Anticuerpos que se unen al receptor de interleucina 4.

Un anticuerpo aislado que se une al receptor de IL-4, que comprende un dominio variable de cadena ligera,

donde

a. la cadena ligera CDR1 comprende los residuos 24-35 de la SEC ID NO:6 y

b. la cadena ligera CDR2 comprende los residuos 51-57 de la SEC ID NO:6, y

c. la cadena ligera CDR3 comprende los residuos 90-99 de la SEC ID NO:6.; y un dominio variable de cadena pesada, donde las secuencias de la cadena pesada CDR1, CDR2 y CDR3 comprenden los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:16, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:18,

respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 20, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:22, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:26, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:28, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:30, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID N032, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 34, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:38, respectivamente o los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:40, respectivamente.

Anticuerpos que se unen al receptor de interleucina 4

REFERENCIA CRUZADA CON LA SOLICITUD RELACIONADA

La presente solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional estadounidense num. 60/518, 166, presentada 5 el 7 de noviembre de 2003.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

La interleucina 4 (IL-4) , previamente conocida como factor estimulante de celulas B, o BSF-1, se caracteriz6 originalmente por su capacidad de estimular la proliferación de celulas B en respuesta a bajas concentraciones de anticuerpos dirigidos a la inmunoglobulina superficial. Se ha demostrado que la IL-4 posee un espectro mucho mas 10 amplio de actividades biológicas, que incluye la co-estimulación del crecimiento de celulas T, mastocitos, granulocitos, megacariocitos y eritrocitos. Ademas, la IL-4 estimula la proliferación de diversas lfneas celulares dependientes de IL-2- e IL-3-, induce la expresión de las moleculas del complejo de histocompatibilidad mayor de clase II en celulas B en reposo y potencia la secreción de los isotipos IgE e lgG1 por celulas B estimuladas. La IL-4 esta asociada a una respuesta inmunitaria de tipo TH2-, siendo una de las citocinas segregadas por las celulas TH2.

Se ha identificado y caracterizado IL-4 murina y humana, incluyendo la clonación de cDNA de IL-4 y la determinación de las secuencias de aminoacidos codificadas y nucleotfdicas. Veanse Yokota et a/., 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83:5894; Noma et a/., 1986, Nature 319:640; Grabstein et a/., 1986, J. Exp. Med. 163:1405 y la patente estadounidense 5, 017, 691.

La IL-4 se une a receptores particulares de la superficie celular, lo cual resulta en la transducción de una senal biológica a celulas tales como celulas efectoras inmunitarias. Los receptores de IL-4 se describen, y la información sobre DNA y secuencia de aminoacidos se presenta, en Mosley et a/., 1989, Cell 59:335-48, (IL-4R murina) ; Idzerda et a/, 1990, J. Exp. Med. 171:861-73, (IL-4R humana) ; y en la patente estadounidense 5, 599, 905. El receptor de IL-4 descrito en estas publicaciones algunas veces se denomina IL-4R alfa.

Se han publicado otras protefnas asociadas con IL-4R alfa en algunos tipos de celulas, y que son componentes de complejos receptores de IL-4to de multi-subunidades. Una de dichas subunidades es IL-2R gamma, tambien conocida como 1L-2R gamma c. Vease el analisis de complejos IL-4R en Sato et a/., 1994, Current Opinion in Cell Biology, 6:174-79. Tambien se ha publicado que IL-4R alfa es un componente de ciertos complejos receptores de IL13 de multi-subunidades. Venase Zurawski et a/., 1995, J. Biol. Chem. 270:13869; de Vries, 1998, J. Allergy Clin. Immunol. 102:165; y Callard et a/., 1996, Immunology Today, 17:108.

Se ha implicado a IL-4 en una serie de trastornos, cuyos ejemplos son alergia y asma.

