Un anticuerpo del receptor de IL-4 (IL-4R) que comprende los residuos de aminoácido.

Uso de anticuerpos IL-4R y sus composiciones

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La interleuquina-4 (IL-4) , previamente conocida como factor estimulante de células B, o BSF-1, se caracterizó originalmente por su capacidad de estimular la proliferación de las células B en respuesta a bajas concentraciones de anticuerpos dirigidos a inmunoglobulinas de superficie. Se ha mostrado que IL-4 posee un espectro mucho más amplio de actividades biológicas, incluyendo la co-estimulación del crecimiento de las células T, mastocitos, granulocitos, megacariocitos y eritrocitos. Además, IL-4 estimula la proliferación de varias líneas celulares dependientes de IL-2 e IL-3, induce la expresión de moléculas de la clase II del complejo de histocompatibilidad principal en células B no estimuladas y aumenta la secreción de los isotipos IgE e IgG1 por las células B estimuladas. IL-4 está asociada con una respuesta inmune de tipo TH2, siendo una de las citoquinas secretadas por las células TH2.

Las IL-4 murinas y humanas se han identificado y caracterizado, incluyendo la clonación de los ADNc de IL-4 y la determinación de las secuencias de nucleótidos y aminoácidos codificadas. (Véanse Yokota et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83: 5894, 1986; Noma et al., Nature 319: 640, 1986; Grabstein et al., J. Exp. Med. 163: 1405, 1986; y Patente U.S. 5.017.691) .

IL-4 se une a receptores de la superficie celular particulares, lo que resulta en la transducción de una señal biológica a las células como varias células efectoras inmunes. Los receptores de IL-4 se han descrito y la información sobre la secuencia de ADN y aminoácidos se presentan en Mosley et al., Cell 59: 335-348, 20 de octubre, 1989 (IL-4R murino) ; Idzerda et al., J. Exp. Med. 171: 861-873, marzo 1990 (IL-4R humano) ; y Patente U.S. 5.599.905. El receptor de IL-4 descrito en estas publicaciones se refiere algunas veces como IL-4Ra.

Se ha publicado que otras proteínas están asociadas con IL-4Ra en algunos tipos celulares y que son componentes de complejos del receptor de IL-4 con múltiples subunidades. Una de dichas subunidades es IL-2Ry, también conocido como IL-2Ryc. (Véase la discusión sobre los complejos de IL-4R en Sato et al., Current Opinion in Cell Biology, 6: 174179, 1994) . Se ha publicado que IL-4Ra es un componente de determinados complejos del receptor de IL-13 con múltiples subunidades (Zurawski et al., J. Biol. Chem. 270 (23) , 13869, 1995; de Vries, J. Allergy Clin. Immunol. 102 (2) : 165, agosto 1998; y Callard et al., Immunology Today, 17 (3) : 108, marzo 1996) .

IL-4 se ha implicado en varios trastornos, ejemplos de los cuales son la alergia y el asma. Los estudios sobre las propiedades biológicas de IL-4 continúan, en un esfuerzo para identificar actividades adicionales asociadas con esta citoquina pleyotrópica y para elucidar el papel que puede jugar IL-4 en varios procesos biológicos y enfermedades.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un anticuerpo frente al receptor de IL-4 (IL-4R) que comprende los residuos de aminoácidos 24-35, 51-57 y 90-97 de SEQ ID NO:6 y los residuos de aminoácidos 31-35, 50-66 y 99-107 de SEQ ID NO:8; los residuos de aminoácidos 24-35, 51-57 y 90-99 de SEQ ID NO:10 y los residuos de aminoácidos 31-35, 50-65 y 98-104 de SEQ ID NO:12; los residuos de aminoácidos 24-35, 51-57 y 90-99 de SEQ ID NO:14 y los residuos de aminoácidos 31-35, 50-66 y 99-105 de SEQ ID NO:16; los residuos de aminoácidos 24-34, 50-56 y 89-97 de SEQ ID NO:18 y los residuos de aminoácidos 31-35, 50-65 y 98-112 de SEQ ID NO:20; los residuos de aminoácidos 24-34, 5056 y 89-97 de SEQ ID NO:22 y los residuos de aminoácidos 31-35, 50-66 y 99-106 de SEQ ID NO:24; o los residuos de aminoácidos 24-34, 50-56, 89-97 de SEQ ID NO:26 y 31-35, 50-66 y 99-106 de SEQ ID NO:24; en el que dicho anticuerpo IL-4R se une a IL-4R humano.

