Anticuerpos contra interferón alfa y sus usos.

Un anticuerpo monoclonal anti-interferón alfa aislado, o parte de unión a antígeno del mismo,

que comprende:

(a) una CDR1 de región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº 1;

(b) una CDR2 de región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº 4;

(c) una CDR3 de de región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº 7;

(d) una CDR1 de región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº 10;

(e) una CDR2 de región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº 13; y

(f) una CDR3 de región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº 16.

Anticuerpos contra interferón alfa y sus usos Antecedentes de la invención los interferones de tipo I (IFN) (IFN-!, IFN-∀, IFN-#, IFN-∃) son una familia de citoquinas estructuralmente relacionadas que tienen efectos antivirales, antitumorales e inmunomoduladores (Hardy y col. (2001) Blood 97:473; Cutrone y Langer (2001) J. Biol. Chem. 276:17140) . El locus IFN! humano incluye dos subfamilias. La primera subfamilia consta de al menos 14 genes no alélicos y 4 pseudogenes que tienen al menos un 75% de homología. La segunda subfamilia, !II u omega (#) , contiene 5 pseudogenes y un gen funcional que muestra un 70% de homología con los genes IFN!. Los subtipos de IFN! tienen diferentes actividades específicas pero tienen el mismo espectro biológico (Streuli y col. (1981) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:2848) y tienen el mismo receptor celular (Agnet M. y col. (1983) en quot;Interferon 5quot; Ed. I. Gresser pág. 1-22, Academic Press, Londres) .

Todos los interferones humanos tipo I se unen a un receptor de superficie celular (receptor de IFN alfa, IFNAR) que consta de dos proteínas transmembrana, IFNAR-1 e IFNAR-2 (Uze y col. (1990) Cell 60:225; Novick y col. (1994) Cell 77:391; Pestka y col. (1987) Annu Rev. Biochem. 56:727; Mogensen y col. (1999) J. Interferon Cytokine Res. 19:1069) . IFNAR-1 es esencial para la unión de alta afinidad y la especificidad diferencial del complejo IFNAR (Cutrone (2001) supra) . Aunque no se han identificado las diferencias funcionales para cada uno de los subtipos de IFN tipo I se cree que cada uno puede mostrar diferentes interacciones con los componentes del receptor IFNAR conduciendo a resultados de señalización potencialmente diversos (Cook y col. (1996) J. Biol. Chem. 271:13448) . En particular, estudios utilizando formas mutantes de IFNAR-1 e IFNAR-2 sugirieron que los interferones alfa y beta señalizan de forma diferente a través del receptor por interacción diferencial con cadenas respectivas (Lewerenz y col. (1998) J. Mol. Biol. 282:585) .

Estudios funcionales previos de IFN de tipo I se centraron en la defensa innata contra infecciones virales (Haller y col. (1981) J. Exp. Med. 154:199; Lindenmann y col. (1981) Methods Enzymol. 78:181) . Estudios más recientes, sin embargo, implican los IFN de tipo I como citoquinas inmunoreguladoras potentes en la respuesta inmune adaptativa. Específicamente, las IFN de tipo I han demostrado facilitar la diferenciación de células T vírgenes a lo largo de la vía Th1 (Brinkmann y col. (1993) J.Exp. Med. 178:1655) , potencia la producción de anticuerpos (Finkelman y col. (1991)

J. Exp. Med. 174:1179) y da soporte a la actividad funcional y supervivencia de las células T de memoria (Santini, y col. (2000) J. Exp. Med. 191:1777; Tough y col. (1996) Science 272:1947) .