SUMARIO DE LA INVENCION

La presente invención provee metodos y composiciones relacionados con nuevos antagonistas de IL-4R, que son anticuerpos y derivados de anticuerpos, que se unen a IL-4R alfa. La presente invención proporciona un anticuerpo aislado que se une al receptor de IL-4, comprendiendo un dominio variable de cadena ligera, en donde

a. la cadena ligera CDR1 comprende los residuos 24-35 de SEC ID NO:6 y

b. la cadena ligera CDR2 comprende los residuos 51-57 de SEC ID NO:6, y

c. la cadena ligera CDR3 comprende los residuos 90-99 de SEC ID NO:6.; y

un dominio variable de la cadena pesada, donde las secuencias de la cadena pesada CDR1, CDR2 y CDR3 comprenden los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de SEC ID NO: 16, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 40 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 18, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 20, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 22, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 26, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:28, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 30, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 32, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID

45 NO: 34, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 38, respectivamente o los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 40, respectivamente.

El dominio variable de la cadena pesada puede comprender una secuencia que sea por lo menos 90% identica a una secuencia de SEC ID NO:16. El dominio variable de la cadena pesada puede comprender una secuencia que sea por lo menos 90% identica a una secuencia de SEC ID NO:16 y SEC ID NO:38. En otra realización, dicho 50 dominio variable de la cadena ligera comprende una secuencia que es la SEC ID NO:6, y dicho dominio variable de la cadena pesada comprende una secuencia que se selecciona del grupo que consiste en la SEC ID NO:16, 18, 20, 22, 26, 28, 30, 32, 34, 38 o 40.

En otro aspecto, la presente invención provee un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en L2H1, L2H4, L2H12, L2H13, L2H2, L2H3, L2H6, L2H7. L2H8, L2H9 y L2H10.

En otro aspecto, la presente invención provee un anticuerpo humano, humanizado o quimerico.

En otro aspecto, la presente invención provee un anticuerpo monoclonal. En otro aspecto, la presente invención provee un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en IgD, IgE, IgM, lgG1, lgG2, lgG3, lgG4 y lgG4 que tiene por lo menos una mutación en una región bisagra que alivia una tendencia a formar un anticuerpo de enlace disulfuro intra-catenario H.

En otro aspecto, la presente invención provee un polipeptido aislado que comprende una porción de unión al receptor de IL -4 de un anticuerpo de la invención, donde dicho polipeptido comprende un Fab, F (ab') 2, scFv, diacuerpo, triacuerpo o tetracuerpo.

En otro aspecto, la presente invención provee un acido nucleico aislado que comprende una secuencia nucleotfdica que codifica la cadena ligera de un anticuerpo de la invención, la cadena pesada de un anticuerpo de la invención o un polipeptido de la invención. El acido nucleico puede comprender la secuencia de SEC ID NO:5.

En otro aspecto, la presente invención provee un vector que comprende un acido nucleico aislado de la invención. En otra realización, dicho vector es un vector de expresión.

En otro aspecto, la presente invención provee una celula aislada que comprende un acido nucleico de la invención. En una realización, dicha celula es un hibridoma. En otra realización, dicha celula es una celula transgenica.

En otro aspecto, la presente invención provee una celula que comprende un anticuerpo de la invención. En una realización, dicha celula es un hibridoma. En otra realización, dicha celula es una celula transgenica.

En otro aspecto, la presente invención provee una celula que comprende un polipeptido de la invención. En una realización, dicha celula es una celula transgenica.

En otro aspecto, la presente invención provee un metodo para preparar un anticuerpo de la invención, que comprende incubar una celula que comprende un acido nucleico que codifica la cadena ligera de dicho anticuerpo y un acido nucleico que codifica la cadena pesada de dicho anticuerpo bajo condiciones que permiten que dicha celula exprese dicha cadena ligera y dicha cadena pesada, y que permiten que dicha cadena ligera y dicha cadena pesada se ensamblen en dicho anticuerpo, y aislar dicho anticuerpo de dicha celula. En una realización, dicha celula es un hibridoma. En otra realización, dicha celula es una celula transgenica.

En otro aspecto, la presente invención provee un metodo in vitro para inhibir un receptor de IL-4, que comprende contactar una celula que expresa el receptor de IL-4 alfa con un anticuerpo de la invención o un polipeptido de la invención bajo condiciones que permiten que dicho anticuerpo o dicho polipeptido se una a dicho receptor de IL-4 alfa. En una realización, dicha celula es una celula humana.

