Anticuerpos monoclonales humanos contra la proteína tirosina quinasa 7(PTK7) y su uso.

Un anticuerpo monoclonal humano aislado, o una porción de unión al antígeno del mismo,

en donde el anticuerpo: (a) se une específicamente a PTK7 humana; y

(b) se une a la línea celular tumoral de Wilms que tiene el Núm. de Acc. ATCC CRL-1441 con una CE50 de 4,0 nM o menos, en un análisis que comprende la incubación de 1 x 105 células con el anticuerpo a una concentración de partida de 30 μg/ml y la dilución seriada del anticuerpo a una dilución 1:10, y

(c) se une al mismo epítopo en PTK7 humana como un anticuerpo de referencia que comprende:

(i) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2 y 10 una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 7; o

(ii) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 3 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 8; o

(iii) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 4 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 10.

Anticuerpos monoclonales humanos contra la proteína tirosina quinasa 7 (PTK7) y su uso.

Antecedentes de la invención Las tirosina quinasas receptoras (RTK) son proteínas de señalización transmembrana que transmiten señales biológicas desde el entorno extracelular al interior de la célula. La regulación de las señales de RTK es importante para la regulación del crecimiento celular, la diferenciación, el crecimiento axonal, el crecimiento epitelial, el desarrollo, la adhesión, la migración, y la apoptosis (Prenzel et al. (2001) Endocr. Relat. Cancer 8:11-31; Hubbard y Till (2000) Annu. Rev. Biochem. 69:373-98) . Se sabe que las RTK están implicadas en el desarrollo y la progresión de varias formas de cáncer. En la mayoría de los cánceres relacionados con RTK, ha habido una amplificación de la proteína receptora en lugar de una mutación del gen (Kobus y Fleming (2005) Biochemistr y 44:1464-70) .

La proteína tirosina quinasa 7 (PTK7) , un miembro de la familia de proteínas tirosina quinasa receptoras, se aisló en primer lugar de los melanocitos humanos normales y se clonó mediante RT-PCR (Lee et al., (1993) Oncogene 8:3403-10; Park et al., (1996) J. Biochem 119:235-9) . Por separado, el gen se clonó a partir de líneas celulares derivadas de carcinoma de colon humano y se denominó quinasa 4 de carcinoma de colon (CCK4) (Mossie et al. (1995) Oncogene 11:2179-84) . La PTK7 pertenece a un subconjunto de las RTK que carecen de actividad tirosina quinasa catalítica detectable pero retienen la actividad de transducción de señales y se cree que posiblemente funcionar como una molécula de adherencia celular.

Se encontró que el ARNm para PTK7 se expresaba en forma variable líneas celulares derivadas de carcinoma de colon pero no se encontró que se expresara en los tejidos de colon humanos adultos (Mossie et al., supra) . También se observó expresión de PTK7 en algunas líneas celulares de melanoma y biopsias de melanoma (Easty, et al. (1997) Int. J. Cancer 71:1061-5) . Se ha encontrado una forma de empalme alternativa que se expresa en hepatomas y células de cáncer de colon (Jung et al. (2002) Biochim Biophys Acta 1579: 153-63) . Además, se encontró que PTK7 estaba altamente expresada en exceso en muestras de leucemia mieloide aguda (Muller-Tidow et al., (2004) Clin. Cancer Res. 10:1241-9) . Mediante inmunohistoquímica, se observó tinción específica de tumor de PTK7 en los cánceres de mama, de colon, de pulmón, de páncreas, de riñón y de vejiga, como se describe en la Publicación PCT WO 04/17992. El documento WO 2004/017992 describe PTK7, agentes que interaccionan con o modulan la expresión o actividad de PTK7, y su uso en el tratamiento del carcinoma. Kyriakos et al. (Cancer Research 52, Febrero de 1992, Núm. 4, páginas 835-842) describen el destino de anticuerpos unidos a la superficie de las células tumorales in vitro.

