ANTICUERPOS HUMANIZADOS CONTRA EL RECEPTOR DE INTERFERON ALFA 1 (IFNAR-1).

Anticuerpos humanizados contra el receptor de interferón alfa 1 (IFNAR-1) Antecedentes de la invención Los interferones de tipo I (IFN) (IFN-, IFN-ß, IFN-, IFN-) son una familia de citocinas estructuralmente relacionadas que tienen efectos antivirales, antitumorales e inmunomoduladores (Hardy y col, Blood. 97: 473, 2001; Cutrone y Langer, J. Biol. Chem. 276: 17140, 2001). El locus de IFN humano incluye dos subfamilias. La primera subfamilia consiste en 14 genes no alélicos y 4 pseudogenes que tienen una homología de al menos el 80 %. La segunda subfamilia, II u omega (), contiene 5 pseudogenes y 1 gen funcional que presenta una homología del 70 % con los genes de IFN (Weissmann y Weber, Prog. Nucl. Acid Res. Mol. Biol., 33: 251-300, 1986). Los subtipos de lFN tienen actividades específicas diferentes pero poseen el mismo espectro biológico (Streuli y col. PNAS-USA 78: 2848, 1981) y tienen el mismo receptor celular (Agnet M. y col. en "Interferon 5ª Ed. 1. Gresser págs. 1-22, Academic Press, Londres 1983). El interferón ß (IFN ß) está codificado por un solo gen que tiene una homología de aproximadamente el 50 % con los genes de IFN. El interferón gamma, que lo producen linfocitos activados, no posee ninguna homología con los interferones alfa/beta y no reacciona con su receptor. Todos los interferones de tipo I humanos se unen a un receptor de superficie celular (receptor de IFN alfa, IFNAR), que consiste en dos proteínas transmembrana, IFNAR-1 e IFNAR-2. El IFNAR-1 es esencial para la unión de aIta afinidad y la especificidad diferencial del complejo de IFNAR (Cutrone, 2001, anteriormente). Aunque no se han identificado diferencias funcionales para cada uno de los subtipos de IFN de tipo I, se cree que cada uno puede presentar diferentes interacciones con los componentes del receptor IFNAR, conduciendo a resultados de señalización potencialmente diversos (Cook y col. (1996) J. Biol. Chem., 271: 13448). En particular, los estudios que usaron formas mutantes de IFNAR-1 e IFNAR-2 sugirieron que los interferones alfa y beta señalizan de forma diferente a través del receptor interaccionando de forma diferencial con las cadenas respectivas (Lewerenz y col. (1998) J. Mol. Biol. 282: 585). Estudios funcionales anteriores de IFN de tipo I se centraron en la defensa innata contra infecciones víricas (Haller y col. (1981) J. Exp. Med. 154: 199; Lindenmann y col. (1981) Methods Enzymol. 78: 181). Estudios más recientes, sin embargo, implican a IFN de tipo I como citocinas inmunorreguladoras potentes en la respuesta inmune adaptativa. En concreto, se ha demostrado que los IFN de tipo I facilitan la diferenciación de células T sin estimulación previa a lo largo de la ruta Th1 (Brinkmann y col. (1993) J. Exp. Med. 178: 1655), aumentan la producción de anticuerpos (Finkelman y col. (1991) J. Exp. Med. 174: 1179) y apoyan la actividad funcional y la supervivencia de células T de memoria. (Santini, y col. (2000) J. Exp. Med. 191: 1777; Tough y col. (1996) Science 272:1947). Un trabajo reciente realizado por varios grupos sugiere que IFN- puede aumentar la maduración o activación de células dendríticas (DC) (Santini, y col. (2000) J. Exp. Med., 191: 1777; Luft y col. (1998) J. Immunol., 161: 1947; Luft y col. (2002) Int. Immunol. 14: 367; Radvanyi y col. (1999) Scand. J. Immunol. 50: 499). Además, la expresión aumentada de interferones de tipo I se ha descrito en numerosas enfermedades autoinmunes (Foulis y col. (1987) Lancet, 2: 1423; Hooks y col. (1982) Arthritis Rheum 25: 396; Hertzog y col. (1988) Clin. Immunol. Immunopathol. 48: 192; Hopkins y Meager (1988) Clin. Exp. Immunol. 73: 88; Arvin y Miller (1984) Arthritis Rheum. 27: 582). Los ejemplos más estudiados de éstas son la diabetes mellitus insulino-dependiente (DMID) (Foulis (1987) anteriormente) y el lupus eritematoso sistémico (LES) (Hooks (1982) anteriormente), que están asociadas con niveles elevados de IFN-, y la artritis reumatoide (AR) (Hertzog (1988), Hopkins y Meager (1988), Arvin y Miller (1984), anteriormente) en la que el IFN-ß puede desempeñar un papel más significativo. Además, se ha descrito que la administración de interferón alfa empeora la enfermedad subyacente en pacientes con psoriasis y esclerosis múltiple e induce un síndrome de tipo LES en pacientes sin un historial previo de enfermedad autoinmune. También se ha demostrado que el interferón induce glomerulonefritis en ratones normales y acelera la aparición de la enfermedad autoinmune espontánea de ratones NZB/W. Además, se ha demostrado que la terapia con IFN- conduce en algunos casos a efectos secundarios no deseados, incluyendo fiebre y trastornos neurológicos. Por lo tanto, existen situaciones patológicas en las que la inhibición de la actividad de IFN de tipo I puede ser beneficiosa para el paciente y existe la necesidad de agentes eficaces para inhibir la actividad de IFN de tipo I. Sumario de la invención La presente invención proporciona antagonistas de las actividades biológicas del IFN de tipo I humano. Estos antagonistas pueden usarse con fines terapéuticos (incluyendo la profilaxis), por ejemplo en situaciones en las que la producción o expresión de IFN de tipo I (IFN///) está asociada con síntomas patológicos. Dichos antagonistas también pueden usarse para el diagnóstico de diversas enfermedades o para el estudio de la evolución de dichas enfermedades. La invención proporciona anticuerpos humanizados de acuerdo con la reivindicación 