Anticuerpo monoclonal humano aislado, o parte de unión a antígeno del mismo,

que se une específicamente alantígeno de membrana específico de la próstata (PSMA), que comprende:

una CDR1 de la región variable de la cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 10,

una CDR2 de la región variable de la cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 14,

una CDR3 de la región variable de la cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 18,

una CDR1 de la región variable de la cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 22,

una CDR2 de la región variable de la cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 26 y

una CDR3 de la región variable de la cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 30.

Anticuerpo monoclonal humano contra el antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA)

Antecedentes de la Invención

El cáncer de próstata es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad entre los hombres. Los tratamientos para el cáncer de próstata incluyen cirugía, hormonas, radiación y quimioterapia. Existe un tratamiento muy poco efectivo para la enfermedad metastásica de la próstata. Por lo tanto, resulta crítica la identificación de genes y/o de productos génicos que representen los marcadores de diagnóstico y pronóstico, así como dianas para la terapia. El antígeno específico de la próstata (PSA) es uno de tales marcadores de cáncer, que es útil en el diagnóstico clínico y la estadificación del cáncer de próstata. Sin embargo, el PSA no puede diferenciar la hiperplasia benigna de próstata (HBP) de la prostatitis o del cáncer de próstata en el intervalo de 4-10 ng/ml, por lo que se necesita una evaluación citológica y/o histológica para confirmar el diagnóstico correcto (Barren, R.J. et al. (1998) Prostate 36:181-188) .

El antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA) es una glicoproteína transmembrana de tipo II, de 750 aminoácidos, de aproximadamente 110 kD que tiene un 54% de homología con el receptor de transferrina. La PSMA tiene 3 dominios estructurales, que incluyen un dominio intracelular de 19 aminoácidos, un dominio transmembrana de 24 aminoácidos y un dominio extracelular de 707 aminoácidos. La proteína PSMA presenta actividad neurocarboxipeptidasa y folato hidrolasa y se ha notificado que está implicada en la regulación neuroendocrina del crecimiento y la diferenciación de la próstata (Heston, W.D. (1996) Urologe-Ausgabe A. 35:400-407) . La PSM’ es una forma empalmada alternativa de la PSMA que se localiza en el citoplasma.

La PSMA se expresa predominantemente en las células epiteliales de la próstata. La expresión de PSMA es mayor en el cáncer de próstata, especialmente en los carcinomas pobremente diferenciados, metastásicos, y refractarios a hormonas (Gregorakis, AK et al. (1998) Seminars in Urologic Oncology 16:2-12; Silver, DA (1997) Clinical Cancer Research 3:81-85) . Se observa un bajo nivel de expresión de PSMA en los tejidos extraprostáticos tales como el intestino delgado, las glándulas salivales, la mucosa duodenal, los túbulos renales proximales, y el cerebro (Silver,

D.A. (1997) Clinical Cancer Research 3:81-85) . La PSMA también se expresa en las células endoteliales de los vasos capilares en las áreas peritumorales y endotumorales de determinados tumores malignos, que incluyen los carcinomas de células renales, y los carcinomas de colon, pero no en los vasos sanguíneos de los tejidos normales. Además, se ha notificado que la PSMA está relacionada con la angiogénesis tumoral (Silver, DA (1997) Clinical Cancer Research 3:81-85) . Recientemente, se ha demostrado que la PSMA se expresa en las células endoteliales de la neovasculatura asociada al tumor en los carcinomas de colon, de mama, de vejiga, de páncreas, de riñón y en el melanoma (Chang, S.S. (2004) Curr. Opin. Investig. Drugs 5:611-5) .

Se han descrito anticuerpos contra el dominio extracelular de PSMA (véanse, por ejemplo, Liu, H. et al. (1997) Cancer Res. 57:3629-3634; Murphy, G.P. et al. (1998) J. Urol. 160: 2396-2401; Wang, S. et al. (2001) Int. J. Cancer 92:871-876; Kato, K. et al. (2003) Int. J. Urol 10:439-444; la patente de Estados Unidos Nº 6.150.508 y la patente de Estados Unidos Nº 6.107.090) . Más recientemente, se han descrito anticuerpos humanos y humanizados que se unen a PSMA (véanse, por ejemplo, Bander, NH. et al. (2003) Semin. Oncol. 30:667-676; la publicación PCT WO 02/098897; la publicación PCT WO 01/09192; la publicación PCT WO 03/064606; la publicación PCT WO 03/034903, y la solicitud de Estados Unidos Nº 2004/0033229) . Tales anticuerpos se han utilizado para obtener imágenes de las células del cáncer de próstata (véase, por ejemplo, Yao, D. et al. (2002) Semin. Urol. Oncol. 20:211-218; Bander, N.H. et al (2003) J. Urol. 170:1717-1721) . También se han utilizado anticuerpos anti-PSMA para la intervención terapéutica en el tratamiento del cáncer de próstata, por lo general como un conjugado con un agente quimioterapéutico o isótopo radiactivo (véase, por ejemplo, Nanus, D.M. et al. (2003) J. Urol. 170:S84-89; Milowsky, M.I. et al. (2004) J. Clin. Oncol. 22:2522-2531; Henr y , M.D. et al. (2004) Cancer Res. 64:7995-8001) .

