ANTICUERPO BIESPECÍFICO QUE SUSTITUYE AL FACTOR VIII.

La presente invención se refiere a los anticuerpos biespecíficos que sustituyen funcionalmente a los cofactores que potencian reacciones enzimáticas, y a las composiciones farmacéuticas que comprenden el anticuerpo como principio activo. Antecedentes de la técnica Los anticuerpos han recibido mucha atención como medicina debido a su estabilidad en sangre elevada y su antigenicidad baja. Los anticuerpos biespecíficos pueden reconocer simultáneamente dos tipos de antígeno. Los anticuerpos biespecíficos han sido propuestos durante cierto tiempo; sin embargo, sólo se ha informado de anticuerpos que conectan simplemente dos tipos de antígeno, tales como aquellos para el redireccionamiento de las células NK, macrófagos y células T (ver el documento no de patente nº 7). Por ejemplo, MDX-210, que actualmente se encuentra bajo estudio clínico, es un anticuerpo biespecífico que únicamente redirige los monocitos que expresan FcRI y similares a células de cáncer que expresan HER-2/neu. De esta manera, no existe ningún ejemplo hasta el momento que utilice un anticuerpo biespecífico como medios alternativos para sustituir funcionalmente el cofactor que potencia las reacciones enzimáticas. Son ejemplos de factores el factor tisular (TF), el factor V de coagulación sanguínea (F.V), el factor V activado de coagulación sanguínea (F.Va), el factor VIII de coagulación sanguínea (F.VIII), el factor VIII activado de coagulación sanguínea (F.VIIIa), la trombomodulina (TM), la proteína S (PS), la proteína Z (PZ), la heparina, el complemento C4b, el factor H regulador del complemento, la proteína cofactor de membrana (MCP) y el receptor 1 del complemento (CR1). De ellos, el F.VIII/F.VIIIa es un cofactor necesario para una expresión suficiente de actividad del factor IX activado de coagulación sanguínea (F.IXa). Scheiflinger F. et al. descubrieron que un determinado anticuerpo anti-F.IX/F.IXa actúa estimulando la activación del factor X de coagulación sanguínea (F.X) por parte de F.IXa en un ensayo cromogénico (documento de patente nº 1). Sin embargo, en un ensayo que examina la capacidad de recuperación de la coagulación en plasma deficiente en F.VIII, se observó capacidad de recuperación de la coagulación únicamente al añadir exógenamente F.IXa, pero no en el caso de que se utilizase este anticuerpo por sí solo. Es conocido que F.VIIIa interactúe no sólo con F.IXa sino también con F.X (ver los documentos no de patente nº 5 y 6). A este respecto, el anticuerpo de Scheiflinger F. et al. no puede considerarse un sustituto suficiente para la función de F.VIII/F.VIIIa, y su actividad aparentemente también resulta insuficiente. A partir de la investigación específica, se ha conseguido la producción de anticuerpos biespecíficos que sustituyen funcionalmente los factores que potencian la actividad enzimática, y de esta manera han completado la presente invención. [Documento de patente 1] WO 01/19992 [Documento de patente 2] Patente US nº 4. 474.893 [Documento de patente 3] EP 404 097 [Documento de patente 4] WO 93/11161 [Documento de patente 5] Solicitud de patente japonesa: 2002-112369 [Documento de patente 6] Solicitud de patente japonesa: 2003-012648 [Documento de patente 7] Solicitud de patente japonesa Kokai Publicación nº (JP-A) H5-304992 (sin examinar, solicitud de patente japonesa publicada) [Documento de patente 8] JP-A H2-145187 [Documento de patente 9] JP-A H5-213775 [Documento de patente 10] JP-A H10-165184 [Documento de patente 11] JP-A H11-71288 2 E04792180 21-10-2011   [Documento de patente 12] JP-A 2002-518041 [Documento de patente 13] JP-A H11-506310 [Documento de patente 14] JP-A H5-199894 [Documento de patente 15] JP-A H10-511085 [Documento de patente 16] JP-A H5-184383 [Documento no de patente 1] Nilsson IM et al., "J. Intern. Med." 1992, Vol.235, p.25-32 [Documento no de patente 2] Lofqvist T et al,. "J. Intern. Med" 1997, Vol.241, p.395-400 (the "o" of Lofqvist is written with an umlaut) [Documento no de patente 3] 24th Meeting of The Japanese Society on Thrombosis and Hematosis, Special Committee on Examining Hemophilia Standardization, Mini-symposium, 2001, http://www jsth.org [Documento no de patente 4] Medical Bulletin #193 1994 [Documento no de patente 5] Mertens K et al., "Thromb. Haemost." 1999, Vol.82, p.209-217 [Documento no de patente 6] Lapan KA et al., "Thromb. Haemost." 1998, Vol.80, p.418-422 [Documento no de patente 7] Segal DM et al., "Journal of Immunological Methods" 2001, Vol.248, p.1-6 [Documento no de patente 8] Bos R y Nieuwenhuitzen W, "Hybridoma" 1992, Vol.11, nº 1, p.41-51 [Documento no de patente 9] Brennan M et al., "Science" 1985, Vol.229, nº 1708, p.81-3 [Documento no de patente 10] Karpovsky B et al., "J. Exp. Med." 1984, Vol. 160, nº 6, p.1686-701 1 [Documento no de patente 11] Suresh MR et al., "Methods Enzymol." 