Antagonistas basados en LNA dirigidos al receptor de andrógenos.

Un oligómero que tiene una secuencia de nucleótidos contiguos de un total de 10 - 30 nucleótidos,

en el que dicha secuencia de nucleótidos contiguos es al menos 80% homóloga al complemento inverso de una región correspondiente de un gen o ARNm del receptor de andrógenos de mamífero, en el que dicho oligómero comprende al menos una unidad de LNA, y en el que la secuencia de nucleótidos contiguos comprende al menos nucleótidos contiguos que son 100% idénticos a una correspondiente región de SEQ ID NO 94 o SEQ ID NO 58.

Antagonistas basados en LNA dirigidos al receptor de andrógenos

Campo de la invención La presente descripción proporciona compuestos, composiciones y métodos para modular la expresión del receptor de andrógenos. En particular, esta invención se refiere a compuestos oligómeros (oligómeros) , que se dirigen al ARNm del receptor de andrógenos en una célula, que conducen a una expresión reducida del receptor de andrógenos. La reducción de la expresión del receptor de andrógenos es beneficiosa para una variedad de trastornos médicos, tales como el cáncer, en particular el cáncer de próstata o cáncer de mama.

Casos relacionados Esta solicitud reivindica el beneficio de conformidad con 35 U.S.C. 119 (e) de la solicitud provisional de EE.UU. de número de serie 60/990.125 presentada el 26 de noviembre de 2007.

Antecedentes El receptor de andrógenos (AR) es un tipo de receptor nuclear que es activado por la unión de cualquiera de las hormonas androgénicas testosterona o dihidrotestosterona. La función principal del receptor de andrógenos es un factor de transcripción de unión al ADN que regula la expresión génica. Sin embargo, el receptor de andrógenos también tiene funcionales adicionales independientes de la unión al ADN. El receptor de andrógenos está muy estrechamente relacionado con el receptor de progesterona, y las progestinas en dosis más altas pueden bloquear

el receptor de andrógenos.

Aunque en seres humanos el gen del AR es una copia sencilla y se encuentra en el cromosoma X en la posición Xq11-12, el propio receptor existe en dos isoformas (A y B) . AR-A es una proteína de 87 kDa que carece de los 187 primeros aminoácidos (truncado N-terminal) . La isoforma AR-B es la versión de longitud completa de 110 kDa.

La unión del andrógeno al receptor de andrógenos induce un cambio conformacional en el receptor, dando como resultado una disociación de las proteínas de choque térmico, dimerización y transporte desde el citosol al núcleo celular donde el dímero del receptor de andrógenos se une a secuencias específicas de ADN, denominadas elementos de respuesta a hormonas. Dependiendo de la interacción con otras proteínas nucleares, la expresión de los genes de control de AR, aumentan o disminuyen la transcripción de genes específicos, tales como el factor de crecimiento similar a insulina I (IGF-1) .

Los receptores de andrógenos también pueden tener actividades citoplasmáticas aunque con proteínas de transducción de señales en el citoplasma. La unión de andrógenos a receptores de andrógenos citoplasmáticos puede producir cambios rápidos en la función celular independientes de la transcripción génica, por ejemplo transporte de iones, así como tener influencia indirecta en la transcripción génica, por ejemplo mediando otras rutas de transducción de señales, influyendo así en la actividad de otros factores de transcripción.

Se ha indicado en varias enfermedades la expresión en exceso del receptor de andrógenos, o la expresión de genes 45 del receptor de andrógenos mutados, tales como el cáncer, incluyendo el cáncer de próstata y el cáncer de mama, así como otros trastornos tales como enfermedad relacionada con poliglutamato (Monks y col., PNAS 2 de noviembre 2007, publicado en línea) , alopecia, hiperplasia prostática benigna, atrofia espinal y muscular y enfermedad de Kennedy.

