Un anticuerpo monoclonal humano aislado, o una parte de unión a antígeno del mismo,

comprendiendo dichoanticuerpo:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 43 yuna región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 92;

(b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 35 yuna región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 84; o

(c) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 39 yuna región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 88.

Anticuerpos de IP-10 y sus usos

Antecedentes de la invención

La proteína inducible por Interferón gamma 10 (IP-10) (también conocida como CXCL10) es una quimiocina de 10kDa que se identificó originalmente basándose en la expresión del gen IP-10 en células tratadas con Interferón gamma (IFN-gamma) (Luster, A.D. y col. (1985) Nature 315:672-676) . IP-10 muestra homología con proteínas que tienen actividad quimiotáctica, talescomo factor de plaquetas 4 y beta-tromboglobulina, y con proteínas que tienen actividad mitogénica, tales como péptido activador de tejido conectivo III (Luster, A.D. y col. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84:2868-2871) . IP-10 se secreta por una diversidad de células, incluyendo células endoteliales, monocitos, fibroblastos y queratinocitos, en respuesta a IFN-gamma (Luster, A.D. y Ravetch, J.V. (1987) J. Exp. Med. 166:10841097) . También se ha mostrado que IP-10 está presente en macrófagos dérmicos y células endoteliales en respuestas de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) en piel humana (Kaplan, G. y col. (1987) J. Exp. Med. 166:1098-1108) . Aunque originalmente se identificó basándose en su inducción por IFN-gamma, IP-10 también puede inducirse por IFN-alfa, por ejemplo en células dendríticas (Padovan, E. y col. (2002) J. Leukoc. Biol. 71:669676) . La expresión de IP-10 también puede inducirse en células del sistema nervioso central, tales como astrocitos y microglía, por estímulos tales como IFN-gamma, virus y lipopolisacárido (Vanguri, R. y Farber, J.M. (1994) J. Immunol. 152:1411-1418; Ren, L.Q. y col. (1998) Brain Res. Mol. Brain Res. 59:256-263) . La inmunobiología de IP10 se revisa en, L.F y col. (1997) CytokineGrowth Factor Rev. 8:207-219.

El receptor para IP-10 ha sido identificado como CXCR3, un receptor de siete transmembranas (Loetscher, M. y col. (1996) J. Exp. Med. 184:963-969) . CXCR3 ha mostrado que se expresa en linfocitos T activados pero no en linfocitos T en reposos, ni en linfocitos B, monocitos o granulocitos (Loetscher, M. ycol, mencionado anteriormente) . Se ha mostrado que la expresión de CXCR3 se regula positivamente en células NK por estimulación con TGF-beta 1 (Inngjerdingen, M. ycol. (2001) Blood97:367-375) . También se han identificado otros dos ligandos para CXCR3: MIG (Loetscher, M. ycol, mencionado anteriormente) e ITAC (Cole, K.E. ycol. (1998) J. Exp. Med. 187:2009-2021) .

La unión de IP-10 con CXCR3 ha mostrado que media en la movilización de calcio y quimiotaxis en linfocitos T activados (Loetscher, M. ycol., mencionado anteriormente) . La quimiotaxis y movilización de calcio intercelular también se inducen por unión de IP-10 con CXCR3 en células NK activadas (Maghazachi, A.A. ycol. (1997) FASEBJ. 11:765-774) . Dentro del timo, se ha mostrado que IP-10 es un quimioatrayente de linfocitosT TCRat+ CD8+, linfocitos T TCRyB+ y células de tipo NK (Romagnani, P. ycol. (2001) Blood 97:601-607) .

IP-10 o su receptor CXCR3 ha sido identificado en una diversidad de diferentes afecciones inflamatorias y autoinmunes, incluyendo esclerosis múltiple (véase por ejemplo, Sorensen, T.L. ycol. (1999) J. Clin. Invest. 103:807815) , artritis reumatoide (véase por ejemplo, Patel, D.D. ycol. (2001) Clin. Immunol. 98:39-45) , colitis ulcerosa (véase, por ejemplo, Uguccioni, M. ycol. (1999) Am. J. Pathol. 155:331-336) , hepatitis (véase, por ejemplo, Narumi, S. ycol. (1997) J. Immunol. 158:5536-5544) , lesión de la médula espinal (véase, por ejemplo, McTigue, D.M. ycol. (1998) J. Neurosci. Res. 53:368-376; Gonzalez ycol. 2003. Exp. Neurol. 184:456-463) , lupus eritematoso sistémico (véase, por ejemplo, Narumi, S. ycol. (2000) Cytokine 12:1561-1565) , rechazo de trasplantes (véase por ejemplo, Zhang, Z. ycol. (2002) J. Immunol, 168:3205-3212) , síndrome de Sjogren (véase, por ejemplo, Ogawa, N. ycol. (2002) Arthritis Rheum. 46:2730-2741) . En consecuencia, son deseables agentes terapéuticos que inhiben la actividad, en particular agentes que son adecuados para su uso en seres humanos.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona anticuerpos monoclonales aislados, en particular anticuerpos monoclonales humanos, que se unen a IP-10 y que muestran numerosas propiedades deseables. Estas propiedades incluyen unión de alta afinidad con IP-10 humana, así como reactividad cruzada con IP-10 de mono rhesuspero que carecen de reactividad cruzada sustancial con MIG humano, ITAC humano o IP-10 de ratón. Además, los anticuerpos inhiben la unión de IP-10 con su receptor, CXCR3, inhiben el flujo de calcio inducido por IP-10 en células que expresan receptor inhiben la migración de células inducida por IP-10 (quimiotaxis) . Adicionalmente, se ha mostrado que los anticuerpos de la invención se unen a IP-10 en secciones del cerebro de un sujeto humano al que se ha diagnosticado esclerosis múltiple.