1986, Vol.121, p. 210-28 [Documento no de patente 12] Massimo YS et al., "J. Immunol. Methods" 1997, Vol.201, p.57-66 [Documento no de patente 13] Brennan M et al., "Science" 1985, Vol.229, p. 81 [Documento no de patente 14] Shalaby MR et al., "J. Exp. Med." 1992, Vol.175, p.217-25 [Documento no de patente 15] Holliner P et al., "Proc. Natl. Acad. Sci. USA" 1993, Vol.90, p. 6444-8 [Documento no de patente 16] Ridgway JB et al., "Protein Eng." 1996, Vol.9, p. 617-21 [Documento no de patente 17] Hammerling U et al., "J. Exp. Med." 1968, Vol.128, p.1461-73 [Documento no de patente 18] Kurokawa T et al., "Bio/Technology" 1989, Vol.7, p.1163 [Documento no de patente 19] Link BK et al., "Blood" 1993, Vol.81, p.3343 [Documento no de patente 20] Nitta T et al., "Lancet" 1990, Vol.335, p.368-71 [Documento no de patente 21] deLeij L et al., "Foundation Nationale de Transfusion Sanguine, Les Ulis France" 1990, p.249-53 [Documento no de patente 22] Le Doussal JM et al., "J. Nucl. Med." 1993, Vol.34, p. 1662-71 1 [Documento no de patente 23] Stickney DR et al., "Cancer Res." 1991, Vol.51, p.6650-5 [Documento no de patente 24] Weiner LM et al., "Cancer Res." 1993, Vol.53, p.94-100 [Documento no de patente 25] Kroesen BJ et al., "Br. J. Cancer" 1994, Vol.70, p.652-61 [Documento no de patente 26] Weiner GJ et al., "J. Immunol." 1994, Vol.152, p.2385 [Documento no de patente 27] Suresh MR et al., "Proc. Natl. Acad. Sci. USA" 1986, Vol.83, p.7989-93 3 E04792180 21-10-2011   [Documento no de patente 28] Milstein C y Cuello AC, "Nature" 1983, Vol.305, p.537 [Documento no de patente 29] Xiang J et al., "Mol. Immunol." 1990, Vol.27, p.809 [Documento no de patente 30] Bebbington CR et al., "Bio/Technology" 1992, Vol.10, p. 169 [Documento no de patente 31] Huse WD et al., "Science" 1989, Vol. 246, p.1275 [Documento no de patente 32] McCafferty J et al., "Nature" 1990, Vol.348, p.552 [Documento no de patente 33] Kang AS et al., "Proc. Natl. Acad. Sci. USA" 1991, Vol.88, p. 4363 Ruef et al. (Thromb. Haemost. 82:109-114, 1990) dan a conocer un constructo de anticuerpo biespecífico que consiste de dos Fab que dirigen la uroquinasa a epítopos de fibrina y de plaquetas. Exposición de la invención Un objetivo de la presente invención consiste en proporcionar anticuerpos biespecíficos que sustituyan funcionalmente a los cofactores que potencian las reacciones enzimáticas. A partir de la investigación específica, se han podido descubrir anticuerpos biespecíficos que se unen específicamente tanto a F.IX/F.IXa como a F.X y sustituyen la función del cofactor F.VIIIa (es decir, una función de estimulación de la activación de F.X por parte de F.IXa). Es decir, se han podido producir anticuerpos biespecíficos que reconocen tanto un enzima como su sustrato y que sustituyen funcionalmente los cofactores del enzima. La presente invención se refiere a anticuerpos biespecíficos que sustituyen funcionalmente los cofactores que potencian las reacciones enzimáticas, y más concretamente a: [1] un anticuerpo que reconoce tanto un enzima como un sustrato del mismo, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo biespecífico que sustituye funcionalmente un cofactor que potencia las reacciones enzimáticas, en el que dicho enzima es un enzima proteolítico, y en el que dichos enzima proteolítico y cofactor son factores asociados a la coagulación sanguínea/fibrinolisis y en el que el enzima de un factor de coagulación sanguínea/fibrinolisis es el factor IX de coagulación sanguínea y/o el factor IX activado de coagulación sanguínea; el sustrato es el factor X de coagulación sanguínea y el cofactor es el factor VIII de coagulación sanguínea y/o el factor VIII activado de coagulación sanguínea. [2] El anticuerpo según [1], en el que dicho anticuerpo comprende una región determinante de complementariedad que comprende la secuencia de aminoácidos de la CDR3 del anticuerpo anti-factor de coagulación sanguínea IX/IXa de los siguientes (a1) o (a2) o una región determinante de complementariedad equivalente funcionalmente a la misma, y una región... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo que reconoce un enzima proteolítico y un sustrato del mismo, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo biespecífico que puede actuar como cofactor que aumenta la reacción enzimática, en el que el enzima es el factor IX de coagulación sanguínea y/o el factor IX activado de coagulación sanguínea; el sustrato es el factor X de coagulación sanguínea; y el cofactor es factor VIII de coagulación sanguínea y/o factor VIII activado de coagulación sanguínea. 2. Anticuerpo según la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo comprende una región determinante de complementariedad que comprende la secuencia de aminoácidos de la CDR3 del anticuerpo anti-factor IX/IXa de coagulación sanguínea de los (a1) o (a2) siguientes o una región determinante de complementariedad equivalente funcionalmente a la misma, y una región determinante de complementariedad que comprende la secuencia de aminoácidos de la CDR3 del anticuerpo anti-factor X de coagulación sanguínea descrita en cualquiera de los (b1) a (b9) siguientes, o una región determinante de complementariedad equivalente funcionalmente a la misma: (a1) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 16, (a2) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 20, (b1) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 24, (b2) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 28, (b3) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 32, (b4) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 36, (b5) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 40, (b6) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 44, (b7) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 48, (b8) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 52, (b9) secuencia de aminoácidos de la CDR3 de la cadena H descrita en SEC ID nº 56. 