Un trabajo reciente por varios grupos sugiere que INF-! puede potenciar la maduración o activación de células dendríticas (DC) (Santini, y col. (2000) J. Exp. Med. 191:1777; Luft y col. (1998) J. Immunol. 161:1947; Luft y col. (2002) Int. Immunol. 14:367; Radvanyi y col (1999) Scand. J. Immunol. 50:499; Paquette y col. (1998) J. Leukoc. Biol. 64:358) . Además, la expresión aumentada de interferones de tipo I se ha descrito en numerosas enfermedades autoinmunes (Foulis y col. (1987) Lancet 2:1423; Hooks y col. (1982) Arthritis Rheum 25:396; Hertzog y col. (1988) Clin. Immunol. Immun-opathol. 48:192; Hopkins y Meager (1988) Clin. Exp. Immunol. 73:88; Arvin y Miller (1984) Arthritis Rheum. 27: 582) . La mayoría de los ejemplos estudiados de esto son diabetes mellitus insulinodependiente (IDDM) (Foulis (1987) supra) , lupus sistémico eritematoso (SLE) (Hooks (1982) supra; Blanco y col. (2001) Science 294:1540; Ytterberg y Schnitzer (1982) Arthritis Rheum. 25:401; Batteux y col. (1999) Eur. Cytokine Netw. _:509) , y tiroiditis autoinmune (Prummel y Laurberg (2003) Thyroid 13:547; Mazziotti y col. (2002) J. Endocrinol. Invest. 25:624; You y col. (1999) Chin. Med. J. 112:61; Koh y col. (1997) Thyroid 7:891) , que están todas asociadas con niveles elevados de IFN!, y artritis reumatoide (RA) (Hertzog (1988) , Hopkins y Meager (1988) , Arvin y Miller (1984) , supra) en que IFN-∀ puede desempeñar un papel más significativo.

Además, se ha informado de que la administración de interferón ! exacerba la enfermedad subyacente en pacientes con psoriasis, tiroiditis autoinmune y esclerosis múltiple e induce el síndrome tipo SLE en pacientes sin antecedentes previos de enfermedad autoinmune. El interferón ! también ha demostrado inducir glomerulonefritis en ratones normales y acelerar la aparición de la enfermedad autoinmune espontánea de ratones NZB/W. además, la terapia con IFN-! ha demostrado en algunos casos conducir a efectos secundarios indeseados, incluyendo fiebre y trastornos neurológicos. Por tanto, existen situaciones patológicas en que podría ser beneficiosa la inhibición de la actividad IFN-! para el paciente y existe la necesidad de agentes eficaces en la inhibición de la actividad IFN-!.

El documento US 203/0166228 A1 describe la generación de anticuerpos monoclonales neutralizantes anti IFN-! con reactividad contra diversos subtipos de IFN-!.

Tsukui y col. (Microbiology and Immunology, Vol. 30, Nº 11, 1986, páginas 1129-1139) describe un anticuerpo monoclonal con reactividad contra los subtipos de interferón-! humano útiles para la purificación de interferón derivado de leucocitos.

Meager y col. (Journal of Interferon Research, Vol. 6, Nº 6, 1986, páginas 729-736) describe un anticuerpo monoclonal, LO-22, con especificidad por subtipos de interferón-!.

Sumario de la invención La presente invención proporciona un anticuerpo monoclonal aislado anti-interferón alfa, o parte de unión a antígeno del mismo, que comprende:

(a) una CDR1 de región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº 1; 5 (b) una CDR2 de región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº 4;

(c) una CDR3 de región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº 7;

(d) una CDR1 de región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº 10;

(e) una CDR2 de región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº 13; y

(f) una CDR3 de región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº 16.

La presente invención también proporciona:

-un anticuerpo monoclonal aislado anti-interferón alfa, o parte de unión a antígeno del mismo, que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en las SEC ID Nº 34, 35, 36 y 37; y

(b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 22;

- una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo o parte de unión a antígeno de la invención; -un inmunoconjugado que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de la invención, unido a un agente terapéutico; -una molécula biespecífica que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de la invención, unido a un segundo resto funcional que tiene una especificidad de unión diferente que dicho anticuerpo, o parte 20 de unión a antígeno del mismo;

-una composición que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de la invención, o el inmunoconjugado de la invención, o la molécula biespecífica de la invención, y un vehículo farmacéuticamente aceptable;

-una molécula de ácido nucleico aislada que codifica al anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de la 25 invención, un vector de expresión que comprende dicho ácido nucleico, o una célula huésped aislada que comprende dicho vector;

-un ratón transgénico que comprende los transgenes de cadena pesada y ligera de inmunoglobulina humana, en que el ratón expresa el anticuerpo de la invención, o un hibridoma preparado a partir de dicho ratón, en que el hibridoma produce dicho anticuerpo;