El documento WO 97/11170 publica un método para tratar un paciente al que se ha diagnosticado que tiene hiperplasia prostática benigna o un cáncer de próstata, que comprende administrar un oligonucleótido de sentido contrario que hibrida selectivamente con el ARNm del receptor de andrógenos. Se describen 3 secuencia de oligonucleótido de sentido contrario de entre 27-29 nucleótidos.

Los documentos US 6.733.776 y EP 0692972 publican un método para tratar la alopecia androgénica aplicando liposomas que comprenden un ácido nucleico de sentido contrario que hibrida con un gen del receptor de andrógenos. No se proporcionan moléculas de sentido contrario con secuencias específicas y dirigidas al receptor de andrógenos.

El documento US 2005/0164970 publica un método para tratar el cáncer de próstata usando complejos de ARNip dirigidos al ARNm del receptor de andrógenos.

El documento WO 2005/027833 publica un método para tratar el cáncer de próstata que comprende administrar al paciente un morfolino-oligonucleótido de entre 12-40 subunidades de morfolino de longitud.

El documento WO 2001/083740 publica un compuesto de sentido contrario que tiene una cadena principal de morfolino no cargada de entre 18 a 20 unidades contiguas que se dirige al receptor de andrógenos humano.

Los compuestos de sentido contrario de morfolino funcionan a través de la unión al ácido nucleico diana para bloquear el acceso al ARNm por otras moléculas, tales como moléculas implicadas en el empalme o inicio de la 5 traducción de ARNm.

El documento US 7.067.256 publica un ribozima que parece que media la inactivación del receptor de andrógenos. Se proporciona una molécula de ARN de 19 nucleótidos de sentido contrario a una región correspondiente del ARNm del receptor de andrógenos.

Sin embargo, a pesar de la aplicación de ARNip, compuestos de morfolino de sentido contrario y ribozimas, ninguno de los inhibidores de receptores de andrógenos anteriores ha tenido éxito en la regulación en defecto eficaz del receptor de andrógenos in vivo y con dosis farmacológicamente aceptables.

En un aspecto de ejemplo, la presente invención proporciona una nueva clase de antagonistas de receptor de andrógenos que se ha seleccionado basándose en la química del uso de LNA, y/o por la selección de sitios diana particularmente eficaces en el ARNm del receptor de andrógenos.

Sumario de la invención La presente invención proporciona un oligómero que tiene una secuencia de nucleótidos contiguos de un total de 1030 nucleótidos, en el que dicha secuencia de nucleótidos contiguos es al menos 80% homóloga al complemento inverso de una región correspondiente de un gen o ARNm de receptor de andrógenos de mamífero, en el que dicho oligómero comprende al menos una unidad de LNA; y en el que la secuencia de nucleótidos contiguos comprende al

menos 10 nucleótidos contiguos que son 100% idénticos a la región correspondiente de SEQ ID NO 94 o SEQ ID NO 58.

En un otro aspecto, la presente invención proporciona un conjugado que comprende el oligómero de acuerdo con la presente invención, y al menos un resto no nucleótido o no polinucleótido unido covalentemente a dicho oligómero.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende el oligómero de acuerdo con la presente invención, o el conjugado de acuerdo con la presente invención, y un diluyente, vehículo, sal o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

La presente invención proporciona, en un aspecto adicional, el oligómero de acuerdo con la presente invención, o el conjugado de acuerdo con la presente invención, para usar como un medicamento, tal como para el tratamiento de una enfermedad o un trastorno médico como se describe en el presente documento, tal como un trastorno hiperproliferativo, tal como el cáncer.

La presente invención proporciona, en otro aspecto, el uso de un oligómero de acuerdo con la presente invención, o un conjugado como se define en el presente documento, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o un trastorno médico como se describe en el presente documento, tal como un trastorno hiperproliferativo, tal como el cáncer.

En otro aspecto, la presente invención proporciona un método in vitro para inhibir el receptor de andrógenos en una célula que expresa el receptor de andrógenos, comprendiendo dicho método administrar un oligómero de acuerdo con la presente invención, o un conjugado de acuerdo con la presente invención, a dicha célula de modo que inhiba al receptor de andrógenos en dicha célula.

