MÉTODOS PARA EVALUAR ESTADOS PATOLÓGICOS USANDO ARN EXTRACELULAR.

Métodos para evaluar estados patológicos usando ARN extracelular ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La presente invención cubre 12 realizaciones tal como sigue: 1. Un método para detectar, diagnosticar o monitorizar una lesión de un órgano en un ser humano, comprendiendo el método la etapa de detectar cualitativa o cuantitativamente ARN de humano extracelular en un líquido corporal obtenido previamente de dicho ser humano, en el que dicho ARN humano se detecta sometiendo a ensayo para detectar dicho ARN humano o ADNc derivado del mismo, de manera cualitativa o cuantitativa, en el que la lesión de un órgano es lesión traumática o isquémica del cerebro o el corazón. 2. El método según 1, en el que la lesión traumática o isquémica del cerebro o el corazón es un accidente cerebrovascular, infarto de miocardio, isquemia miocárdica, lesión cerebral isquémica, hipoxia del cerebro o traumatismo craneoencefálico. 3. El método según 1 ó 2, en el que el líquido corporal se selecciona de sangre, plasma sanguíneo, orina, líquido cefalorraquídeo o suero. 4. Un método para detectar ARN humano extracelular en sangre, plasma sanguíneo o suero, u otro líquido corporal, todos ellos, sangre, plasma sanguíneo, suero u otro líquido corporal, obtenidos previamente de un ser humano, en el que dicho ARN está asociado con una lesión de un órgano de dicho ser humano, comprendiendo el método las etapas de: a) extraer ARN de sangre, plasma sanguíneo, suero u otro líquido corporal de un ser humano, en el que una parte de dicho ARN extraído comprende un ARN humano extracelular asociado con una lesión de un órgano de dicho ser humano; b) amplificar in vitro o amplificar la señal de una fracción del ARN extraído o ADNc derivado del mismo de manera cuantitativa o cualitativa usando cebadores o sondas específicos para una secuencia de ácido nucleico humana de dicho ARN humano extracelular, o ADNc derivado del mismo, para producir una señal o producto amplificado; c) detectar la señal o el producto amplificado producido de ese modo, en el que la lesión de un órgano es lesión traumática o isquémica del cerebro o el corazón. 5. El método según 4, en el que dicho ARN humano extracelular se deriva del corazón o el cerebro de dicho ser humano. 6. El método según 4 ó 5, mediante el cual se detecta, diagnostica o monitoriza una lesión de un órgano. 7. El método según 4, 5 ó 6, en el que dicho órgano es el corazón o el cerebro del ser humano. 8. El método según cualquiera de 4 a 7, en el que el ARN humano traduce una proteína que tiene un efecto perjudicial sobre las células o los tejidos dentro del ser humano. 9. Un método de detección de ARN humano extracelular obtenido de plasma o suero de un ser humano, estando asociado dicho ARN humano con una lesión de un órgano de dicho ser humano, comprendiendo el método las etapas de: a) extraer ARN de plasma sanguíneo o suero de un ser humano, en el que una parte de dicho ARN comprende un ARN humano extracelular asociado con una lesión de un órgano de dicho ser humano; b) hibridar una parte de dicho ARN humano extracelular asociado con una lesión de un órgano de dicho ser humano, o ADNc derivado del mismo, con un cebador, una sonda o un sustrato sólido, en el que el cebador, la sonda o el sustrato sólido es específico para secuencias de nucleótidos humanas de dicho ARN humano extracelular, o ADNc derivado del mismo; c) detectar el ADNc o ARN hibridado, ES 2 367 280 T3 en el que la lesión de un órgano es una lesión traumática o isquémica del cerebro o el corazón. 10. El método según 4 ó 9, en el que dicho ARN humano es ARNm de troponina T cardiaca, ARNm de troponina I cardiaca, ARNm de cadena pesada de beta-miosina, ARNm del factor de crecimiento de fibroblastos ácido o ARNm de Par-4. 11. El método según 9, en el que dicho ARN humano extracelular se deriva del corazón o el cerebro. 