LNA tiene un total de 16-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA y comprende la (sub)secuencia siguiente:

MeCxMeCx

5'-MeCxTx AsastsCsCsastsgsgs AxGxC-3' (SEC ID Nº: 1).

10. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8-9, en el que todos los análogos de nucleótidos de LNA son β-D-oxi-LNA.

11. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8-10, en el que el oligonucleótido de LNA es un compuesto seleccionado del grupo que consiste en

MeCsMeCs

5'-MeCsTs Asastscscsastsgsgs AsGsc-3' (SEC ID Nº: 2),

5'-MeCTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAGsc-3' (SEC ID Nº: 3),

5'-MeCTMeCAsastsCsCsastsgsgsMeCAGc-3' (SEC ID Nº: 4), MeCsMeCs

5'-MeCsTs AsastsCsCsastsgsgs Asgsc-3' (SEC ID Nº: 5), MeCsMeCs

5'-csTs Asastscscsastsgsgs AsGsC-3' (SEC ID Nº: 6), 5'-MeCTMeCAsastsCscsastsgsgsMeCAgsc-3' (SEC ID Nº: 7), 5'-csTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAGsc-3' (SEC ID Nº: 8), 5'-MeCTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAgc-3' (SEC ID Nº: 9) y 5'-cTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAGc-3' (SEC ID Nº: 10).

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que el oligonucleótido de LNA es el

MeCsMeCs

compuesto con la secuencia 5'-MeCsTs Asastscscsastsgsgs AsGsc-3' (SEC ID Nº: 2).

13. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8-12, en el que la enfermedad cancerosa se selecciona del grupo que consiste en leucemia mielocítica aguda, linfoma difuso de células B, leucemia linfocítica aguda, cáncer hepático, cáncer renal, cáncer del tracto urinario y cáncer colorrectal.

14. Una composición como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-7 para tratar a un mamífero, en particular a un ser humano, que padece o es susceptible de padecer una enfermedad cancerosa.

15. La composición de acuerdo con la reivindicación 14, en la que el oligonucleótido de LNA tiene un total de 16-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA y comprende la (sub)secuencia siguiente:

MeCxMeCx

5'-MeCxTx Asastscscsastsgsgs AxGxc-3' (SEC ID Nº: 1).

16. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-15, en la que todos los análogos de nucleótidos de LNA son β-D-oxi-LNA.

17. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-16, en la que el oligonucleótido de LNA es un compuesto seleccionado del grupo que consiste en

MeCsMeCs

5'-MeCsTs AsastsCsCsastsgsgs AsGsc-3' (SEC ID Nº: 2),

5'-MeCTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAGsc-3' (SEC ID Nº: 3),

5'-MeCTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAGc-3' (SEC ID Nº: 4), MeCsMeCs

5'-MeCsTs Asastscscsastsgsgs Asgsc-3' (SEC ID Nº: 5), MeCsMeCs

5'-CsTs AsastsCsCsastsgsgs AsGsc-3' (SEC ID Nº: 6), 5'-MeCTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAgsc-3' (SEC ID Nº: 7), 5'-csTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAGsc-3' (SEC ID Nº: 8), 5'-MeCTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAgc-3' (SEC ID Nº: 9) y 5'-CTMeCAsastscscsastsgsgsMeCAGc-3' (SEC ID Nº: 10).

18. La composición de acuerdo con la reivindicación 17, en la que el oligonucleótido de

MeCsMeCs

LNA es el compuesto con la secuencia 5'-MeCsTs Asastscscsastsgsgs AsGsc-3' (SEC ID Nº: 2).

19. La composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-18, en la que la enfermedad cancerosa se selecciona del grupo que consiste en leucemia mielocítica aguda, linfoma difuso de células B, leucemia linfocítica aguda, cáncer hepático, cáncer renal, cáncer del tracto urinario y cáncer colorrectal.

20. Un kit que comprende

(a) un primer componente que contiene una o más dosis de solución inyectable de un oligonucleótido de LNA, teniendo dicho oligonucleótido de LNA un total de 12-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA, y comprendiendo la (sub)secuencia siguiente:

)MeCxMeCx

5'-(MeCx)(TxAsAsAscscsastsgsgs Ax(Gx)(c)-3' (SEC ID Nº: 28); en la que las letras mayúsculas designan un análogo de nucleótido de LNA seleccionado de β-D-oxi-LNA, β-D-tio-LNA, β-D-amino-LNA y α-L-oxi-LNA, las letras minúsculas designan un desoxinucleótido, el subrayado designa un análogo de nucleótido de LNA como se ha definido anteriormente o un desoxinucleótido, el subíndice “s” designa un enlace fosforotioato entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos, y el subíndice “x” designa un enlace fosforotioato o un enlace fosforodiéster entre nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA vecinos; y

5 en la que las unidades de nucleótidos entre paréntesis representan cada una una unidad opcional; y

(b) un segundo componente que contiene una o más soluciones inyectables de uno o más compuestos de taxano; y en el que la proporción en peso entre el al menos un compuesto de taxano en una solución del segundo componente y el al menos un

10 oligonucleótido de LNA en una dosis de solución del primer componente está en el intervalo de 50:1 a 1:25 y/o en el que las dosis de solución inyectable del oligonucleótido de LNA comprenden un tampón para mantener el pH en el intervalo de 4,0-8,5 y tienen una fuerza iónica de 202000 mM.

15

21. El kit de acuerdo con la reivindicación 20, en el que las dosis de solución inyectable de un oligonucleótido de LNA son composiciones farmacéuticas como se definen en una cualquiera de las reivindicaciones 1-7.

20 22. El kit de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 20-21, en el que el oligonucleótido de LNA tiene un total de 16-20 nucleótidos/análogos de nucleótidos de LNA y comprende la (sub)secuencia siguiente:

MeCx MeCx

5'-MeCxTx Asastscscsastsgsgs AxGxc-3' (SEC ID Nº: 1).

25