3. Anticuerpo según la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo comprende una región determinante de complementariedad que comprende la secuencia de aminoácidos de la CDR del anticuerpo anti-factor IX/IXa de coagulación sanguínea de los (a1) o (a2) siguientes, o una región determinante de complementariedad equivalente funcionalmente a la misma, y una región determinante de complementariedad que comprende la secuencia de aminoácidos de la CDR del anticuerpo anti-factor X de coagulación sanguínea descirta en cualquiera de los (b1) a (b9) siguientes o una región determinante de complementariedad equivalente funcionalmente a la misma: (a1) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 14, 15 y 16, respectivamente; (a2) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 18, 19 y 20, respectivamente; (b1) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 22, 23 y 24, respectivamente; (b2) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 26, 27 y 28, respectivamente; (b3) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 30, 31 y 32, respectivamente; (b4) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 34, 35 y 36, respectivamente; (b5) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 38, 39 y 40, respectivamente; (b6) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 42, 43 y 44, respectivamente; (b7) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 46, 47 y 48, respectivamente; (b8) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 50, 51 y 52, respectivamente; (b9) secuencias de aminoácidos de las CDR 1, 2 y 3 de la cadena H descritas en SEC ID nº 54, 55 y 56, respectivamente.   4. Composición que comprende el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y un portador farmacéuticamente aceptable. 5. Composición según la reivindicación 4, en la que dicha composición es una composición farmacéutica utilizada para prevenir y/o tratar el sangrado, un trastorno acompañado de sangrado o un trastorno causado por el sangrado. 6. Composición según la reivindicación 5, en la que el sangrado, el trastorno acompañado de sangrado o el trastorno causado por el sangrado es un trastorno que aparece y/o progresa como resultado de una reducción de la actividad o deficiencia del factor VIII de coagulación sanguínea y/o del factor VIII activado de coagulación sanguínea. 7. Composición según la reivindicación 6, en la que el trastorno que aparece y/o progresa como resultado de una reducción de la actividad o deficiencia del factor VIII de coagulación sanguínea y/o del factor VIII activado de coagulación sanguínea es la hemofilia A. 8. Composición según la reivindicación 6, en la que el trastorno que aparece y/o progresa como resultado de una reducción de la actividad o deficiencia del factor VIII de coagulación sanguínea y/o del factor VIII activado de coagulación sanguínea es un trastorno en el que se genera un inhibidor contra el factor VIII de coagulación sanguínea y/o el factor VIII activado de coagulación sanguínea. 9. Composición según la reivindicación 6, en la que el trastorno que aparece y/o progresa como resultado de una reducción de la actividad o deficiencia del factor VIII de coagulación sanguínea y/o del factor VIII activado de coagulación sanguínea es la hemofilia adquirida. 10. Composición según la reivindicación 6, en la que el trastorno que aparece y/o progresa como resultado de una reducción de la actividad del factor VIII de coagulación sanguínea y/o del factor VIII activado de coagulación sanguínea es la enfermedad de von Willebrand. 11. Utilización del anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 10, para la preparación de una composición farmacéutica para prevenir y/o tratar el sangrado, un trastorno acompañado de sangrado, o un trastorno causado por el sangrado. 12. Utilización del anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para preparar la composición según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 10. 13. Kit utilizado en la utilización según la reivindicación 11, en el que dicho kit comprende por lo menos el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o la composición según la reivindicación 5. 14. Utilización del anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o de la composición según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 10 en combinación con factor VIII de coagulación sanguínea para la preparación de una composición farmacéutica destinada a la prevención y/o el tratamiento del sangrado, de un trastorno acompañado de sangrado o de un trastorno causado por el sangrado. 15. Kit utilizado en la utilización según la reivindicación 14, en el que dicho kit comprende por lo menos el anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o la composición según la reivindicación 4, y el factor VIII de coagulación sanguínea. 96   97   98   99     101   102   103   104     106   107   108   109     111   112   113   114