2 ES 2 367 280 T3 12. El método según 4 ó 9, en el que dicha lesión de un órgano es una de un grupo que comprende infarto de miocardio, isquemia miocárdica, insuficiencia cardiaca congestiva, cardiomiopatía, accidente cerebrovascular, lesión cerebral isquémica, estados hipóxicos del cerebro y traumatismo craneoencefálico. Esta descripción ilustra métodos para diagnosticar, detectar, evaluar y monitorizar enfermedades y estados patológicos no neoplásicos en un animal, preferiblemente un ser humano. Dichas enfermedades y estados patológicos incluyen, entre otros, enfermedades y estados patológicos que afectan a órganos corporales específicos y los que afectan a múltiples órganos o sistemas de órganos corporales, y los estados patológicos que están asociados con enfermedad o lesión, o que son predictivos de una enfermedad o que pueden dar como resultado en última instancia una enfermedad. Tal como se expone en el presente documento, la descripción ilustra métodos para detectar ácido ribonucleico (ARN) de mamífero en dicho plasma sanguíneo, suero u otro líquido corporal del animal. Los métodos permiten de ese modo la evaluación de la expresión génica que está asociada con, es el resultado de, o es predictiva de enfermedades o estados patológicos o traumatismo o lesión celular. La descripción también ilustra métodos que permiten que se monitorice la respuesta celular y la recuperación de enfermedades y estados patológicos así como de lesión celular. De ese modo, la descripción ilustra métodos para evaluar y monitorizar la respuesta a terapias específicas para dichos estados patológicos, enfermedades y lesiones. La descripción también ilustra específicamente métodos para evaluar y monitorizar células y tejidos no hematopoyéticos o no hematológicos que están diferenciados de manera terminal. En estos métodos, se detecta ARN extracelular derivado de dichas células y tejidos en un líquido corporal. La descripción también ilustra el diagnóstico, la detección, la evaluación y/o la monitorización de enfermedades y estados patológicos que afectan a tejidos y células que no proliferan, tales como los del corazón, cerebro y músculo. Por tanto, el enfoque es particularmente ventajoso para evaluar enfermedades y estados patológicos del sistema cardiovascular, el sistema nervioso y de los músculos esqueléticos. La descripción ilustra además la detección de células y tejidos no neoplásicos que proliferan de manera normal o son el resultado de una enfermedad o lesión. La descripción ilustra la detección de ARN de mamífero extracelular asociado con una enfermedad no neoplásica que no se transcribe a partir de un sitio frágil o que no contiene secuencias de ácido nucleico virales o bacterianas. Aunque las etiologías de las enfermedades y los estados patológicos no neoplásicos son variadas, el proceso patológico está asociado a menudo de manera característica con la producción o sobreproducción intracelular, o el escape o la liberación, de proteínas específicas de la célula que pueden caracterizar la célula. Tales proteínas pueden estar implicadas en respuestas adaptativas celulares, o pueden ser indicativas de lesión celular, o reflejar la producción de proteínas asociadas con el propio estado patológico. Además, pueden sobreproducirse dentro de una célula, o secretarse desde la célula, o liberarse inapropiadamente de la célula, proteínas normalmente asociadas con el metabolismo de la célula o el tejido. En la práctica clínica, se ha utilizado la detección de proteínas en sangre y otros líquidos corporales en el diagnóstico y la monitorización de la enfermedad. Sin embargo, no todas tales proteínas pueden detectarse en la sangre o los líquidos corporales, a menudo debido a que la proteína o bien no se secreta o libera de la célula, o bien existe en la sangre a niveles por debajo de los límites de detección para un estadio dado de la enfermedad, particularmente en estadios tempranos o subclínicos de la enfermedad. Por tanto, existe una necesidad de nuevos métodos que proporcionen el análisis de la expresión génica celular de manera más sensible. El ácido ribonucleico (ARN) es esencial para producir proteínas celulares, y puede usarse la detección y monitorización de ARN de mamífero para evaluar la expresión génica celular. Además, puesto que el ARN y el ácido desoxirribonucleico (ADN) pueden hibridarse y amplificarse de manera cualitativa o cuantitativa usando métodos de amplificación de ácidos nucleicos, puede realizarse la detección de ARN con alta sensibilidad. Aunque la técnica anterior contenía informes esporádicos que sugerían que podría detectarse ARN en plasma y suero (por ejemplo, Wieczorek et al., 1985 Proc Natl Acad Sci USA 82: 3455-3459; Wieczorek et al., 1987 Cancer Res. 47: 6407-6412; Wieczorek et al., 1989 Schweiz med Wschr 119: 1342-1343; Kamm y Smith, 1972 Clin. Chem. 18: 519-522), hasta hace poco se desconocía si... [Seguir leyendo]