La descripción proporciona un oligómero de entre 10 - 50, tal como 10 - 30 nucleótidos de longitud que comprende una secuencia de nucleótidos contiguos de un total de entre 10 - 50, tal como 10 - 30 nucleótidos, en el que dicha secuencia de nucleótidos contiguos es al menos 80% (por ejemplo, 85%, 90%, 95%, 98% o 99%) homóloga a una región correspondiente al complemento inverso de un ácido nucleico que codifica un receptor de andrógenos de mamífero, tal como un gen o ARNm de receptor de andrógenos de mamífero, tal como la SEQ ID NO: 1 o variantes 55 naturales de la misma. Así, por ejemplo, el oligómero hibrida con una molécula de ácido nucleico monocatenario... [Seguir leyendo]

1. Un oligómero que tiene una secuencia de nucleótidos contiguos de un total d.

10. 30 nucleótidos, en el que dicha secuencia de nucleótidos contiguos es al menos 80% homóloga al complemento inverso de una región correspondiente de un gen o ARNm del receptor de andrógenos de mamífero, en el que dicho oligómero comprende al menos una unidad de LNA, y en el que la secuencia de nucleótidos contiguos comprende al menos 10 nucleótidos contiguos que son 100% idénticos a una correspondiente región de SEQ ID NO 94 o SEQ ID NO 58.

2. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la secuencia de nucleótidos contiguos comprende la SEQ ID NO 94 o SEQ ID NO 58.

3. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que la secuencia de nucleótidos contiguos tien.

10. 22 nucleótidos de longitud.

4. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la secuencia de nucleótidos contiguos tien.

10. 18 nucleótidos de longitud

5. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la secuencia de nucleótidos contiguos comprende otros análogos de nucleótidos.

6. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 5, en el que los análogos de nucleótidos son nucleótidos con azúcar modificado, tal como nucleótidos con azúcar modificado seleccionados del grupo que consiste en: unidades de ácido nucleico bloqueado (LNA) ; unidades d.

2. O-alquil-ARN, unidades d.

2. OMe-ARN, unidades d.

2. amino-ADN y unidades d.

2. fluoro-ADN.

7. El oligómero de acuerdo con la reivindicación 5, en el que los análogos de nucleótidos son LNA.

8. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, que es un oligómero con huecos.

9. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que es capaz de regular en defecto la expresión del gen o ARNm del receptor de andrógenos en una célula que expresa el gen o ARNm del receptor de andrógenos.

10. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el oligómero consiste en:

5'-A·sMeC·sMeC·sa·sa·sg·st·st·st·sc·st·st·sc·sA·sG·sMeC-3' (SEQ ID NO: 58) ,

en el que las letras mayúsculas indican monómeros beta-D-oxi-LNA y las letras minúsculas indican monómeros de ADN, el subíndice “s” indica una unión fosforotioato, y MeC indica un monómero beta-D-oxi-LNA que contiene una base 5-metilcitosina.

11. Un conjugado que comprende el oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, y al menos un resto no nucleótido o no polinucleótido unido covalentemente a dicho oligómero.

12. Una composición farmacéutica que comprende el oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o el conjugado de acuerdo con la reivindicación 11, y un diluyente, vehículo, sal o adyuvante farmacéuticamente aceptable.

13. El oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o el conjugado de acuerdo con la reivindicación 11, para usar como un medicamento, tal como para el tratamiento de una enfermedad o un trastorno médico como se describe en el presente documento, tal como un trastorno hiperproliferativo, tal como el cáncer.

14. El uso de un oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o un conjugado como se define en la reivindicación 11, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o un trastorno médico como se describe en el presente documento, tal como un trastorno proliferativo, tal como el cáncer.

15. Un método in vitro para inhibir el receptor de andrógenos en una célula que expresa el receptor de andrógenos, comprendiendo dicho método administrar un oligómero de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o un conjugado de acuerdo con la reivindicación 11, a dicha célula para así inhibir el receptor de andrógenos en dicha célula.