1, en los que se han injertado secuencias de CDR murinas directamente en secuencias flanqueantes humanas no modificadas, dando 2   como resultado anticuerpos funcionales de alta afinidad. Además, la invención proporciona anticuerpos humanizados que comprenden modificaciones de anticuerpos adicionales para disminuir la antigenicidad del propio anticuerpo. Un anticuerpo humanizado o fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al receptor de IFN alfa 1 puede comprender una región variable de cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de región determinante de complementariedad de la SEC ID Nº: 1, SEC ID Nº: 2 o SEC ID Nº: 3; y una región variable de cadena ligera que comprende las secuencias de aminoácidos de región determinante de complementariedad de la SEC ID Nº: 4, SEC ID Nº: 5 o SEC ID Nº: 6; y regiones flanqueantes de dominio variable de las cadenas pesadas y ligeras de un anticuerpo humano o región flanqueante de consenso de anticuerpo humano, en el que las regiones flanqueantes de dominio variable están inalteradas respecto al anticuerpo humano o región flanqueante de consenso de anticuerpo humano. Un anticuerpo humanizado o fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al receptor de IFN alfa 1 puede tener una región variable de cadena pesada que comprende: la secuencia de aminoácidos de la CDR1 (SEC ID Nº: 1), CDR2 (SEC ID Nº: 2) y CDR3 (SEC ID Nº: 3) del anticuerpo murino 64G12, en la que se ha realizado al menos una sustitución de aminoácido en la secuencia de aminoácidos de la CDR3 (SEC ID Nº: 3), y regiones flanqueantes de dominio variable derivadas de un anticuerpo humano o una región flanqueante de consenso de anticuerpo humano. Preferentemente, el anticuerpo humanizado o fragmento de anticuerpo humanizado conserva al menos el 50 % de la afinidad de unión al receptor de IFN alfa 1 del anticuerpo murino 64G12. En la presente realización, las regiones flanqueantes de dominio variable pueden estar inalteradas respecto al anticuerpo humano o a la región flanqueante de consenso de anticuerpo humano, o pueden contener sustituciones específicas dentro de los restos de región flanqueante. En una realización preferida, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una sustitución de aminoácido en la posición 4 de la CDR3. Preferentemente, esta sustitución es una sustitución de prolina en un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en L, E, V, C y R. En otra realización preferida, el anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende una sustitución de aminoácido en la posición 11 de la CDR3. Preferentemente, esta sustitución es una sustitución de tirosina. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo comprende además una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la CDR1 (SEC ID Nº: 4), CDR2 (SEC ID Nº: 5) y CDR3 (SEC ID Nº: 6) del anticuerpo murino 64G12. Un anticuerpo humanizado o fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al receptor de IFN alfa 1 puede comprender una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la CDR1 (SEC ID Nº: 1), CDR2 (SEC ID Nº: 2) y CDR3 (SEC ID Nº: 3) del anticuerpo murino 64G12; y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la CDR1 (SEC ID Nº: 4), CDR2 (SEC ID Nº: 5) y CDR3 (SEC ID Nº: 6) del anticuerpo murino 64G12; y en el que el... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al receptor de IFN alfa 1, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en: (a) SEC ID NO: 13, en la que X es R; (b) SEC ID NO: 17; (c) SEC ID NO: 15; (d) SEC ID NO: 18; y (e) SEC ID NO: 12, en la que X es L, E, V, C o R; y una región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 21. 2. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, que comprende además dominios constantes pesados y ligeros humanos. 3. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 2, en el que la región constante pesada humana es seleccionada del grupo que consiste en gamma 1, gamma 2, gamma 3 y gamma 4 humanas. 4. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 2, en el que la región constante pesada humana es gamma 1. 5. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 13, en la que X es R; y una región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 21. 6. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 17; y una región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 21. 7. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 15; y una región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 21. 8. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 18; y una región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 21. 9. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 12, en la que X es L; y una región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 21. 10. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 12, en la que X es E; y una región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 21. 11. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 12, en la que X es V; y una región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 21. 12. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 12, en la que X es C; y una región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 21. 13. El anticuerpo humanizado, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, que comprende: una región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 12, en la que X es R; y una región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 21. 29     31   32   33   34     36   37   38   39