1. Método para detectar, diagnosticar o monitorizar una lesión de un órgano en un ser humano, comprendiendo el método la etapa de detectar cualitativa o cuantitativamente ARN de humano extracelular en un líquido corporal obtenido previamente de dicho ser humano, en el que dicho ARN humano se detecta sometiendo a ensayo para detectar dicho ARN humano o ADNc derivado del mismo, de manera cualitativa o cuantitativa, en el que la lesión de un órgano es lesión traumática o isquémica del cerebro o el corazón. 2. Método según la reivindicación 1, en el que la lesión traumática o isquémica del cerebro o el corazón es un accidente cerebrovascular, infarto de miocardio, isquemia miocárdica, lesión cerebral isquémica, hipoxia del cerebro o traumatismo craneoencefálico. 3. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que el líquido corporal se selecciona de sangre, plasma sanguíneo, orina, líquido cefalorraquídeo o suero. 4. Método para detectar ARN humano extracelular en sangre, plasma sanguíneo o suero, u otro líquido corporal, todos ellos, sangre, plasma sanguíneo, suero u otro líquido corporal, obtenidos previamente de un ser humano, en el que dicho ARN está asociado con una lesión de un órgano de dicho ser humano, comprendiendo el método las etapas de: a) extraer ARN de sangre, plasma sanguíneo, suero u otro líquido corporal de un ser humano, en el que una parte de dicho ARN extraído comprende un ARN humano extracelular asociado con una lesión de un órgano de dicho ser humano; b) amplificar in vitro o amplificar la señal de una fracción del ARN extraído o ADNc derivado del mismo de manera cuantitativa o cualitativa usando cebadores o sondas específicos para una secuencia de ácido nucleico humana de dicho ARN humano extracelular, o ADNc derivado del mismo, para producir una señal o producto amplificado; c) detectar la señal o el producto amplificado producido de ese modo, en el que la lesión de un órgano es lesión traumática o isquémica del cerebro o el corazón. 5. Método según la reivindicación 4, en el que dicho ARN humano extracelular se deriva del corazón o el cerebro de dicho ser humano. 6. Método según la reivindicación 4 ó 5, mediante el cual se detecta, diagnostica o monitoriza una lesión de un órgano. 7. Método según las reivindicaciones 4 a 6, en el que dicho órgano es el corazón o el cerebro del ser humano. 8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, en el que el ARN humano traduce una proteína que tiene un efecto perjudicial sobre las células o los tejidos dentro del ser humano. 9. Método de detección de ARN humano extracelular obtenido de plasma o suero de un ser humano, estando asociado dicho ARN humano con una lesión de un órgano de dicho ser humano, comprendiendo el método las etapas de: a) extraer ARN de plasma sanguíneo o suero de un ser humano, en el que una parte de dicho ARN comprende un ARN humano extracelular asociado con una lesión de un órgano de dicho ser humano; b) hibridar una parte de dicho ARN humano extracelular asociado con una lesión de un órgano de dicho ser humano, o ADNc derivado del mismo, con un cebador, una sonda o un sustrato sólido, en el que el cebador, la sonda o el sustrato sólido es específico para secuencias de nucleótidos humanas de dicho ARN humano extracelular, o ADNc derivado del mismo; c) detectar el ADNc o ARN hibridado, ES 2 367 280 T3 en el que la lesión de un órgano es una lesión traumática o isquémica del cerebro o el corazón. 10. Método según la reivindicación 4 ó 9, en el que dicho ARN humano es ARNm de troponina T cardiaca, ARNm de troponina I cardiaca, ARNm de cadena pesada de beta-miosina, ARNm del factor de crecimiento de fibroblastos ácido o ARNm de Par-4. 11. Método según la reivindicación 9, en el que dicho ARN humano extracelular se deriva del corazón o el cerebro. 12. Método según la reivindicación 4 ó 9, en el que dicha lesión de un órgano es una de un grupo que comprende infarto de miocardio, isquemia miocárdica, insuficiencia cardiaca congestiva, cardiomiopatía, accidente cerebrovascular, lesión cerebral isquémica, estados hipóxicos del cerebro y traumatismo craneoencefálico.