En particular, la presente invención proporciona un anticuerpo monoclonal humano aislado, o una parte de unión a antígeno del mismo, comprendiendo dicho anticuerpo:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nº 43 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nº 92;

(b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nº 35 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nº 84; o

(c) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nº 39 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nº 88.

En realizaciones preferidas de la invención, la IP-10 humana comprende un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID Nº 121 [Genbank Acc. Nº. NP_001556]; el CXCR3 comprende un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID Nº: 122 [Genbank Acc. Nº. NP_001495]; la IP-10 de mono Rhesus comprende un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID Nº: 123 [Genbank Acc. Nº. AAK95955]; la IP-10 de ratón comprende un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID Nº: 124 [GenbankAcc. Nº. NP_067249]; el IMG comprende un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID Nº: 125 [Genbank Acc. Nº. NP_002407]; y/o el ITAC humano comprende un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se expone en SEQ ID Nº: 126 [Genbank Acc. Nº. NP_005400].

Los anticuerpos de la invención pueden ser, por ejemplo, anticuerpos de longitud completa, por ejemplo de un isotipo IgG1 o IgG4. Como alternativa, los anticuerpos pueden ser fragmentos de anticuerpo, tales como fragmentos Fab o Fab’2, o anticuerpos de cadena sencilla.

La invención también proporciona un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo de la invención, o parte de unión a antígeno del mismo, unido con un agente terapéutico, tal como una citotoxina o un isótopo radiactivo. La invención también proporciona una molécula biespecífica que comprende un anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de la invención, unido a un segundo resto funcional que tiene una especificidad de unión diferente que dicho anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo.

También se proporcionan composiciones que comprenden un anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, o inumoconjugado o molécula biespecífica de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Las moléculas de ácido nucleico que codifican los anticuerpos, o parte de unión a antígeno de los mismos, de la invención también están abarcadas por la invención, así como vectores de expresión que comprenden tales ácidos nucleicos y células huésped que comprenden tales vectores de expresión. Además, la invención proporciona un ratón transgénico que comprende transgenes de cadena pesada y ligera de inmunoglobulina humana, expresando el ratón un anticuerpo de la invención, así como hibridomas preparados de un ratóntal, en el que el hibridoma produce el anticuerpo de la invención.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1A muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID Nº: 99) ysecuencia de aminoácidos (SEQ ID Nº: 35) de la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal humano 1D4. Las regiones CDR1 (SEQ ID Nº: 1) , CDR2 (SEQ ID Nº: 13) y CDR3 (SEQ ID Nº: 24) se delinean y se indican las derivaciones de línea... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal humano aislado, o una parte de unión a antígeno del mismo, comprendiendo dicho anticuerpo:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 43 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 92;

(b) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 35 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 84; o

(c) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 39 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 88.

2. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 43 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 92.

3. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 35 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 84.

4. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 39 y una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº: 88.

5. Un inmunoconjugado que comprende el anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 unido con un agente terapéutico.

6. El inmunoconjugado de la reivindicación 5, en el que el agente terapéutico es una citotoxina o isótopo radiactivo.

7. Una molécula biespecífica que comprende el anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, unido con un segundo resto funcional que tiene una especificidad de unión diferente de dicho anticuerpo o parte de unión a antígeno.

8. Una composición que comprende el anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, el inmunoconjugado de la reivindicación 5 o 6 o molécula biespecífica de la reivindicación 7, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

9. Una molécula de ácido nucleico aislado que codifica el anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

10. Un vector de expresión que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 9.

11. Una célula huésped que comprende el vector de expresión de la reivindicación 10.

12. Un ratón transgénico que comprende transgenes de cadena pesada y ligera de inmunoglobulina humana, en el que el ratón expresa el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

13. Un hibridoma preparado a partir del ratón de la reivindicación 12, en el que el hibridoma produce dicho anticuerpo.