Por lo tanto, se desean agentes que reconozcan PTK7, y métodos de uso de tales agentes.

Compendio de la invención La presente invención proporciona anticuerpos monoclonales aislados, en particular anticuerpos monoclonales humanos, que se unen a PTK7 y que exhiben numerosas propiedades deseables. Estas propiedades incluyen una alta afinidad de unión a PTK7 humana y unión a las células del tumor de Wilms. También se proporcionan los anticuerpos y composiciones de la invención para su uso en métodos para el tratamiento de una variedad de enfermedades mediadas por PTK7.

La invención se refiere a un anticuerpo monoclonal humano aislado, o una porción de unión a antígeno del mismo, en donde el anticuerpo:

1. (a) se une específicamente a PTK7 humana; y

2. (b) se une a la línea celular tumoral de Wilms que tiene el Núm. de Acc. ATCC CRL-1441 con una CE50 de 4, 0 nM o menos, en un análisis que comprende la incubación de 1 x 105 células con el anticuerpo a una concentración de partida de 30 μg/ml y la dilución seriada del anticuerpo a una dilución 1:10, y

3. (c) se une al mismo epítopo en PTK7 humana como un anticuerpo de referencia que comprende:

1. (i) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 7; o

2. (ii) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 3 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 8; o

3. (iii) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 4 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO:

10.

Un anticuerpo preferido o porción de unión a antígeno del mismo comprende:

1. (a) una región variable de la cadena pesada CDR1 que comprende el SEQ ID NO: 12;

2. (b) una región variable de la cadena pesada CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 16;

3. (c) una región variable de la cadena pesada CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 20;

4. (d) una región variable de la cadena ligera CDR1 que comprende el SEQ ID NO: 25;

5. (e) una región variable de la cadena ligera CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 31; y

6. (f) una región variable de la cadena ligera CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 37;

o

1. (a) una región variable de la cadena pesada CDR1 que comprende el SEQ ID NO: 14;

2. (b) una región variable de la cadena pesada CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 18;

3. (c) una región variable de la cadena pesada CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 22;

4. (d) una región variable de la cadena ligera CDR1 que comprende el SEQ ID NO: 28;

5. (e) una región variable de la cadena ligera CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 34; y

6. (f) una región variable de la cadena ligera CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 40.

o

1. (a) una región variable de la cadena pesada CDR1que comprende el SEQ ID NO: 13;

2. (b) una región variable de la cadena pesada CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 17;

3. (c) una región variable de la cadena pesada CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 21;

4. (d) una región variable de la cadena ligera CDR1 que comprende el SEQ ID NO: 26;

5. (e) una región variable de la cadena ligera CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 32; y

6. (f) una región variable de la cadena ligera CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 38.

Otros anticuerpos preferidos de la invención, o porciones de unión a antígeno de los mismos comprenden:

1. (a) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2; y

2. (b) una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 7;

o

1. (a) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 4; y

2. (b) una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 10;

o

1. (a) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 3; y

2. (b) una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 8.

Los anticuerpos de la invención pueden ser, por ejemplo, anticuerpos completos, por ejemplo de un isotipo IgG1 o IgG4. Alternativamente, los anticuerpos pueden ser fragmentos de anticuerpos, tales como fragmentos Fab o Fab'2,

o anticuerpos de la cadena sencilla.

La invención también proporciona un producto inmunoconjugado que comprende un anticuerpo de la invención, o porción de unión a antígeno del mismo, conectado a un agente terapéutico, tal como una citotoxina o un isótopo radiactivo.

También se proporcionan composiciones que comprenden un anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo,

o producto inmunoconjugado de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

También están abarcados por la invención moléculas de ácido nucleico que codifican los anticuerpos, o porciones de unión a antígeno de las mismas de la invención, así como vectores de expresión que comprenden tales ácidos nucleicos y células anfitrionas que comprenden tales vectores de expresión.

