Micromirs.

Un oligómero de una longitud de 7-10 bases nucleotídicas, que comprende una secuencia de bases nucleotídicas contigua de 7-10 bases nucleotídicas,

en el que al menos el 70 % de las unidades de bases nucleotídicas del oligómero son unidades de bases nucleotídicas de ácido nucleico bloqueado (LNA) y en el que el oligómero comprende al menos un enlace fosforotioato y en el que el oligómero es para uso en la reducción de la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula u organismo.

Micromirs

Campo de la invención La presente invención se refiere a oligonucleótidos muy cortos que están dirigidos e inhiben microARN in vivo y a su uso en medicamentos y composiciones farmacéuticas.

Antecedentes de la invención Los microARN (microARN) son una clase abundante de ARN endógenos cortos que actúan como reguladores postranscripcionales de la expresión génica mediante apareamiento de bases con sus ARNm diana. Se procesan a partir de precursores de tipo horquilla más largos (de aproximadamente 70-80 nucleótidos) denominados pre-miARN a través del dícero enzimático RNasa III. Los microARN se ensamblan en complejos de ribonucleoproteínas denominados mirRNP y reconocen sus sitios diana mediante complementariedad antisentido de modo que participan en la regulación por disminución de sus genes diana. La complementariedad casi perfecta o perfecta entre el miARN y su sitio diana tiene como resultado la escisión del ARNm diana, mientras que una complementariedad limitada entre el microARN y el sitio diana tiene como resultado la inhibición traduccional del gen diana.

Un resumen del papel de los microARN en enfermedades humanas y la inhibición de microARN usando oligonucleótidos monocatenarios se proporciona en los documentos WO 2007/112754, WO 2007/112753. El documento WO 2008046911 proporciona secuencias de microARN que están asociadas con cáncer. Numerosos microARN se han relacionado con fenotipos de enfermedad y, por tanto, es deseable proporcionar sustancias capaces de modular la disponibilidad de microARN in vivo. Los documentos WO 2007/112754 y WO 2007/112753 divulgan oligonucleótidos monocatenarios cortos que se considera que forman un dúplex fuerte con su ARNmi diana. Las SEC ID Nº 1-45 son ejemplos de oligonucleótidos microARN como se divulgan en el documento WO 2007/112754 y WO 2007/112753.

Fabini y Gait, 2008 (RNA vol 14 pág. 336-346) , Elmén J y col. 2008 (Nature Vol 452, p142) , Elmén J y col., 2007 (Nucleic Acid Research vol 36 pág. 1153-1162) divulgan LNA y oligonucleótidos antimir modificados con 2'O-metilo que son más largos que 10 unidades de nucleótidos. Obad S y col., 2008 (European Journal of Cancer Supplements vol.6 p142) hace referencia a LNA cortos-oligonucleótidos antimir, sin indicar ninguna longitud adicional de dichos oligonucleótidos. El documento WO 2007/112753 hace referencia a oligonucleótidos de una longitud que es improbable que forme un complejo de siARN y con suficiente carga de análogos nucleotídicos de alta afinidad que casi se adhieren de forma permanente a su miARN diana, formando con eficacia un dúplex estable y no funcional con el miARN. El documento WO 2007/11275 divulga oligonucleótidos que tienen una longitud de 8 y 10 nucleótidos, y divulga oligonucleótidos que consisten en análogos nucleotídicos sustituidos en 2’ con LNA.

Solicitudes relacionadas La presente solicitud reivindica prioridad sobre cuatro solicitudes: US 60/977497 presentada el 4 de octubre de 2007, US 60/979217 presentada el 11 de octubre de 2007, US 61/028062 presentada el 12 de febrero de 2008 y EP 08104780 presentada el 17 de julio de 2008.

Sumario de la invención La presente invención se basa en el descubrimiento de que el uso de oligonucleótidos muy cortos que están dirigidos a microARN y que tienen una proporción elevada de nucleótidos LNA es muy eficaz en el alivio de la represión de los ARN, tal como un ARNm, mediante los microARN al que están dirigidos in vivo.

La presente invención proporciona a un oligómero una secuencia contigua de una longitud de 7, 8, 9 o 10 unidades nucleotídicas para usar en la reducción de la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula o un organismo, en el que al menos el 70 %, tal como al menos el 80 % de las unidades nucleotídicas del oligómero son unidades de LNA y en el que el oligómero comprende al menos un enlace fosforotioato y en el que el oligómero es para uso en la reducción de la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula u organismo.

La presente invención proporciona a un oligómero una secuencia contigua de una longitud de 7, 8, 9 o 10 unidades nucleotídicas para usar en la reducción de la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula o un organismo, en el que al menos el 70 % de las unidades nucleotídicas del oligómero son unidades de LNA y en el que el oligómero comprende al menos un enlace fosforotioato y en el que el oligómero es para uso en la reducción de la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula u organismo.

La invención proporciona oligómeros de una longitud entre 7-10 nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos contigua de un total de entre 7-10 nucleótidos, tal como 7, 8, 9 unidades nucleotídicas, en el que al menos el 70 % de las unidades nucleotídicas del oligómero son análogos nucleotídicos de LNA y en el que el oligómero comprende al menos un enlace fosforotioato y en el que el oligómero es para uso en la reducción de la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula u organismo.

