Compuestos antagonistas de RNA para la modulación de beta-catenina.

Un oligómero de 10-18 nucleobases de longitud, capaz de inhibir la expresión del gen de ß-catenina,

que comprende una secuencia de nucleobases contiguas de un total de 10-18 nucleobases, en donde; o bien

i) dicha secuencia de nucleobases contiguas es homóloga en un 100% a una región correspondiente de SEQ ID NO 192; o,

ii) dicha secuencia de nucleobases contiguas comprende un solo apareamiento erróneo a una región correspondiente de SEQ ID NO: 192;

y en donde dicho oligómero es una molécula monocatenaria.

Compuestos antagonistas de RNA para la modulación de beta-catenina.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La invención se refiere a compuestos oligoméricos (oligómeros) , que están direccionados a mRNA de beta-catenina en una célula, conduciendo a expresión reducida de beta-catenina. La reducción de la expresión de beta-catenina es beneficiosa para una serie de trastornos médicos, tales como enfermedades hiperproliferativas, con inclusión del cáncer. La invención proporciona composiciones terapéuticas que comprenden oligómeros y métodos para modulación de la expresión de beta-catenina que utilizan dichos oligómeros, con inclusión de métodos de tratamiento.

ANTECEDENTES

La beta-catenina (conocida también como proteína asociada a cadherina y β-catenina) es un miembro de la familia de proteínas citosólicas cateninas y un elemento fundamental en el camino de señalización iniciado por las proteínas Wnt, mediadores de varios procesos del desarrollo. La beta-catenina sufre fosforilación después de estimulación por factores de crecimiento, dando como resultado adhesión celular reducida.

Se ha demostrado que el papel de la beta-catenina en el desarrollo del cáncer está regulado por el producto de expresión del gen APC (poliposis adenomatosa del colon) . La proteína supresora de tumores APC se fija a betacatenina, mientras que se demostró que la beta-catenina interacciona con factores de transcripción Tcf y Lef. Morin et al. informan que la proteína APC regula en sentido decreciente la activación de la transcripción mediada por betacatenina y Tcf-4 en el cáncer de colon. Sus resultados indican que la regulación de beta-catenina es crítica para el efecto supresor de tumores de APC y que esta regulación puede soslayarse por mutaciones en APC o betacatenina. Varios estudios informan acerca de la detección de mutaciones en beta-catenina en diversas líneas de células de cáncer y se han encontrado cantidades anormalmente altas de beta-catenina en líneas de células de melanoma.

Morin et al. demostraron que las mutaciones de beta-catenina que afectan a sitios de fosforilación hacían las células insensibles a la regulación decreciente de beta-catenina mediada por APC y que este mecanismo interrumpido era crítico para la tumorigénesis colorrectal (Morin et al., Science, 1997, 275-1787-1790) .

La Patente U.S. No. 6.066.500 otorgada a Bennett et al. describe compuestos antisentido, composiciones y métodos para modulación de la expresión de beta-catenina.

WO 01/00872 da a conocer compuestos antisentido para modulación de la expresión de beta-catenina.

Veeramachanemi et al. (J Thorac and Cardiovas Surg, 2004, 127:92-8) sugieren que la regulación decreciente de beta-catenina podría inhibir el crecimiento del cáncer de esófago humano.

Roh et al. (Cancer Research, 2001, 61:6563-6568) dan a conocer el uso de oligonucleótidos antisentido que regulan en sentido decreciente la expresión de β-catenina en células de carcinoma de colon humano que contienen mutantes de APC.

Canter et al (Annals of Surgical Oncology, 2005, 12 (9) : 733-742) dan a conocer el uso de oligodesoxinucleótidos antisentido para determinar si los mismos dan como resultado una regulación decreciente de β-catenina y si esto mejora la respuesta tumoral a la perfusión de miembros aislados en un modelo heterotrópico de CRC humano.

Green et al (J of Surgical Research, 2001, 101:16-20) informan que el tratamiento de xenoinjertos de carcinoma colorrectal con mutantes APC con β-catenina antisentido daba como resultado una regulación decreciente dependiente de la dosis de la expresión de la proteína β-catenina como se demostraba por transferencia Western.

Emanuele et al (European J of Cancer, 2004, 40:1441-1452) dan a conocer que en células HuH-6, el pretratamiento con ODN de β-catenina antisentido reducía el contenido de β-catenina y anticipaba el comienzo de la apoptosis a las 8 horas de exposición a butirato.

Li et al (Proceedings of the American Association for Cancer Research, 2005, 46:137) dan a conocer un estudio en el cual se desarrollan oligonucleótidos antisentido contra β-catenina como agentes anticáncer.

WO 03/031937 da a conocer marcadores polimórficos identificadores para resistencia a herbicidas en malezas.

WO 04/045543 da a conocer la silenciación de genes específicos de secuencia mediante el uso de tecnología de siRNA.

Considerando la indicación de la β-catenina en el desarrollo del cáncer, persiste la necesidad de agentes capaces de inhibir eficazmente la función de la β-catenina.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona un oligómero de entre 10 y 50 nucleobases de longitud que comprende una secuencia de nucleobases contiguas de un total comprendido entre 10 y 50 nucleobases, en donde dicha secuencia de nucleobases contiguas es al menos homóloga en un 80% a una región correspondiente de un ácido nucleico que codifica una β-catenina de mamífero.

La invención proporciona un oligómero de entre 10 y 50 nucleobases de longitud que comprende una secuencia de nucleobases contiguas con un total comprendido entre 10 y 50 nucleobases, en donde dicha secuencia de nucleobases contiguas es homóloga al menos en un 80% a una región correspondiente de una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo constituido por SEQ ID NO 173 y SEQ ID NOs 174-193.