Por consiguiente, la PSMA representa una diana valiosa para el tratamiento del cáncer de próstata y una variedad de otras enfermedades caracterizadas por la expresión de PSMA y se desean agentes terapéuticos adicionales que reconozcan PSMA.

Resumen de la Invención

La invención proporciona un anticuerpo monoclonal aislado, o una parte de unión a antígeno del mismo, que comprende:

(a) una CDR1 de la región variable de la cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 10,

(b) una CDR2 de la región variable de la cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 14,

(c) una CDR3 de la región variable de la cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 18,

(d) una CDR1 de la región variable de la cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 22,

(e) una CDR2 de la región variable de la cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 26 y

(f) una CDR3 de la región variable de la cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 30.

Otros anticuerpos preferentes de la invención, o partes de unión a antígeno del mismo, comprenden:

(a) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 2, y

(b) una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 6.

Los anticuerpos de la invención pueden ser, por ejemplo, anticuerpos de longitud completa, por ejemplo de un isotipo IgG1 o IgG4. De manera alternativa, los anticuerpos pueden ser fragmentos de anticuerpo, tales como fragmentos Fab o Fab'2, o anticuerpos monocatenarios.

La invención también proporciona un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo de la invención, o parte de unión a antígeno del mismo, unido a un agente terapéutico, tal como una citotoxina o un isótopo radiactivo. La invención también proporciona una molécula biespecífica que comprende un anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de la invención, unida a un segundo resto funcional que tiene una especificidad de unión diferente que dicho anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo.

También se proporcionan las composiciones que comprenden un anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo

o un inmunoconjugado o una molécula biespecífica de la invención y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Las moléculas de ácidos nucleicos que codifican los anticuerpos, o partes de unión a antígeno de los mismos, de la invención, también quedan abarcados por la invención, así como los vectores de expresión que comprenden tales ácidos nucleicos y las células hospedadoras que comprenden tales vectores de expresión. Además, la invención proporciona un ratón transgénico que comprende los transgenes de la cadena pesada y ligera de la inmunoglobulina humana, en el que el ratón expresa un anticuerpo de la invención, así como los hibridomas preparados a partir de un ratón de este tipo, en el que el hibridoma produce el anticuerpo de la invención.

En otro aspecto más, la invención proporciona un método para inhibir el crecimiento de las células tumorales en un sujeto, en el que las células tumorales o las células endoteliales vasculares próximas a las células tumorales expresan PSMA, que comprende administrar a un sujeto un anticuerpo humano anti-PSMA de la presente invención en una cantidad eficaz para inhibir el crecimiento de las células tumorales. En una forma de realización preferente, se inhibe el crecimiento de células tumorales de la próstata.

En otro aspecto, la invención proporciona un método para inhibir o prevenir el crecimiento de un tumor (por ejemplo, de próstata, de colon, renal, rectal, urotelial, de mama, de vejiga, de hígado, de páncreas o un melanoma) en un sujeto, en el que las células del tumor o las células endoteliales vasculares próximas al tumor expresan PSMA. El método incluye administrar a un sujeto... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo monoclonal humano aislado, o parte de unión a antígeno del mismo, que se une específicamente al antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA) , que comprende:

una CDR1 de la región variable de la cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 10, una CDR2 de la región variable de la cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 14, una CDR3 de la región variable de la cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 18, una CDR1 de la región variable de la cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 22, una CDR2 de la región variable de la cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 26 y una CDR3 de la región variable de la cadena ligera que comprende la SEC ID Nº: 30.

2. Anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, según la reivindicación 1, que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 2 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 6.

3. Inmunoconjugado que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, según la reivindicación 1 ó 2, unido a un agente terapéutico.

4. Inmunoconjugado según la reivindicación 3, en el que el agente terapéutico es una citotoxina o un isótopo radiactivo.

5. Molécula biespecífica que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, según la reivindicación 1 ó 2, unido a un segundo resto funcional que tiene una especificidad de unión diferente que dicho anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo.

