MODELOS ANIMALES Y CELULAS DERIVADAS PARA SU USO EN LA DETERMINACION DE COMPUESTOS UTILES EN EL TRATAMIENTO DE LINFOMAS DE CELULAS T.
Modelos animales y células derivadas para su uso en la determinación de compuestos útiles en el tratamiento de linfomas de células T.
La presente invención se encuadra dentro del campo de la biotecnología. Se refiere a un método para evaluar si un compuesto es efectivo en la prevención y/o tratamiento de una enfermedad asociada a linfomas de células T
Tipo: Patente de Invención. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: P200803543.
Solicitante: CONSEJO SUPERIOR DE INVESTIGACIONES CIENTIFICAS (CSIC)
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA.
Nacionalidad solicitante: España.
Provincia: MADRID.
Inventor/es: GARCIA BUSTELO,XOSE RAMON, RUIZ MACIAS,SERGIO, SANTOS DE DIOS,EUGENIO.
Fecha de Solicitud: 15 de Diciembre de 2008.
Fecha de Publicación: .
Fecha de Concesión: 31 de Mayo de 2011.
Clasificación Internacional de Patentes:
- A01K67/027M2
- C12N15/85A3C
Clasificación PCT:
- A01K67/027 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA. › A01K CRÍA DE ANIMALES; AVICULTURA; APICULTURA; PISCICULTURA; PESCA; ANIMALES PARA CRIA O REPRODUCCIÓN, NO PREVISTOS EN OTRO LUGAR; NUEVAS VARIEDADES DE ANIMALES. › A01K 67/00 Cría u obtención de animales, no prevista en otro lugar; Nuevas razas de animales. › Nuevas razas de vertebrados.
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2341213_B1.pdf
Fragmento de la descripción:
Modelos animales y células derivadas para su uso en la determinación de compuestos útiles en el tratamiento de linfomas de células T.
La presente invención se encuadra dentro del campo de la biotecnología. Se refiere a un método para evaluar si un compuesto es efectivo en la prevención y/o tratamiento de una enfermedad asociada a linfomas de células T.
Estado de la técnica anterior
La activación del receptor de la célula T (abreviado a partir de ahora como RCT) induce la activación de múltiples vías de señalización necesarias para la correcta diferenciación y función de las células T (Kane et al. (2000) Curr. Opin. Immunol. 12:242-249). Vav1 es un factor de intercambio de nucleótidos de guanosina (abreviado a partir de ahora como FING) que se expresa específicamente en células hematopoyéticas y que se activa de una manera dependiente de fosforilación tras la estimulación del RCT (Kane et al. (2000) Curr. Opin. Immunol. 12:242-249). De hecho, la fosforilación específica en residuos de tirosina en Vav1 es un requisito necesario para la transducción de señales que conllevan al incremento en flujos de calcio, para la activación del factores de transcripción NFAT (del inglés, nuclear factor of activated T-cells) o a la activación de la vía de Ras/Erk (del inglés, extracellular signal-regulated kinase) (Bustelo (2001) Oncogene. 20:6372-6381). Los animales deficientes en Vav1 tienen defectos en la diferenciación de timocitos CD44+CD25+ a CD44-CD25+ así como defectos en selección positiva y negativa (Tybulewicz et al. 2003). Como resultado de estos defectos, los animales deficientes en el gen Vav1 se caracterizan por una fuerte linfopenia de células T así como defectos en la proliferación, síntesis de citoquinas y activación de ERK tras la estimulación del RCT.
La familia de proteínas RasGRF está compuesta por dos miembros, RasGRF1 and RasGRF2 que trabajan como FINGs para GTPasas de la superfamilia Ras (Quilliam et al. (2002) Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 71:391-444). Estas proteínas contienen varios dominios funcionales, entre los que se encuentran un dominio ilimaquinona capaz de unirse a iones Ca2+ y a la proteína calmodulina, un dominio homólogo a regiones Dbl presentes en FINGs para proteínas Rho/Rac y un dominio Cdc25 típico de FINGs para proteínas Ras. Estos dos últimos dominios están encargados de catalizar el intercambio de moléculas GDP por moléculas GTP en las GTPasas Rac1 y Ras, respectivamente (Quilliam et al. (2002) Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 71:391-444). RasGRF2 se ha identificado recientemente como un nuevo componente de la señalización del RCT en linfocitos T (Ruiz et al. (2007) Mol Cell Biol. 27:8127-8142). Animales deficientes en RasGRF2 presentan defectos en la activación transcripcional dependiente de NFAT de ciertas citoquinas, tales como el factor de necrosis tumoral alfa o la interleukina 2, tras la estimulación del RCT (Ruiz et al. (2007) Mol Cell Biol. 27:8127-8142). La comparación de la función de células T obtenidas de ratones silvestres, ratones deficientes en el gen Vav1, ratones deficientes en el gen Rasgrf2 y ratones deficientes conjuntamente en los genes Vav1 y Rasgrf2 ha permitido demostrar también que la vía de RasGRF2 coopera funcionalmente con la de Vav1 para asegurar valores óptimos de transformación blástica y proliferación tras la estimulación de dichos linfocitos a través de su RCT. Debido a ello, la ausencia del gen Rasgrf2 agrava los defectos en transformación blástica y proliferativos que poseen los linfocitos T procedentes de ratones deficientes en el gen Vav1 estimulados a través del RCT (Ruiz et al. (2007) Mol Cell Biol. 27:8127-8142).
