Un compuesto oligomérico constituido por la secuencia CsTscscscsasasascsgstsgscsgsCsCsa (SEC ID Nº 15),

en la que las letras en mayúscula designan los nucleótidos LNA, las letras minúsculas designan los nucleótidos de ADN, el subíndice "s" designa que los nucleótidos adyacentes están unidos por un grupo fosforotioato y en la que todos los monómeros LNA-C son metil-C

Compuestos oligoméricos para la modulación de Bcl-2.

Campo de la invención

La presente invención proporciona mejores compuestos oligoméricos y procedimientos para modular la expresión del gen Bcl-2 en seres humanos. En particular, la presente invención se refiere a un compuesto oligomérico que consta de la secuencia C_sT_sc_sc_sc_sa_sa_sc_sg_st_sg_sc_sg_sC_sC_sa (SEC ID Nº 15), en la que las letras en mayúscula designan los nucleótidos LNA, las letras minúsculas designan los nucleótidos de AND, el subíndice "s" designa que los nucleótidos adyacentes están unidos por un grupo fosforotioato y en la que todos los monómeros LNA-C son metil-C.

Por tanto, la presente invención se refiere a un compuesto oligomérico antisentido dirigido contra ARNm humano de Bcl-2 y que es capaz de modular la biosíntesis de la proteína Bc-2 humana. La presente invención se refiere además a una composición farmacéutica que comprende dicho compuesto oligomérico, a usos de la misma y a procedimientos de tratamiento y diagnóstico que utilizan dicho compuesto oligomérico.

Antecedentes de la invención

La proteína Bcl-2 humana, que está estrechamente asociada con el proceso de la muerte celular programada (apoptosis). La apoptosis es un proceso fisiológico activo estrechamente regulado implicado en el desarrollo, el recambio celular normal y la atrofia tisular inducida por hormonas. La ausencia de muerte celular programada desempeña un papel importante en el cáncer u otras enfermedades hiperproliferativas como reestenosis, fibrosis, psoriasis o ciertos tipos de enfermedades alérgicas, en particular la progresión tumoral y, de forma importante, podría contribuir al problema clínico de la resistencia a regímenes antineoplásicos, en particular a compuestos quimioterapéuticos estándar concretos. En contraste con la mayoría de los tejidos normales, en los tumores malignos, como el cáncer pulmonar de células pequeñas (CPCP) y el cáncer pulmonar de células no pequeñas (CPCNP), a menudo se produce co-expresión de Bcl-2.

El documento WO 95/08350 desvela oligómeros anticódigo y procedimientos para usarlos para controlar el crecimiento de células cancerosas que expresan en gen Bcl-2.

Klasa y col., Antisense & Nucleic Acid Drug Development 12: 193-213 (2002) (revisión), tratan los efectos biológicos del compuesto oblimersen sódico (G3139) y su potencial como fármaco antisentido. El compuesto tiene la estructura 5'-d(P-tio)TCT-CCC-AGC-GTG-CGC-CAT-3'. Genta Incorporated presentó a la FDA un NDA para oblimersen sódico (G3139) más dacarbazina (DTIC). Se baso en un estudio de fase 3 internacional, multicéntrico, aleatorizado de oblimersen sódico (G3139) más dacarbazina (DTIC) frente a DTIC solo cada tres semanas como quimioterapia de primera línea para el melanoma metastásico. En mayo de 2004, se comunicó que el estudio no mostraba un beneficio para la supervivencia con la combinación de G3139 más DTIC. La rama tratada con la combinación se asoció con un incremento de la toxicidad y retiradas debido a acontecimientos adversos (AA), incluidos 69 (18,6%) pacientes que suspendieron la terapia por acontecimientos adversos en la rama de tratamiento con G3139 frente a 39 (10,8%) en la rama tratada con DTIC solo. El índice de acontecimientos adversos graves, AAG, fue 40% en la rama de tratamiento con G3139 frente a 27% en la rama de tratamiento con DTIC solo. Dado que la dosificación de DTIC fue idéntica en las dos ramas, era probable que los incrementos de toxicidad se debieran a la adición de G3139. La supervivencia no mejoró ya aumentó la toxicidad. Posteriormente se retiró el NDA. No obstante, el análisis del promotor de criterios de valoración secundarios sí mostró un beneficio estadísticamente significativo en la supervivencia sin progresión desde una mediana de 49 días con DTIC a 74 días con la combinación, una diferencia de 25 días (p= 0,0003, HR= 0,73). Asimismo, el promotor comunicó una diferencia significativa en la tasa de respuestas del 6,8% para DTIC solo frente a 11,7% para la combinación (p= 0,019). El hecho de que oblimersen sódico cumpla el criterio de valoración secundario indica que podrían haber sido un compuesto eficaz para el Tratamiento del melanoma metastásico. La mayor toxicidad, la selección del criterio de valoración principal y el diseño global del estudio clínico, todos ellos fueron factores que contribuyeron al fracaso.