6. Composición que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, según la reivindicación 1 ó 2, el inmunoconjugado según la reivindicación 3 ó 4 o la molécula biespecífica según la reivindicación 5, y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

7. Molécula de ácido nucleico aislada que codifica el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, según la reivindicación 1 ó 2.

8. Vector de expresión que comprende la molécula de ácido nucleico según la reivindicación 7.

9. Célula hospedadora que comprende el vector de expresión según la reivindicación 8.

10. Ratón transgénico que comprende transgenes de la cadena pesada y ligera de la inmunoglobulina humana, en el que el ratón expresa el anticuerpo según la reivindicación 1 ó 2.

11. Hibridoma preparado a partir del ratón según la reivindicación 10, en el que el hibridoma produce dicho anticuerpo.

12. Anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, según la reivindicación 1 ó 2 para su uso en un método para inhibir el crecimiento de un tumor en un sujeto, en el que las células del tumor o las células endoteliales vasculares próximas al tumor expresan PSMA.

13. Anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, según la reivindicación 1 ó 2, para su uso en combinación con un agente antitumoral en un método para inhibir o prevenir el crecimiento de un tumor en un sujeto, en el que las células del tumor o las células endoteliales vasculares próximas al tumor expresan PSMA.

14. Anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, para su uso según la reivindicación 13, en el que la administración a dicho sujeto de dicho anticuerpo anti-PSMA, o parte de unión a antígeno del mismo, en combinación con dicho agente antitumoral, conduce a un efecto sinérgico sobre la inhibición del crecimiento de dicho tumor.

15. Anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, para su uso según la reivindicación 13, en el que dicho agente antitumoral provoca daños en la masa tumoral, conduciendo de ese modo a una citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpo (ADCC) del tumor más eficaz.

16. Anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 15, en el que el tumor es de un cáncer seleccionado de entre de próstata, de colon, renal, rectal, urotelial, de mama, de vejiga, de hígado, de páncreas y melanoma.

17. Anticuerpo para su uso según la reivindicación 13, en el que dicho agente antitumoral es un agente quimioterapéutico, un agente antiangiogénico o un agente inmunomodulador.

18. Anticuerpo para su uso según la reivindicación 17, en el que dicho agente quimioterapéutico es Taxotere® (docetaxel) , dicho agente antiangiogénico se selecciona de entre angiostatina K1-3, Arresten, aaAT, Canstatina, DL-a-difluorometil-ornitina, Endostatina, Fumagilina, Genisteína, Minociclina, Estaurosporina, Talidomida, y Tumstatina o dicho agente inmunomodulador se selecciona de entre anticuerpos anti-PD1, anticuerpos anti-CTLA-4, oligodesoxirribonucleótido fosforotiolato (1018 ISS) , vacunas génicas GM-CSF, interleucina-2, interleucina- 7 (CYT 99 07) , interleucina-12 e interleucina-21.

19. Anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, según la reivindicación 1 ó 2, para su uso en combinación con un agente antitumoral en un método para inhibir la caquexia relacionada con el tumor en un sujeto o para estimular la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpo (ADCC) de un tumor en un sujeto, en el que las células del tumor o las células endoteliales vasculares próximas al tumor expresan PSMA.

20. Composición que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, según la reivindicación 1 ó 2 y un agente antitumoral para su uso en un método para inhibir o prevenir el crecimiento de un tumor, o para estimular la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpo (ADCC) de un tumor.

21. Método in vitro para identificar un agente antitumoral capaz de actuar sinérgicamente con el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, según la reivindicación 1 ó 2, para inhibir o prevenir el crecimiento de un tumor, en el que las células del tumor o las células endoteliales vasculares próximas al tumor expresan PSMA, que comprende:

poner en contacto una composición indicadora con:

(a) un agente antitumoral de ensayo en solitario,

(b) un anticuerpo anti-PSMA según las reivindicaciones 1 ó 2 en solitario, y

(c) un agente antitumoral de ensayo y un anticuerpo anti-PSMA según las reivindicaciones 1 ó 2, y comparar la capacidad de (a) el agente antitumoral de ensayo en solitario y (b) el anticuerpo anti-PSMA en solitario para inhibir o prevenir el crecimiento de un tumor con la capacidad de (c) el agente antitumoral de ensayo y el anticuerpo anti-PSMA para inhibir o prevenir el crecimiento de un tumor, en el que la inhibición

o prevención del crecimiento del tumor por (c) en una cantidad que es mayor que el efecto aditivo de (a) y

(b) conducirá a la identificación de un agente antitumoral capaz de actuar sinérgicamente con un anticuerpo anti-PSMA para inhibir o prevenir del crecimiento de un tumor.

22. Método según la reivindicación 21, en el que la composición indicadora es un modelo animal para un tumor.