Reciben el nombre de linfoma un grupo de tipos de cáncer que comienzan en el sistema linfático. Se calcula que por cada 100.000 habitantes un 7,7 por ciento de hombres y un 5,2 por ciento de mujeres sufren linfoma, y se estima que la incidencia del linfoma aumenta entre un 3 y un 4% cada año. Los linfomas son una enfermedad clínicamente heterogénea, existiendo más de 35 tipos de linfomas que se dividen en dos categorías principales: linfoma de Hodgkin y todos los demás linfomas, denominados linfomas no Hodgkin.
Está ampliamente reconocido el potencial que tienen los modelos experimentales de animales de laboratorio para el análisis de la función in vivo de un determinado gen, así como para el estudio de compuestos que potencialmente podrían ser útiles en el tratamiento o prevención de patologías relacionadas con la expresión nula o inadecuada de dicho gen. Algunos ejemplos de animales transgénicos empleados con estos fines para diferentes enfermedades son los descritos en las patentes con número de publicación: ES2303454, EP1586653, EP1619248, EP1839485, EP1907566, US2008060088, US2007186299, WO2008084566, WO2005098008 y WO03081996. Concretamente, se han descrito animales transgénicos para el estudio de los linfomas en las patentes con número de publicación: US5907079, US2006294611, US2008167457 y US2008070256.
A pesar de la incidencia del linfoma en los países industrializados, la etiología de la mayoría de los linfomas es desconocida, pudiendo existir diferentes rutas moleculares afectadas. Por otra parte, en la actualidad la mayoría de los tratamientos empleados son aproximaciones no específicas a cada tipo de linfoma o alteración molecular, sino tratamientos generales basados en la quimioterapia o la radioterapia. Por tanto, existe una necesidad de desarrollar nuevos modelos animales de linfoma que permitan entender los mecanismos moleculares subyacentes a la iniciación y progresión de los linfomas, así como identificar nuevos compuestos que permitan una terapia más específica y eficaz.
Explicación de la invención
La presente invención se refiere al empleo de un animal no humano o de la línea celular derivada del mismo, deficientes en la expresión y/o actividad de las proteínas Vav1 y/o RasGRF2 endógenas para la determinación del efecto de un compuesto o combinación de compuestos útiles para la prevención y/o el tratamiento de linfomas de células T.
La solución proporcionada por esta invención se basa en el hecho de que los ratones deficientes en el gen Vav1 desarrollan linfomas de células T en el animal adulto y, adicionalmente, a que la deficiencia simultánea en el gen de Rasgrf2 aumenta la susceptibilidad, cinética de aparición, progresión y agresividad de dichos linfomas.
Los autores de la presente invención demuestran que la baja sensibilidad de la cepa murina B10.BR al desarrollo de linfomas metastáticos de tipo T aumenta en ausencia del gen Rasgrf2 (Rasgfrf2-/-) y es aún mucho más evidente en ratones con deficiencia en el gen Vav1 (ratones Vav1-/-). Además, han observado que la pérdida simultánea de los genes Rasgrf2 y Vav1 (ratones Vav1-/-;Rasgrf2-/-) incrementa la susceptibilidad a la formación de linfomas, reduce el tiempo de latencia para la aparición de dichos linfomas y, además, aumenta la agresividad y malignidad de los mismos. Los linfomas T tienen un origen en el timo, demostrado por el hecho de que en estadios tempranos se observaron células pretumorales y/o tumorales exclusivamente en el timo que no están diseminadas en otros tejidos. Por último, una disminución en los niveles de expresión del gen Rasgrf2 es algo común en linfomas, tal y como han observado lo inventores al analizar la expresión en un panel de diferentes tipos de linfomas humanos.
Por lo tanto, un primer aspecto de la presente invención se refiere a un método para evaluar si un compuesto es efectivo en la prevención y/o tratamiento de neoplasias linfoides que comprende:
El modelo experimental de mamífero no humano con deficiencia de la actividad de las proteínas Vav1 y/o RasGRF2 generado en el paso a) puede ser utilizado como modelo de estudio in vivo del papel desempeñado por las proteínas Vav1 y/o RasGRF2 endógenas en neoplasias linfoides, así como para el diseño y la evaluación de compuestos que... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Método para evaluar si un compuesto es efectivo en la prevención y/o tratamiento de neoplasias linfoides que comprende:
2. Método según la reivindicación 1 donde el modelo animal es un animal transgénico.
3. Método según la reivindicación 2 donde el animal transgénico es un animal knock-out de los genes Vav1 y/o Rasgrf2.
4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 donde el modelo animal es un roedor o un primate no humano.
5. Método según la reivindicación 1 donde las células de mamífero no humano son del tejido linfoide.
6. Método según la reivindicación 5 donde las células del tejido linfoide son linfocitos T.
7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde la neoplasia linfoide es una neoplasia de las células T.
8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 donde el parámetro indicativo de la enfermedad es la presencia de tumores linfoides.
9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 donde el parámetro indicativo es la mortalidad o la morbilidad asociada a la presencia de la neoplasia.
10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 donde el compuesto es un agente antineoplásico.
11. Kit adaptado para llevar a cabo el método para la evaluar si un compuesto es efectivo en la prevención y/o tratamiento de neoplasias linfoides, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 que comprende:
12. Kit según la reivindicación 11 que además comprende las instrucciones para llevar a cabo dicho método.
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