También se proporciona un método in vitro para preparar un anticuerpo de la invención, que comprende expresar el anticuerpo en una célula anfitriona de la invención y aislar el anticuerpo de la célula anfitriona.

Por otra parte, en la presente memoria se describe un ratón transgénico que comprende transgenes de la cadena pesada y ligera de inmunoglobulina humana, en... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal humano aislado, o una porción de unión al antígeno del mismo, en donde el anticuerpo:

(a) se une específicamente a PTK7 humana; y

(b) se une a la línea celular tumoral de Wilms que tiene el Núm. de Acc. ATCC CRL-1441 con una CE50 de 4, 0 nM o menos, en un análisis que comprende la incubación de 1 x 105 células con el anticuerpo a una concentración de partida de 30 μg/ml y la dilución seriada del anticuerpo a una dilución 1:10, y

(c) se une al mismo epítopo en PTK7 humana como un anticuerpo de referencia que comprende:

(i) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 2 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 7; o

(ii) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 3 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 8; o

(iii) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 4 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 10.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1, que es:

(a) un anticuerpo completo de un isotipo IgG1 o IgG4; o

(b) un fragmento de anticuerpo o un anticuerpo de cadena sencilla.

3. El anticuerpo, o porción de unión al antígeno del mismo, de la reivindicación 1 o 2, en donde el anticuerpo se une a células de tumor de Wilms con una CE50 de 3, 5 nM o menos.

4. El anticuerpo, o porción de unión al antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende:

(a) una región variable de la cadena pesada CDR1 que comprende el SEQ ID NO: 12; una región variable de la cadena pesada CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 16; una región variable de la cadena pesada CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 20; una región variable de la cadena ligera CDR1 que comprende el SEQ ID NO: 25; una región variable de la cadena ligera CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 31; y una región variable de la cadena ligera CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 37; o

(b) una región variable de la cadena pesada CDR1 que comprende el SEQ ID NO: 14; una región variable de la cadena pesada CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 18; una región variable de la cadena pesada CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 22; una región variable de la cadena ligera CDR1 que comprende el SEQ ID NO: 28; una región variable de la cadena ligera CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 34; y una región variable de la cadena ligera CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 40; o

(c) una región variable de la cadena pesada CDR1que comprende el SEQ ID NO: 13; una región variable de la cadena pesada CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 17; una región variable de la cadena pesada CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 21; una región variable de la cadena ligera CDR1 que comprende el SEQ ID NO: 26; una región variable de la cadena ligera CDR2 que comprende el SEQ ID NO: 32; y una región variable de la cadena ligera CDR3 que comprende el SEQ ID NO: 38.

5. El anticuerpo, o porción de unión al antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende:

(a) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO:2 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO:7; o

(b) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO:4 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 10; o

(c) una región variable de la cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 3 y una región variable de la cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO: 8.

6. Un producto inmunoconjugado que comprende el anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, conectados a un agente terapéutico, tal como una citotoxina o un isótopo radiactivo.

7. Una composición que comprende el anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o el producto inmunoconjugado de la reivindicación 6 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Una molécula de ácido nucleico aislada que codifica el anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

9. Un vector de expresión que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 8. 5

10. Una célula anfitriona que comprende el vector de expresión de la reivindicación 9.

11. Un método in vitro para la preparación de un anticuerpo anti-PTK7 que comprende expresar el anticuerpo en la

célula anfitriona de la reivindicación 10 y aislar el anticuerpo de la célula anfitriona. 10

12. El anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo, de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para uso en un método de tratamiento o prevención de un cáncer caracterizado por el crecimiento de células tumorales que expresan PTK7.

13. El anticuerpo, o porción de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 12, en el que el cáncer se selecciona entre cáncer de colon, cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de páncreas, melanoma, leucemia mieloide aguda, cáncer de riñón, cáncer de vejiga, cáncer de ovario y cáncer de próstata.