Un anticuerpo anti-CTLA-4 humano para su uso en el tratamiento de un cáncer en un paciente humano,

en el queel paciente, antes de la administración del anticuerpo, ha sido tratado con cirugía de manipulación del tumor,quimioterapia o radiación y ha desarrollado una respuesta inmunitaria al cáncer, en el que el anticuerpo es parareforzar la respuesta inmunitaria del paciente y en el que el anticuerpo es para ser administrado al paciente de formaque la concentración en plasma del anticuerpo anti-CTLA-4 sea al menos de 2 μg/ml durante más de cuatro meses.

Procedimientos de tratamiento usando anticuerpos CTLA-4

Campo de la invención La presente invención se refiere generalmente a la inmunología molecular y al tratamiento de enfermedades humanas. En particular, se refiere a anticuerpos contra CTLA-4 humano para su uso en novedosos procedimientos para tratar cáncer.

Antecedentes de la invención

El sistema inmunitario de los vertebrados requiere múltiples señales para lograr la óptima activación inmunitaria (véase, por ejemplo, Janeway, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1989; 54:1-14; Paul William E., ed. Raven Press, N.Y., Fundamental Immunology, 4ª edición (1998) , particularmente los capítulos 12 y 13, páginas 411 a 478) . Las interacciones entre linfocitos T y células presentadoras de antígeno (APC) son esenciales para la respuesta inmunitaria. Los niveles de muchas moléculas cohesivas encontradas en linfocitos T y APC aumentan durante una respuesta inmunitaria (Springer y col., A. Rev. Immunol. 1987; 5:223-252; Shaw y Shimuzu, Current Opinion in Immunology, 1988 Eds. Kindt y Long, 1:92-97; y Hemler, Immunology Today 1988; 9:109-113) . El aumento de los niveles de estas moléculas puede ayudar a explicar por qué las APC activadas son más eficaces en la estimulación de la proliferación de linfocitos T específica para antígeno que las APC en reposo (Kaiuchi y col., J. Immunol. 1983; 131:109-114; Kreiger y col., J. Immunol. 1985; 135:2937-2945; McKenzie, J. Immunol. 1988; 141:2907-2911; y Hawr y lowicz y Unanue, J. Immunol. 1988; 141:4083-4088) .

La respuesta inmunitaria de linfocitos T es un proceso complejo que implica interacciones célula-célula (Springer y col., A. Rev. Immunol. 1987; 5:223-252) , particularmente entre linfocitos T y células accesorias tales como APC, y la producción de mediadores inmunitarios solubles (citocinas o linfocinas) (Dinarello, New Engl. J. Med 1987; 317:940945; Sallusto, J. Exp. Med. 1997; 179:1109-1118) . Esta respuesta está regulada por varios receptores de la superficie de linfocitos T que incluyen el complejo de receptores de linfocitos T (Weiss, Ann. Rev. Immunol. 1986; 4:593-619) y otras moléculas de superficie “accesorias” (Allison, Curr. Opin. Immunol. 1994; 6:414-419; Springer, 1987, arriba) . Muchas de estas moléculas accesorias son antígenos de diferenciación de la superficie (DS) celular que se producen de modo natural, definidos por la reactividad de anticuerpos monoclonales sobre la superficie de células (McMichael, Ed., Leukocyte Typing III, Oxford Univ. Press, Oxford, N.Y., 1987) .

La respuesta antigénica de linfocitos T colaboradores (Th) requiere señales proporcionadas por APC. La primera señal se inicia por la interacción del complejo de receptores de linfocitos T (Weiss, J. Clin. Invest. 1990, 86:1015) con antígeno presentado en el contexto de moléculas del complejo de histocompatibilidad mayor de clase II (MHC) en la APC (Allen, Immunol. Today 1987; 8:270) . Esta señal específica para antígeno no es suficiente para generar una respuesta completa, y en ausencia de una segunda señal puede conducir en realidad a inactivación clónica o anergia (Schwartz, Science 1990; 248:1349) . El requisito para una segunda señal “coestimuladora” proporcionada por el MHC se ha demostrado en varios sistemas experimentales (Schwartz, arriba; Weaver y Unanue, Immunol. Today 1990; 11:49) . La naturaleza molecular de esta segunda señal no se entiende completamente, aunque es evidente en algunos casos que ambas moléculas solubles tales como interleucina (IL) -1 (Weaver y Unanue, arriba) y receptores de membrana implicados en la adhesión intercelular (Springer, Nature 1990; 346:425) pueden proporcionar señales coestimuladoras.