En otro aspecto, la presente invención provee el anticuerpo de la invención o un polipeptido de la invención para uso en medicina o para uso en el tratamiento de una afección inflamatoria o cancerosa. En otra realización, dicha afección inflamatoria o cancerosa es una afección inmunológica. En otra realización, dicha afección es asma, artritis septicemica, dermatitis herpetiforme, urticaria idiopatica crónica, colitis ulcerosa, esclerodermia, cicatrización... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo aislado que se une al receptor de IL-4, que comprende un dominio variable de cadena ligera, donde

a. la cadena ligera CDR1 comprende los residuo.

2. 35 de la SEC ID NO:6 y

b. la cadena ligera CDR2 comprende los residuo.

5. 57 de la SEC ID NO:6, y

c. la cadena ligera CDR3 comprende los residuo.

9. 99 de la SEC ID NO:6.; y un dominio variable de cadena pesada, donde las secuencias de la cadena pesada CDR1, CDR2 y CDR3 comprenden los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:16, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:18, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 20, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:22, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:26, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:28, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:30, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID N032, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO: 34, respectivamente, los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:38, respectivamente o los residuos 30 a 35, 49 a 65 y 97 a 104 de la SEC ID NO:40, respectivamente.

2. Un anticuerpo segun la reivindicación 1, en el que el dominio variable de la cadena pesada es por lo menos 90% identico a la SEC ID NO: 16.

3. Un anticuerpo segun la reivindicación 1 o 2, en el que el dominio variable de la cadena pesada es por lo menos 90% identico a la secuencia de SEC ID NO:16 o por lo menos 90% identico a la secuencia de SEC ID NO:38.

4. El anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el dominio variable de la cadena ligera es por lo menos 90% identico a la SEC ID NO:6.

5. El anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el dominio variable de la cadena ligera comprende la SEC ID NO:6.

6. El anticuerpo segun la reivindicación 1, en el que la región variable de la cadena pesada de dicho anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en la SEC ID NO: 16, 18, 20, 22, 26, 28, 30, 32, 34, 38 y 40.

7. El anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo humano, humanizado o quimerico.

8. El anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

9. El anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que dicho anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en IgD, IgE, IgM, IgGl, IgG2, IgG3 e lgG4, que tiene por lo menos una mutación en la región bisagra que alivia una tendencia a formar un anticuerpo de enlace disulfuro intra-catenario H.

10. Un polipeptido aislado que comprende una porción de unión al receptor de IL-4 del anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, donde dicho polipeptido comprende un Fab, F (ab') 2, scFv, diacuerpo, triacuerpo o tetracuerpo.

11. Un acido nucleico aislado que comprende una secuencia de nucleótidos, o su complemento, que codifica la cadena ligera del anticuerpo segun la reivindicación 1.

12. El acido nucleico aislado segun la reivindicación 11, en el que dicho acido nucleico comprende la secuencia de nucleótidos de la SEC ID NO:5.

13. Un vector que comprende dicho acido nucleico de la reivindicación 11.

14. El vector segun la reivindicación 13, en el que dicho vector es un vector de expresión.

15. Una celula aislada que comprende dicho acido nucleico segun la reivindicación 11.

16. La celula aislada segun la reivindicación 15, en la que dicha celula es un hibridoma.

17. La celula aislada segun la reivindicación 15, en la que dicha celula es una celula transgenica.

18. Un metodo que expresa el anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que comprende incubar una celula que comprende un acido nucleico que codifica la cadena ligera de dicho anticuerpo y un acido nucleico que codifica la cadena pesada de dicho anticuerpo bajo condiciones que permiten que dicha celula exprese dicha cadena ligera y dicha cadena pesada, y que permiten que dicha cadena ligera y dicha cadena pesada se ensamblen en dicho anticuerpo, y aislar dicho anticuerpo de dicha celula.

19. El metodo segun la reivindicación 18, en el que dicha celula es un hibridoma.

20. El metodo segun la reivindicación 18, en el que dicha celula es una celula transgenica.

21. Un metodo in vitro para inhibir un receptor de IL-4 que comprende contactar una celula que expresa un receptor de IL-4 con el anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 bajo condiciones que permiten que dicho anticuerpo se una a dicho receptor de IL-4, donde la unión de dicho anticuerpo a dicho receptor de IL-4 inhibe la transducción de senales a traves de dicho receptor de IL-4.

