Un método de diagnóstico de hipersensibilidad a fármacos relacionada con la presencia de una variante molecular del gen CYP2B6 que comprende determinar en una muestra de un sujeto la presencia de un polinucleótido seleccionado del grupo que consiste en:

(a) un polinucleótido que codifica un polipéptido CYP2B6 o un fragmento del mismo, en donde dicho polipéptido comprende una sustitución de aminoácido de Gln172 a His en el exón 4 y/o Arg487 a Cys en el exón 9 del polipéptido CYP2B6 que tiene el número de acceso M29874; y

(b) un polinucleótido capaz de hibridar con el gen CYP2B6, en donde dicho polinucleótido tiene una T en una posición correspondiente a la posición 516 ó 1459 del gen CYP2B6 que tiene el número de acceso M29874, en donde el nucleótido A en la posición 7 se ha numerado como +1;

en donde la presencia de dicho polinucleótido o fragmento del mismo se considera indicativa de dicha hipersensibilidad a fármacos en dicho método

Polimorfismos en el gen CYP2B6 humano y su uso en aplicaciones diagnósticas y terapéuticas.

Campo de la invención

La presente invención se refiere en general a medios y métodos de diagnosticar el espectro fenotípico así como las características clínicas superpuestas con varias formas de expresión y/o función anormal heredada del gen del citocromo P-450 (CYP)2B6. En particular, la presente invención se refiere a un método de diagnosticar hipersensibilidad a fármacos relacionada con la presencia de una variante molecular del gen CYP2B6 que comprende determinar en una muestra de un sujeto la presencia de un polinucleótido seleccionado del grupo que consiste en:

en donde la presencia de dicho polinucleótido o fragmento del mismo se considera indicativa de dicha hipersensibilidad a fármacos en dicho método.

En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de un oligo- o polinucleótido para diagnosticar la hipersensibilidad a fármacos relacionada con la presencia de una variante molecular del gen CYP2B6 que comprende determinar en una muestra de un sujeto la presencia de un polinucleótido seleccionado del grupo que consiste en:

inhibidores o moduladores de los genes CYP2B6 o su producto.

En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un método in vitro para el desarrollo de un perfil farmacodinámico de fármacos que son sustratos del producto del gen CYP2B6 para un paciente o para mejorar la terapia de trastornos con fármacos que son dianas del producto del gen CYP2B6 que comprende usar el polimorfismo de nucleótido único del gen CYP2B6 en la posición 516 ó 1459 como se define en la reivindicación 1.

Antecedentes de la invención

Los miembros de la familia del citocromo P-450 (CYP) de hemoproteínas metabolizan una amplia variedad de sustratos endógenos tales como hormonas esteroideas, y de xenobióticos incluyendo carcinógenos, toxinas y fármacos; véase, por ejemplo, Daly, Toxicol. Lett. 102-103 (1998), 143-147; Touw, Drug Metabol. Drug Interact. 14 (1997), 55-82. CYP2B6 está implicada en la activación e inactivación metabólica de ciertos fármacos clínicamente importantes tales como los agentes antineoplásicos usados con frecuencia ciclofosfamida e isofosfamida, el antiestrógeno tamoxifeno, el inhibidor de agregación plaquetaria más nuevo clopidogrel, pero también tóxicos medioambientales y drogas recreativas tales como nicotina y éxtasis. El gen CYP2B6 se ha mapeado en el cromosoma 19 entre 19q12 y 19q13.2 (Miles et al., 1989; Carrano et al., 1989; Hoffman et al., 1995). Abarca una región de aproximadamente 28 kb y como otros miembros de la familia CYP2 contiene 9 exones que están separados por 8 intrones. El gen codifica una proteína microsómica con 491 aminoácidos. El gen CYP2B6 está localizado dentro de un agrupamiento de genes de 350 kb junto con un número de otros genes y pseudogenes de las subfamilias CYP2A, 2B y 2F (Hoffman et al., 1995). La subfamilia CYP2B consiste en el gen funcional CYP2B6, el gen no funcional CYP2B7 y un pseudogén similar a CYP2B7 (Yamamo 1989; Hoffman 1995). El ARNm y la proteína de CYP2B6 se expresan principalmente en hígado humano donde contribuye en un 1 a un 5% estimado del contenido total en hígado de citocromo P450 (Gervot et al., 1999). La expresión extrahepática se produce a niveles menores en riñón, intestino y pulmón (Gervot et al., 1999; González et al., 1992). Inicialmente, se pensó que CYP2B6 se expresaba sólo en alrededor del 25% de todos los hígados humanos (Mimura et al., 1993). Sin embargo, con nuevos anticuerpos de mayor sensibilidad se detectó CYP2B6 en todas las muestras de hígado con una variabilidad interindividual de expresión de hasta 100 veces (Code et al., 1997; Gervot et al., 1999). Las razones para esta gran variabilidad son desconocidas pero lo más probable es que estén implicados dos mecanismos:

Está claro que las mutaciones naturales, si existen pueden tener efectos sobre la metabolización de fármacos y la eficacia del tratamiento farmacológico, por ejemplo en el tratamiento del cáncer. Sin embargo, no se sabe cuántas de tales variaciones existen, ni con qué frecuencia y en qué posiciones en el gen CYP2B6 humano.

Según esto, medios y métodos para diagnosticar y tratar una variedad de formas de intolerancia a fármacos individuales e ineficacia al tratamiento farmacológico resultante de polimorfismos en el gen CYP2B6 que interfiere, por ejemplo, con el tratamiento quimioterapéutico de enfermedades, no estaban hasta ahora disponibles pero sin embargo son muy deseables.

De esta manera, el problema técnico de la presente invención es ajustarse a las necesidades descritas anteriormente.

La solución a este problema técnico se alcanza proporcionando las formas de realización caracterizadas en las reivindicaciones.

Compendio de la invención

La presente invención se basa en el descubrimiento de variaciones nuevas, hasta ahora desconocidas, en la secuencia de nucleótidos del gen CYP2B6 y la distribución de población de estos alelos. Basados en el conocimiento de estas secuencias nuevas se diseñaron pruebas diagnósticas y reactivos para tales pruebas para la detección específica y el genotipado de alelos CYP2B6 en seres humanos, incluyendo alelos homocigotos así como heterocigotos, frecuentes así como raros de los genes CYP2B6. La determinación del estado de los alelos del gen CYP2B6 de seres humanos con tales pruebas es útil para la optimización de terapias con los numerosos sustratos de CYP2B6. También puede ser útil en la determinación de la predisposición individual a varios cánceres comunes producidos por carcinógenos medioambientales.

En una primera forma de realización, la invención proporciona un método de diagnosticar hipersensibilidad a fármacos relacionada con la presencia de una variante molecular del gen CYP2B6 que comprende determinar en una muestra de un sujeto la presencia de un polinucleótido seleccionado del grupo que consiste en:

en donde la presencia de dicho polinucleótido o fragmento del mismo se considera indicativa de dicha hipersensibilidad a fármacos en dicho método.