Método para romper un ácido nucleico y añadir un adaptador por medio de transposasa y reactivo.
Un metodo para romper un acido nucleico y anadir un adaptador por medio de una transposasa,
que comprende las siguientes etapas:
interrumpir aleatoriamente un acido nucleico mediante el uso de un complejo de insercion de transposasa, en donde el complejo de insercion de transposasa comprende una transposasa y un primer adaptador que comprende una secuencia de identificacion de transposasa, y ambos extremos del acido nucleico interrumpido se ligan por separado al primer adaptador para formar una brecha en cada extremo, en donde el primer adaptador es un adaptador bicatenario;
eliminar la transposasa en el sistema por medio de purificacion, o disociacion de la transposasa de una secuencia objetivo por desnaturalizacion o digestion de la transposasa por medio de tratamiento con reactivo quimico;
ligar a un segundo adaptador en la brecha mediante el uso de una ligasa, en donde la secuencia del segundo adaptador es diferente a la del primer adaptador, en donde el segundo adaptador tiene una modificacion que evita la autoligacion, y la modificacion en el segundo adaptador es una modificacion didesoxi de la base 3' terminal, en donde el segundo adaptador es un adaptador bicatenario; y
realizar una reaccion de PCR mediante el uso de cebadores dirigidos al primer adaptador y al segundo adaptador respectivamente, para obtener un producto cuyos dos extremos estan ligados respectivamente a secuencias adaptadoras diferentes;
en donde el primer adaptador tiene una modificacion para evitar la autoligacion y la interligacion con el segundo adaptador, en donde la modificacion del primer adaptador es una modificacion didesoxi de la base 3' terminal.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/CN2014/088542.
Solicitante: MGI Tech Co., Ltd.
Inventor/es: CHEN, RUOYING, ZHANG,YINGXIN, JIANG,HUI, GENG,CHUNYU, ZHANG,WENWEI, ALEXEEV,ANDREI, GUO,RONGRONG.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
- C12N15/11 C12N 15/00 […] › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
PDF original: ES-2821434_T3.pdf
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