El antígeno CD28, una glicoproteína homodimérica de la superfamilia de las inmunoglobulinas (Aruffo y Seed, Proc. Natl. Acad. Sci. 1987; 84:8573-8577) es una molécula accesoria encontrada en la mayoría de los linfocitos T humanos maduros (Damle y col., J. Immunol. 1983; 131:2296-2300) . Los presentes hechos sugieren que esta molécula funciona con una ruta de activación de linfocitos T alternativa distinta de la iniciada por el complejo de receptores de linfocitos T (June y col., Mol. Cell. Biol. 1987; 7:4472-4481) . Anticuerpos monoclonales (MAb) reactivos con antígeno CD28 pueden aumentar las respuestas de linfocitos T iniciadas por diversos estímulos policlonales (revisado por June y col., arriba) . Estos efectos estimulantes resultan de la producción de citocinas inducidas por MAb (Thompson y col., Proc. Natl. Acad. Sci 1989; 86:1333-1337; y Lindsten y col., Science 1989; 244:339-343) como consecuencia del aumento de la estabilización del ARNm (Lindsten y col., 1989, arriba) . Los mAb anti-CD28 también pueden tener efectos inhibidores, es decir, pueden bloquear las reacciones de linfocitos mixtos autólogos (Damle y col., Proc. Natl. Acad. Sci. 1981; 78:5096-6001) y la activación de clones de linfocitos T específicos para antígeno (Lesslauer y col., Eur. J. Immunol. 1986; 16:1289-1296) .

CTLA-4 es una molécula de la superficie de linfocitos T que se identificó originalmente por cribado diferencial de una biblioteca de ADNc de linfocitos T citolíticos murinos (Brunet y col., Nature 328:267-270 (1987) ) . CTLA-4 también es un miembro de la superfamilia de las inmunoglobulinas (Ig) ; CTLA-4 comprende un único dominio de Ig extracelular. Se han encontrado transcritos de CTLA-4 en poblaciones de linfocitos T que tienen actividad citotóxica, sugiriendo que CTLA-4 podría funcionar en la respuesta citolítica (Brunet y col., arriba; Brunet y col., Immunol. Rev. 103-21-36 (1988) ) . Los investigadores han informado de la clonación y el mapeo de un gen para el homólogo humano de CTLA-4 (Dariavach y col., Eur. J. Immunol. 18:1901-1905 (1988) ) para la misma región cromosómica (2q33-34) que CD28 (Lafage-Pochitaloff y col., Immunogenetics 31:198-201 (1990) ) . La comparación de secuencias entre este ADN humano de CTLA-4 y el que codifica proteínas de CD28 revela homología significativa de secuencia, con el mayor grado de homología en las regiones yuxtamembrana y citoplásmica (Brunet y col., 1988, arriba; Dariavach y col., 1988, arriba) .

Se acepta que CTLA-4 se opone a la actividad de CD28 y amortigua la activación de linfocitos T (Krummel, J. Exp. Med 1995; 182:459-465; Krummel y col., Int'l Immunol. 1996; 8:519-523; Chambers y col., Immunity. 1997; 7:885895) . Ratones eficientes en CTLA-4 sufren linfoproliferación masiva (Chambers y col., arriba) . Se ha informado que el bloqueo de CTLA-4 aumenta las respuestas de linfocitos T in vitro (Walunas y col., Immunity. 1994; 1:405-413) y in vivo (Kearney, J. Immunol. 1995; 155:1032-1036) , agrava la inmunidad antitumoral (Leach, Science 1996; 271:1734-1736) y potencia una enfermedad autoinmunitaria inducida (Luhder, J Exp. Med. 1998; 187:427-432) . También se ha informado que CTLA-4 tiene un impacto alternativo o adicional sobre el carácter inicial de la respuesta inmunitaria de linfocitos T (Chambers, Curr. Opin. Immunol. 1997; 9:396-404; Bluestone, J. Immunol. 1997; 158:1989-1993; Thompson, Immunity 1997; 7:445-450) . Esto está de acuerdo con la observación de que algunos pacientes autoinmunitarios tienen autoanticuerpos para CTLA-4. Es posible que los autoanticuerpos bloqueantes de CTLA-4 desempeñen una función patogénica en estos pacientes (Matsui, J. Immunol. 1999; 162:4328-4335) .