- un procedimiento ex vivo para inhibir la actividad biológica de interferón alfa que comprende poner en contacto el interferón alfa con el anticuerpo o parte de unión a antígeno de la invención, de modo que se inhiba la actividad biológica del interferón alfa; -un anticuerpo o parte de unión a antígeno de la invención para su uso como medicamento; -un anticuerpo parte de unión a antígeno de la invención para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por interferón alfa en un sujeto en necesidad de tratamiento:

El anticuerpo o parte de unión a antígeno de la invención puede comprender:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácido de la... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal anti-interferón alfa aislado, o parte de unión a antígeno del mismo, que comprende:

(a) una CDR1 de región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº 1;

(b) una CDR2 de región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº 4;

(c) una CDR3 de de región variable de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº 7;

(d) una CDR1 de región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº 10;

(e) una CDR2 de región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº 13; y

(f) una CDR3 de región variable de cadena ligera que comprende la SEC ID Nº 16.

2. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de la reivindicación 1, que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 19; y

(b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 22.

3. Un anticuerpo monoclonal anti-interferón alfa aislado, o parte de unión a antígeno del mismo, que comprende:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en las SEC ID Nº 34, 35, 36 y 37; y

(b) una región variable de cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 22.

4. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo inhibe la expresión superficial inducida por IFN de CD38 o MHC de clase I en células mononucleares periféricas.

5. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo inhibe la expresión inducida por IFN de IP-10 por células mononucleares periféricas.

6. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo inhibe el desarrollo de células dendríticas mediado por plasma de lupus sistémico eritematoso (SLE) .

7. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humano.

8. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el anticuerpo es un anticuerpo quimérico.

9. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humanizado.

10. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el anticuerpo es un anticuerpo IgG 1 o IgG4.

11. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la parte de unión a antígeno es un fragmento de anticuerpo Fab.

12. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la parte de unión a antígeno es un anticuerpo de cadena sencilla (scFv) .

13. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

14. La composición farmacéutica de la reivindicación 13, en la que la composición farmacéutica está liofilizada.

15. La composición farmacéutica de la reivindicación 13, en la que la composición farmacéutica es una solución o dispersión acuosa.

16. Una composición que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

17. Un inmunoconjugado que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, unido a un agente terapéutico.

18. El inmunoconjugado de la reivindicación 17, en el que el agente terapéutico es una citotoxina.

19. El inmunoconjugado de la reivindicación 17, en el que el agente terapéutico es un isótopo radiactivo.

20. Una composición que comprende el inmunoconjugado de la reivindicación 17, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

21. Una molécula biespecífica que comprende el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, unida a un segundo resto funcional que tiene una diferente especificidad de unión que dicho anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo.

22. Una composición que comprende la molécula biespecífica de la reivindicación 21 y un vehículo 5 farmacéuticamente aceptable.

23. Una molécula de ácido nucleico aislado que codifica el anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12.

24. Un vector de expresión que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 23.

25. Una célula huésped aislada que comprende el vector de expresión de la reivindicación 24.

26. Un ratón transgénico que comprende transgenes de cadena pesada y ligera de inmunoglobulina humana, en el que el ratón expresa el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12.

27. Un hibridoma preparado a partir de un ratón de la reivindicación 26, en el que el hibridoma produce dicho anticuerpo.

28. Un procedimiento ex vivo para inhibir la actividad biológica del interferón alfa que comprende poner en contacto

el interferón alfa con el anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, de modo que se inhiba la actividad biológica del interferón alfa.

29. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12 para su uso como medicamento.

30. El anticuerpo, o parte de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, para su

uso en un procedimiento de tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por interferón alfa en un sujeto en necesidad de tratamiento.

31. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de la reivindicación 30, en el que la enfermedad o trastorno es lupus sistémico eritematoso.

32. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de la reivindicación 30, en el que la enfermedad o trastorno se

selecciona entre el grupo que consiste en esclerosis múltiple, enfermedad inflamatoria del intestino, diabetes mellitus insulino-dependiente, psoriasis, tiroiditis autoinmune, artritis reumatoide y glomerulonefritis.

33. El anticuerpo o parte de unión a antígeno de la reivindicación 30, en el que la enfermedad o trastorno es rechazo de transplantes o enfermedad de injerto contra huésped.