La invención proporciona oligómeros que tienen entre 10 y 50 nucleobases de longitud, que comprende una secuencia de nucleobases contiguas con un total comprendido entre 10 y 50 nucleobases, en donde dicha secuencia de nucleobases contiguas es homóloga al menos en un 80% a una región correspondiente de una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo constituido por SEQ ID NO 1-192.

La invención proporciona además un conjugado que comprende el oligómero de acuerdo con la invención, tal como un conjugado que, además de la secuencia de nucleobases del oligómero comprende al menos un resto no nucleotídico (es decir no constituido por nucleobases) o no polinucleotídico unido covalentemente al oligómero de la invención. El resto no nucleotídico o no polinucleotídico puede estar constituido por o comprender un grupo esterol tal como colesterol, u otro resto que facilite la entrada en la célula.

La invención proporciona un conjugado que comprende el oligómero de acuerdo con la invención, tal como un conjugado que, además de la secuencia de nucleobases del oligómero, comprende un conjugado polímero que contiene restos cargados positivamente, tales como polietilenglicol (PEG) - es decir, el oligómero de acuerdo con la invención puede, opcionalmente, estar pegilado.

La invención proporciona una composición farmacéutica que comprende el oligómero o el conjugado de la invención como se ha definido, y un diluyente, portador, sal o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

La invención proporciona además un oligómero de acuerdo con la invención, para uso en medicina.

La invención proporciona además el uso del oligómero de la invención para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una o más de las enfermedades a que se hace referencia en esta memoria, tales como una enfermedad seleccionada de: enfermedades hiperproliferativas tales como aquéllas a las que se hace referencia en esta memoria, tales como el cáncer.

La invención proporciona además un oligómero de acuerdo con la invención, para uso en el tratamiento de una o más de las enfermedades a que se hace referencia en esta memoria, tales como el cáncer.

Se proporcionan también composiciones farmacéuticas y otras composiciones que comprenden el oligómero o conjugado de la invención. Se proporcionan adicionalmente métodos de regulación en sentido decreciente de la expresión de beta-catenina en células o tejidos que comprenden poner en contacto dichas células o tejidos, in vitro o in vivo, con uno o más de los oligómeros, conjugados o composiciones de la invención.

Se dan a conocer también métodos de tratamiento de un animal o un humano, sospechoso de padecer o ser propenso a padecer una enfermedad o afección, asociada con la expresión, o sobre-expresión, de beta-catenina, por administración a dicho animal o humano de una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz de uno o más de los oligómeros, conjugados o composiciones de la invención.

Se proporcionan adicionalmente métodos de utilización de los oligómeros para la inhibición de la expresión de betacatenina, y para el tratamiento de enfermedades asociadas con la actividad de beta-catenina.

La invención proporciona un método para tratamiento... [Seguir leyendo]

1. Un oligómero de 10-18 nucleobases de longitud, capaz de inhibir la expresión del gen de β-catenina, que comprende una secuencia de nucleobases contiguas de un total de 10-18 nucleobases, en donde; o bien i) dicha secuencia de nucleobases contiguas es homóloga en un 100% a una región correspondiente de SEQ ID NO 192; o, ii) dicha secuencia de nucleobases contiguas comprende un solo apareamiento erróneo a una región correspondiente de SEQ ID NO: 192; y en donde dicho oligómero es una molécula monocatenaria.

2. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la secuencia de nucleobases contiguas no comprende apareamiento erróneo alguno con la región correspondiente de SEQ ID NO 192.

3. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde la secuencia de nucleobases del oligómero consiste en la secuencia de nucleobases contiguas.

4. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde la secuencia de nucleobases contiguas comprende análogos de nucleótidos, tales como nucleótidos modificados en el azúcar seleccionados del grupo constituido por: unidades de Ácido Nucleico Bloqueado (LNA) ; unidade.

2. O-alquil-RNA, unidade.

2. OMe-RNA, unidade.

2. amino-DNA, y unidade.

2. fluoro-DNA.

5. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 4, en donde los análogos de nucleótidos son LNA.

6. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 4 ó 5, que es un gapmero o.

7. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que inhibe la expresión del gen o mRNA de β-catenina en una célula que expresa el gen o mRNA de β-catenina.

8. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la secuencia de nucleobases de dicho oligómero consiste en SEQ ID NO: 103 o SEQ ID NO: 151.

9. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde en donde el oligómero es SEQ ID NO 171: GsTsGststscstsascsascscsasTsTsA en donde las letras minúsculas representan unidades de DNA; las letras mayúsculas en negrita representan unidades β-D-oxi-LNA; todos los C de LNA son C 5'metilo; y el subíndice "s" representa un enlace fosforotioato.

10. Un conjugado que comprende el oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, y al menos un resto no-nucleotídico o no-polinucleotídico unido covalentemente a dicho oligómero.

11. Una composición farmacéutica que comprende el oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o el conjugado de acuerdo con la reivindicación 10, y un diluyente, portador, sal o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

12. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o el conjugado de acuerdo con la reivindicación 10, para uso como medicamento, por ejemplo para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo, tal como el cáncer.

13. El uso de un oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o un conjugado como se define en la reivindicación 10, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo, tal como el cáncer.

14. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 12 o el uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el oligómero es como se indica en la reivindicación 9.

15. Un método in vitro para la inhibición de β-catenina en una célula que expresa β-catenina, comprendiendo dicho método administrar un oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o un conjugado de acuerdo con la reivindicación 10 a dicha célula a fin de inhibir la β-catenina en dicha célula.

Figura 1