También se proporciona una composición que comprende el anticuerpo IL-4R de la invención comprende adicionalmente un diluyente, excipiente o vehículo.

Se proporciona un anticuerpo IL-4R de la invención para uso en el tratamiento del asma o la dermatitis atópica.

También se proporciona el uso de un anticuerpo IL-4R de la invención en la fabricación de un medicamento para tratar asma o dermatitis atópica.

DESCRIPCIÓN BREVE DE LOS DIBUJOS

Las FIGURAS 1A-C presentan la secuencia de nucleótidos de la región codificadora de un ADNc del receptor de IL-4 humano. También se presenta la secuencia de aminoácidos codificada por el ADNc. El clon de ADNc se aisló a partir de una biblioteca de ADNc obtenida de una línea de células T humana T22. La proteína codificada comprende (desde el extremo N al C terminal) un péptido señal N-terminal, seguido de un dominio extracelular, una región transmembrana (subrayada) y un dominio citoplásmico, como se discute adicionalmente más adelante. Las secuencias del ADN y de aminoácidos de las Figuras 1A a 1C también se presentan en las SEQ ID NOS:1 y 2, respectivamente.

Las Figuras 2A a 2C representan la inserción dirigida de un casete neo en el sitio Sma I del exón J1. La construcción se empleó para generar ratones transgénicos, como se describe en el Ejemplo 2. La Figura 2A es un diagrama esquemático de la estructura genómica del locus J. Las cajas llenas representan los exones J. La Figura 2B es una diagrama esquemático del vector de direccionamiento CmD. Las líneas de puntos indican aquellas secuencias genómicas J incluidas en la construcción. Las secuencias plasmídicas no se muestran. La Figura 2C es un diagrama esquemático del locus diana J en el que el casete neo se ha insertado en J1.

Las Figuras 3A y 3B presentan la secuencia de nucleótidos de un vector designado pGP1k, como se describe en el Ejemplo 3 más adelante. Esta secuencia de nucleótidos también se presenta en SEQ ID NO:4.

La Figura 4 presenta un alineamiento de las secuencias de aminoácidos de la región variable de la cadena ligera (región VL, designada VK para cadena variable kappa) para varios anticuerpos producidos frente a IL-4R humano. Estos anticuerpos y secuencias se describen adicionalmente en los ejemplos 6, 8 y 9 más adelante. La primera secuencia en el alineamiento es para un anticuerpo designado 1B7. En las secuencias para los demás anticuerpos, se muestran los residuos que se diferencian del residuo encontrado en esa posición en 1B7 y los residuos que son idénticos al residuo encontrado en esa posición en 1B7 están indicados por "-".

La Figura 5 presenta un alineamiento de las secuencias de aminoácidos de la región variable de la cadena pesada (VH) para varios anticuerpos producidos frente a IL-4R humano. Estos anticuerpos y secuencias se describen adicionalmente en los ejemplos 6, 8 y 9 más adelante. La primera secuencia en el alineamiento es para un anticuerpo designado 1B7. En las secuencias para los demás anticuerpos, se muestran los residuos que se diferencian del residuo encontrado en esa posición en 1B7 y los residuos que son idénticos al residuo encontrado en esa posición en 1B7 están indicados por "-".