En una tesis doctoral defendida por Jan Stenvang Jepsen (mayo de 2003, Universidad de Copenhague) se estudiaron oligonucleótidos que contienen LNA dirigidos a los 6 primeros codones del ARNm humano de Bcl-2. Las secuencias LNA fosfodiéster (PO) completamente modificadas, headmer de fosforodiéster (LNA/PO en el extremo 5' y ADN/PS fosforotioato en el extremo 3'), gapmer de fosforodiéster completos (tamaños de los huecos de 8, 10, 12, 14) y gapmer con violación exclusiva en el hueco (tamaños de los huecos de 8, 10, 12, 14) se analizaron según la captación in vitro con diferentes agentes de transfección y según la regulación por disminución de la proteína Bcl-2. El estudio de captación se realizó en células MCF-7 y los resultados se analizaron mediante microscopia y citometría de flujo. Se obtuvo una liberación igualmente eficiente para todos los constructos que contienen diferentes PO y PO/PS. Aunque se han estudiado diversos oligonucleótidos y constructos que contienen LNA, Stenvang Jepsen no divulgó o anticipó gapmer de oligonucleótidos que contienen LNA en los que un número sustancial de los enlaces nucleotídico en el dominio de union a la diana, incluidos los flancos de LNA, incluidos los lados de LNA, eran grupos fosforotioato (-O-P(O,S)-O-), probablemente porque se sabía que la fosforotiolación causaría una reducción de la afinidad y porque no se identificaron problemas de estabilidad.

Frieden y col., Nucleic Acid Research, 2003, Vol. 31, Nº 21, 6365-6373 y el documento WO 2004/046160 A2 desvelan varias consideraciones con respecto al diseño de oligonucleótidos antisentido sobre la base de los experimentos in vitro.

Fluiter y col., Nucleic Acid Research, 2003, Vol. 3, 953-962, desvelan estudios de biodistribución e inhibición del crecimiento tumoral in vivo de los oligonucleótidos antisentido LNA. Zangemeister-Wittke, Annals of the New York Academy of Sciences, vol. 1002, diciembre 2003, pág. 90-94, describe un oligonucleótido antisentido modificado con LNA complementario al gen bcl-2 humano. La región objetivo es diferente de la región objetivo del oligonucleótido de acuerdo con la presente invención.

Zangemeister-Wittke, y col., Clinical Cancer Research, vol. 6. nº 6, 2000, pág. 2547-2555, describen la secuencia del oligonucleótido en la referencia anterior.

Mologni L y col., Biochemical and Biophysical Research Communications, vol 264, nº 2, 1999, pág. 537-543, divulga un oligonucleótido antisentido dirigido al sitio de inicio de la traducción de Bcl-2. No se realiza ninguna mención al LNA.

Breve descripción de la invención

En vista de lo anterior, y en particular de los problemas de potencia relacionados con el compuesto oblimersen sódico, sigue habiendo la necesidad de mejores compuestos oligoméricos para regular por disminución la Bcl-2. Preferentemente, dicho compuesto tendría un perfil in vivo adecuado con respecto a la distribución y la regulación por disminución de Bcl-2 y, por tanto, la relevancia terapéutica en relación con diversas afecciones relacionadas con Bcl-2, en particular cáncer.

Habiéndose dicho esto, actualmente los presentes inventores han encontrado que ciertos compuestos oligoméricos nuevos de LNA del tipo gapmer exhiben efectos biológicos comparables o potenciados en comparación con oblimersen sódico, aunque no se monitorizaron acontecimientos adversos a dosis farmacológicas relevantes.