La invención proporciona además un oligómero de una longitud entre 7-10 nucleótidos que comprende una secuencia de nucleótidos contigua de un total de entre 7-10 nucleótidos, tal como 7, 8, 9 o 10 unidades nucleotídicas, en el que la secuencia de nucleótidos es complementaria a una correspondiente secuencia de nucleótidos encontrada en microARN de mamífero o viral, y en el que al menos el 70 % de las unidades nucleotídicas del oligómero son análogos nucleotídicos de LNA y en el que el oligómero comprende al menos un enlace fosforotioato y en el que el oligómero es para uso en la reducción de la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula u organismo.

La presente invención proporciona oligómeros de acuerdo con la invención como medicamento.

Los oligómeros de la invención se pueden usar en composiciones farmacéuticas de la presente invención que comprenden el oligómero de la invención y un diluyente, vehículo, sal o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

La invención proporciona un conjugado que comprende un oligómero de acuerdo con la invención, conjugado con al menos un no nucleótido o entidad polinucleotídica, tal como un esterol, tal como colesterol.

La invención proporciona el uso de un oligómero o un conjugado de acuerdo con la invención para la fabricación de un medicamento para l tratamiento de una enfermedad o trastorno médico asociado con la presencia o sobreexpresión de un microARN, tal como uno o más de los microARN a los que se hace referencia en el presente documento.

Los oligómeros de la invención se pueden usar en el tratamiento de una enfermedad o trastorno médico asociado con la presencia o sobreexpresión del microARN, comprendiendo el procedimiento la etapa de administrar una composición (tal como la composición farmacéutica) que comprende un oligómero o conjugado de acuerdo con la invención a un paciente que sufre, o es probable que sufra, dicha enfermedad o trastorno médico.

La invención proporciona un procedimiento in Vitro para reducir la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula, que comprende administrar a la célula el oligómero de la invención, o una composición (tal como una composición farmacéutica) que comprende el oligómero o conjugado de acuerdo con la invención.

La invención proporciona un procedimiento in vitro para reducir la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula, que comprende administrar a la célula el oligómero o conjugado o composición farmacéutica de acuerdo con la invención.

La invención proporciona un procedimiento in vitro para desreprimir un ARNm (o uno o más ARN) diana en una célula, que comprende administrar a dicha célula el oligómero o conjugado de acuerdo con la invención o una composición que comprende dicho oligómero o conjugado.

La invención proporciona el uso in vitro de un oligómero o un o conjugado de acuerdo con la invención para inhibir el microARN en una célula, que comprende dicho microARN, tal como una célula humana.

Breve descripción de los dibujos Figura 1. Presentación esquemática de los LNA-antimiR miR-21, miR-155 y miR-122 de 8 unidades, que indica las posiciones diana con el LNA-antimiR fosforotiolado y completamente modificado con LNA. También Se indican las posiciones de hibridación preferidas para oligonucleótidos LNA de 7, 8, 9 y 10 unidades del microARN maduro.

Figura 2. Evaluación del antagonismo de miR-21 mediante anti-miR de LNA de SEC ID Nº 3205 y SEC ID Nº 3204 en células MCF-7 usando un ensayo sensor de luciferasa. Las células MCF-7 se co-transfectaron con plásmidos con sensor de luciferasa que contienen un sitio diana de coincidencia perfecta para miR-21 o un... [Seguir leyendo]

1. Un oligómero de una longitud de 7-10 bases nucleotídicas, que comprende una secuencia de bases nucleotídicas contigua de 7-10 bases nucleotídicas, en el que al menos el 70 % de las unidades de bases nucleotídicas del oligómero son unidades de bases nucleotídicas de ácido nucleico bloqueado (LNA) y en el que el oligómero comprende al menos un enlace fosforotioato y en el que el oligómero es para uso en la reducción de la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula u organismo.

2. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 1, en el que al menos el 75 % de los enlaces internucleosídicos presentes entre las unidades de bases nucleotídicas de la secuencia de bases nucleotídicas contigua son enlaces internucleosídicos fosforotioato.

3. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 1, en el que todos los enlaces internucleosídicos presentes entre las unidades de bases nucleotídicas de la secuencia de bases nucleotídicas contigua son enlaces internucleosídicos fosforotioato.

4. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, que comprende una unidad de LNA en el

extremo 3’ y una unidad de LNA en el extremo 5’.

5. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que todas las unidades de bases nucleotídicas de la secuencia de bases nucleotídicas contigua son unidades de bases nucleotídicas de LNA.

6. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que la secuencia de bases nucleotídicas contigua comprende una secuencia que es complementaria a la secuencia semilla de una secuencia de microARN de mamífero, humano o viral.

7. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que el oligómero consiste en una secuencia de bases nucleotídicas contigua de 7 bases nucleotídicas de LNA, en el que todos los enlaces internucleosídicos son fosforotioato.

8. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el oligómero consiste en una secuencia de bases nucleotídicas contigua de 8 bases nucleotídicas de LNA, en el que todos los enlaces internucleosídicos son fosforotioato.

9. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que el oligómero consiste en una secuencia de bases nucleotídicas contigua de 9 bases nucleotídicas de LNA, en el que todos los enlaces internucleosídicos son fosforotioato.

10. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que el oligómero consiste en una secuencia de bases nucleotídicas contigua de 10 bases nucleotídicas de LNA, en el que todos los enlaces internucleosídicos son fosforotioato.

11. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso como medicamento.

12. Un procedimiento in vitro para reducir la cantidad eficaz de un microARN diana en una célula, que comprende administrar una composición que comprende el oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 110 para reducir la cantidad eficaz del microARN en la célula.