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona un anticuerpo frente al receptor de IL-4 que se une a IL-4R humano, como se describe más adelante. También se refiere al uso de un anticuerpo en el tratamiento del asma o dermatitis atópica, a una composición que comprende un anticuerpo y a un anticuerpo frente al receptor de IL-4 en la fabricación de un medicamento para tratar asma o dermatitis atópica. El anticuerpo IL-4R de la invención comprende los residuos de aminoácidos 24-35, 51-57 y 90-97 de SEQ ID NO:6 y los residuos de aminoácidos 31-35, 50-66 y 99-107 de SEQ ID NO:8; los residuos de aminoácidos 24-35, 51-57 y 90-99 de SEQ ID NO:10 y los residuos de aminoácidos 31-35, 50-65 y 98-104 de SEQ ID NO:12; los residuos de aminoácidos 24-35, 51-57 y 90-99 de SEQ ID NO:14 y los residuos de aminoácidos 31-35, 50-66 y 99-105 de SEQ ID NO:16; los residuos de aminoácidos 24-34, 50-56 y 89-97 de SEQ ID NO:18 y los residuos de aminoácidos 31-35, 50-65 y 98-112 de SEQ ID NO:20; los residuos de aminoácidos 24-34, 5056 y 89-97 de SEQ ID NO:22 y los residuos de aminoácidos 31-35, 50-66 y 99-106 de SEQ ID NO:24; o los residuos de aminoácidos 24-34, 50-56, 89-97 de SEQ ID NO:26 y 31-35, 50-66 y 99-106 de SEQ ID NO:24.

Entre las afecciones para las que se puede considerar el tratamiento están artritis séptica/reactiva, dermatitis herpetiforme, urticaria idiopática crónica, escleroderma, cicatrización... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo del receptor de IL-4 (IL-4R) que comprende los residuos de aminoácido.

2. 35.

5. 57 .

9. 97 de SEQ ID NO:6 y los residuos de aminoácido.

3. 35.

5. 66 .

9. 107 de SEQ ID NO:8; los residuos de aminoácido.

2. 35, 5157 .

9. 99 de SEQ ID NO:10 y los residuos de aminoácido.

3. 35.

5. 65 .

9. 104 de SEQ ID NO:12; los residuos de aminoácido.

2. 35.

5. 57 .

9. 99 de SEQ ID NO:14 y los residuos de aminoácido.

3. 35.

5. 66 .

9. 105 de SEQ ID NO:16; los residuos de aminoácido.

2. 34.

5. 56 .

8. 97 de SEQ ID NO:18 y los residuos de aminoácido.

3. 35.

5. 65 .

9. 112 de SEQ ID NO:20; los residuos de aminoácido.

2. 34.

5. 56 .

8. 97 de SEQ ID NO:22 y los residuos de aminoácido.

3. 35.

5. 66 .

9. 106 de SEQ ID NO:24; o los residuos de aminoácido.

2. 34.

5. 56.

8. 97 de SEQ ID NO:26 .

3. 35.

5. 66 .

9. 106 de SEQ ID NO:24, en el que dicho anticuerpo IL-4R se une a IL-4R humano.

2. Un anticuerpo IL-4R de la reivindicación 1 que comprende SEQ ID NO:6 y SEQ ID NO:8; SEQ ID NO:10 y SEQ ID NO:12; SEQ ID NO:14 y SEQ ID NO:16; SEQ ID NO:18 y SEQ ID NO:20; SEQ ID NO:22 y SEQ ID NO:24; o SEQ ID NO:26 y SEQ ID NO:24.

3. Un anticuerpo IL-4R de la reivindicación 1 en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal humano.

4. Una composición que comprende el anticuerpo IL-4R de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende adicionalmente un 15 diluyente, excipiente o vehículo.

5. Un anticuerpo IL-4R de las reivindicaciones 1 a 3 para uso en el tratamiento del asma o la dermatitis atópica.

6. Un anticuerpo IL-4R de las reivindicaciones 1 a 3, o para uso según la reivindicación 5, en el que dicho anticuerpo inhibe la unión de IL-4 a un IL-4R.

7. Un anticuerpo IL-4R de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para uso en el tratamiento del asma.

8. Un anticuerpo IL-4R de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso según la reivindicación 7 en combinación con un agente seleccionado del grupo que consiste en corticosteroides inhalados, xantenos, fluticasona, salmeterol, albuterol y un inhibidor de la 5-lipoxigenasa.

9. Uso de un anticuerpo IL-4R de las reivindicaciones 1 a 3 en la fabricación de un medicamento para tratar el asma o la dermatitis atópica.

FIGURA 1A FIGURA 1B FIGURA 1C

FIGURA 3A FIGURA 3B