Más específicamente, los presentes inventores han encontrado que un compuesto oligomérico que consta de la secuencia C_sT_sc_sc_sc_sa_sa_sc_sg_st_sg_sc_sg_sC_sC_sa (SEC ID Nº 15), en la que las letras en mayúscula designan los nucleótidos LNA, las letras minúsculas designan los nucleótidos de AND, el subíndice "S" designa que los nucleótidos adyacentes están unidos por un grupo fosforotioato y en la que todos los monómeros LNA-C son metil-C, tiene propiedades biológicas...

1. Un compuesto oligomérico constituido por la secuencia C_sT_sc_sc_sc_sa_sa_sa_sc_sg_st_sg_sc_sg_sC_sC_sa (SEC ID Nº 15), en la que las letras en mayúscula designan los nucleótidos LNA, las letras minúsculas designan los nucleótidos de ADN, el subíndice "s" designa que los nucleótidos adyacentes están unidos por un grupo fosforotioato y en la que todos los monómeros LNA-C son metil-C.

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que los nucleótidos LNA son nucleótidos beta-D-oxi-LNA.

3. Un conjugado que comprende el compuesto oligomérico de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2 y al menos un resto no nucleotídico/no polinucleotídico unido covalentemente a dicho compuesto.

4. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto oligomérico de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2 o un conjugado de acuerdo con la reivindicación 3 y un transportador farmacéuticamente aceptable.

5. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4, que comprende otro agente seleccionado del grupo constituido por compuestos quimioterapéuticos, compuestos antiinflamatorios, compuestos antivirales, compuestos citostáticos, compuestos antiangiogénicos, compuestos antiproliferativos, compuestos proapoptóticos, moduladores de la transducción de la señal e inhibidores de la quinasa.

6. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5, en la que el agente adicional comprende al menos un compuesto quimioterapéutico, tal como fludarabina o taxano.

7. Un compuesto oligomérico de acuerdo con las reivindicaciones 1 ó 2 o un conjugado de acuerdo con la reivindicación 3 para su uso como medicamento.

8. El compuesto oligomérico de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el medicamento es para el tratamiento de una enfermedad cancerosa.

9. El compuesto oligomérico de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la enfermedad cancerosa se selecciona del grupo constituido por leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica crónica, linfoma no Hodgkin, linfoma folicular y linfoma difuso de células B grandes.

10. Uso del compuesto oligomérico de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2 o un conjugado de acuerdo con la reivindicación 3 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad cancerosa.

11. El uso de acuerdo con la reivindicación 10, en el que la enfermedad cancerosa se selecciona del grupo constituido por leucemia mieloide aguda, leucemia linfocítica crónica, linfoma no Hodgkin, linfoma folicular y linfoma difuso de células B grandes.

12. El uso de acuerdo con la reivindicación 10 u 11, en el que dicho tratamiento se combina con la administración de un agente adicional seleccionado del grupo constituido por compuestos quimioterapéuticos, compuestos antiinflamatorios, compuestos antivirales, compuestos citostáticos, compuestos antiangiogénicos, compuestos antiproliferativos, compuestos proapoptóticos, moduladores de la transducción de la señal e inhibidores de la quinasa.

13. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10-12, en el que dicho medicamento se usa en combinación con al menos un compuesto quimioterapéutico, tal como fludarabina o taxano.

14. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10-13, en el que dicho medicamento se usa junto, o secuencialmente, con uno o más compuestos anticuerpos.

15. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10-14, en el que dicho compuesto oligomérico o agente adicional se usa en combinación con radioterapia.

16. Un procedimiento in vitro para inducir apoptosis celular, en el que dicho procedimiento comprende poner en contacto la célula con un compuesto oligomérico de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, o un conjugado de acuerdo con la reivindicación 3 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4, por lo que se induce la apoptosis celular.

17. Un procedimiento in vitro para prevenir o reducir la proliferación celular, en el que dicho procedimiento comprende poner en contacto la célula con un compuesto oligomérico de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, o un conjugado de acuerdo con la reivindicación 3 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 4, por lo que se previene o reduce la proliferación celular.