22. Un metodo in vitro para inhibir un receptor de IL-4 que comprende contactar una celula que expresa el receptor de IL-4 alfa con el polipeptido segun la reivindicación 10 bajo condiciones que permiten que dicho polipeptido se una a dicho receptor de IL-4 alfa, donde la unión de dicho polipeptido a dicho receptor de IL-4 inhibe la transducción de senales a traves de dicho receptor de IL-4.

23. El metodo segun la reivindicación 21 o la reivindicación 22, en el que dicha celula es una celula humana.

24. Un anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o un polipeptido segun la reivindicación 10, para uso en medicina.

25. El anticuerpo o polipeptido segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para uso en el tratamiento de una afección inflamatoria o cancerosa.

26. El anticuerpo o polipeptido para uso segun la reivindicación 25, en el que dicha afección es asma, artritis septicemica, dermatitis herpetiforme, urticaria idiopatica crónica, colitis ulcerosa, esclerodermia, cicatrización hipertrófica, enfermedad de Whipple, hiperplasia prostatica benigna, un trastorno pulmonar en el que el receptor de IL-4 desempena una función, una afección en la que la ruptura de la barrera epitelial mediada por el receptor de IL-4 desempena una función, un trastorno del sistema digestivo en el que el receptor de IL-4 desempena una función, una reacción alergica a una medicación, enfermedad de Kawasaki, anemia drepanocftica, sfndrome de Churg-Strauss, enfermedad de Grave, preclampsia, sfndrome de Sjogren, sfndrome linfoproliferativo autoinmunitario, anemia hemolftica autoinmunitaria, es6fago de Barrett, uveftis autoinmunitaria, tuberculosis, fibrosis quística, micosis broncopulmonar alergica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis y neumopatfa inducida por bleomicina, fibrosis pulmonar inducida por radiación, proteinosis alveolar pulmonar, sfndrome de dificultad respiratoria aguda, sarcoidosis, sfndrome de hiper IgE, sfndrome hipereosinofflico idiopatico, una enfermedad ampollosa autoinmunitaria, penfigo vulgar, penfigo bulloso, miastenia grave, sfndrome de fatiga crónica o nefrosis.

27. Uso de un anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, o un polipeptido segun la reivindicación 13 o la reivindicación 14, en la elaboración de un medicamento para tratar una afección inflamatoria o cancerosa.

28. Uso de un anticuerpo o polipeptido segun la reivindicación 27, en el que dicha afección es ama, artritis septicemica, dermatitis herpetiforme, urticaria idiopatica crónica, colitis ulcerosa, esclerodermia, cicatrización hipertrófica, enfermedad de Whipple, hiperplasia prostatica benigna, un trastorno pulmonar en el que el receptor de IL-4 desempena una función, una afección en la que la ruptura de la barrera epitelial mediada por el receptor de IL-4 desempena una función, un trastorno del sistema digestivo en el que el receptor de IL-4 desempena una función, una reacción alergica a una medicación, enfermedad de Kawasaki, anemia drepanocftica, sfndrome de Churg-Strauss, enfermedad de Grave, preclampsia, sfndrome de Sjogren, sfndrome linfoproliferativo autoinmunitario, anemia hemolftica autoinmunitaria, es6fago de Barrett, uveftis autoinmunitaria, tuberculosis, fibrosis quística, micosis broncopulmonar alergica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, fibrosis y neumopatfa inducida por bleomicina, fibrosis pulmonar inducida por radiación, proteinosis alveolar pulmonar, sfndrome de dificultad respiratoria aguda, sarcoidosis, sfndrome de hiper IgE, sfndrome hipereosinofflico idiopatico, una enfermedad ampollosa autoinmunitaria, penfigo vulgar, penfigo bulloso, miastenia grave, sfndrome de fatiga crónica o nefrosis.

29. Una composición farmaceutica que comprende un anticuerpo segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9

o un polipeptido segun la reivindicación 10, y un excipiente, diluyente o tampón.

30. El anticuerpo segun la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo no se une al dominio I y II del receptor de IL-4 murino.

31. El anticuerpo segun la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo se une al dominio I del receptor de IL-4 humano.

Figura 1A Figura 1B Figura 1C Figura 2A Figura 2B Figura 2C Figura 2D Figura 3