Los anticuerpos para CTLA-4 no humanos se han usado en los diversos estudios tratados anteriormente. Además, los anticuerpos humanos contra CTLA-4 humano se han descrito como moduladores de la inmunoestimulación en varias afecciones de enfermedad tales como tratando o previniendo infección vírica y bacteriana y para tratar cáncer (por ejemplo, publicación PCT WO 01/14424 y publicación PCT WO 00/37504) . La patente de EE.UU. nº 5.855.887 desvela un procedimiento de aumento de la respuesta de un linfocito T de mamífero a estimulación antigénica combinando un linfocito T con un agente de bloqueo de CTLA-4. La patente de EE.UU. nº 5.811.097 desvela un procedimiento de disminución del crecimiento de tumores de no linfocitos T administrando un agente de bloqueo de CTLA-4. Las solicitudes de patente de EE.UU. nº 09/644.668 y 09/948.939 desvelan anticuerpos para CTLA-4 humano. Los anticuerpos anti-CTLA-4 que pueden co-estimular la proliferación de linfocitos T y su uso en el tratamiento de trastornos sensibles a la proliferación de linfocitos T se describen en los documentos WO 98/42752 y US 6.207.156. El documento WO 95/33770 describe que anticuerpos anti-CTLA-4 pueden inducir apoptosis de linfocitos T específicos para antígeno, y su uso terapéutico, por ejemplo, en el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias.... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo anti-CTLA-4 humano para su uso en el tratamiento de un cáncer en un paciente humano, en el que el paciente, antes de la administración del anticuerpo, ha sido tratado con cirugía de manipulación del tumor, quimioterapia o radiación y ha desarrollado una respuesta inmunitaria al cáncer, en el que el anticuerpo es para reforzar la respuesta inmunitaria del paciente y en el que el anticuerpo es para ser administrado al paciente de forma que la concentración en plasma del anticuerpo anti-CTLA-4 sea al menos de 2 μg/ml durante más de cuatro meses.

2. Un anticuerpo anti-CTLA-4 humano para su uso en el tratamiento de un cáncer en un paciente humano, en el que el paciente, antes de la administración del anticuerpo, ha sido tratado con un vacuna contra el cáncer y ha desarrollado una respuesta inmunitaria al cáncer, en el que el anticuerpo es para reforzar la respuesta inmunitaria del paciente y en el que el anticuerpo es para ser administrado al paciente de forma que la concentración en plasma del anticuerpo anti-CTLA-4 sea al menos de 2 μg/ml durante más de cuatro meses.

3. El anticuerpo para su uso según la reivindicación 1 ó 2, en el que el anticuerpo es para ser administrado al paciente múltiples veces.

4. El anticuerpo para su uso según la reivindicación 1 ó 2, en el que el anticuerpo es para ser administrado al paciente en una dosis única.

5. El anticuerpo para su uso según la reivindicación 1 ó 2, en el que la administración del anticuerpo no produce efectos secundarios perjudiciales.

6. El anticuerpo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el efecto de la cantidad y el intervalo de administración del anticuerpo es que la concentración en plasma del anticuerpo anti-CTLA-4 en el paciente es al menos de 5 μg/ml durante más de cuatro meses.

7. El anticuerpo para su uso según la reivindicación 6, en el que el efecto de la cantidad y el intervalo de administración del anticuerpo es que la concentración en plasma del anticuerpo anti-CTLA-4 en el paciente es al menos de 10 μg/ml durante más de cuatro meses.

8. El anticuerpo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el cáncer es un melanoma.

9. El anticuerpo para su uso según la reivindicación 1, en el que el paciente está inmunodeprimido.

10. El anticuerpo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el anticuerpo comprende una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID nº: 1 y una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID nº:2.

No-melanoma humano