MODULADORES DEL PESO CORPORAL, ÁCIDOS NUCLEICOS Y PROTEÍNAS CORRESPONDIENTES, Y USOS DIAGNÓSTICOS Y TERAPÉUTICOS DE LOS MISMOS.

LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE GENERALMENTE AL CONTROL DEL PESO CORPORAL DE ANIMALES INCLUIDOS MAMIFEROS Y HUMANOS,

Y EN CONCRETO A MATERIALES IDENTIFICADOS AQUI COMO MODULADORES DE PESO, Y A LOS USOS DE DIAGNOSTICO Y TERAPEUTICOS PARA LOS QUE SE PUEDEN DISPONER DICHOS MODULADORES. EN SU ASPECTO MAS AMPLIO, LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A LA EXTRACCION Y DESCUBRIMIENTO DE SECUENCIAS DE NUCLEOTIDO, Y PROTEINAS EXPRESADAS DE FORMA PUTATIVA POR DICHOS NUCLEOTIDOS O VARIACIONES DEGENERADAS DE LOS MISMOS, QUE MUESTRAN LA CAPACIDAD DE PARTICIPAR EN EL CONTROL DEL PESO CORPORAL DE MAMIFEROS. LAS SECUENCIAS DE NUCLEOTIDO EN CUESTION REPRESENTAN LOS GENES CORRESPONDIENTES AL GEN OB DE MURINA Y HUMANO, QUE SE DA POR SENTADO QUE JUEGAN UN PAPEL CRITICO EN LA REGULACION DEL PESO Y ADIPOSIDAD CORPORAL. DATOS PRELIMINARES, PRESENTADOS AQUI, SUGIEREN QUE EL PRODUCTO POLIPEPTIDO DEL GEN EN CUESTION FUNCIONA COMO UNA HORMONA. LA PRESENTE INVENCION PROPORCIONA ADEMAS MOLECULAS DE ACIDO NUCLEICO PARA USOCOMO SONDAS MOLECULARES, O COMO INICIADORES PARA AMPLIFICACION DE REACCION DE CADENA DE POLIMERASA (PCR), ES DECIR, OLIGONUCLEOTIDOS SINTETICOS O NATURALES. EN OTROS ASPECTOS, LA PRESENTE INVENCION PROPORCIONA UN VECTOR DE CLONACION, EL CUAL COMPRENDE LOS ACIDOS NUCLEICOS DE LA INVENCION; Y UNA BACTERIA, INSECTO O UN VECTOR DE EXPRESION DE MAMIFERO, QUE COMPRENDE LAS MOLECULAS DE ACIDO NUCLEICO DE LA INVENCION, OPERATIVAMENTE ASOCIADAS A UNA SECUENCIA DE CONTROL DE EXPRESION. EN CONSECUENCIA, LA INVENCION ADEMAS SE REFIERE A UNA CELULA BACTERIANA O DE MAMIFERO TRANSFERIDA O TRANSFORMADA CON UN VECTOR DE EXPRESION ADECUADO, Y CORRESPONDIENTEMENTE, AL USO DE LAS CONSTRUCCIONES ARRIBA MENCIONADAS EN LA PREPARACION DE LOS MODULADORES DE LA INVENCION. TAMBIEN SE PROPORCIONAN ANTICUERPOS PARA EL POLIPEPTIDO OB. ADEMAS, SE PROPORCIONA UN METODO PARA MODULAR EL PESO CORPORAL DE UN MAMIFERO. EN EJEMPLOS ESPECIFICOS, SE PROPORCIONAN GENES QUE CODIFICAN DOS ISOFORMAS TANTO DE POLIPEPTIDOS OB DE MURINA COMO DE HUMANO

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US1995/010479.

Solicitante: THE ROCKEFELLER UNIVERSITY.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1230 YORK AVENUE NEW YORK, NEW YORK 10021-6399 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: FRIEDMAN,JEFFREY,M, PROENCA,RICARDO, ZHANG,Yiying, MAFFEI,Margherita, HALAAS,Jeffrey,L, GAJIWALA,Ketan, BURLEY,Stephen,K.

Fecha de Publicación: 17 de Febrero de 2012.

Fecha Solicitud PCT: 17 de Agosto de 1995.

Clasificación Internacional de Patentes:

A61K8/64 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 8/00 Cosméticos o preparaciones similares para el aseo. › Proteínas; Péptidos; Sus derivados o sus productos de degradación.
A61Q19/06 A61 […] › A61Q USO ESPECIFICO DE COSMETICOS O DE PREPARACIONES SIMILARES PARA EL ASEO. › A61Q 19/00 Preparaciones para el cuidado de la piel. › para eliminar la celulitis.
C07K14/575P
C07K16/18 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales animales o humanos.
C12Q1/68M6

Clasificación PCT:

A61K8/64 A61K 8/00 […] › Proteínas; Péptidos; Sus derivados o sus productos de degradación.
A61Q19/06 A61Q 19/00 […] › para eliminar la celulitis.
C07K14/575 C07K […] › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Hormonas.
C07K16/18 C07K 16/00 […] › contra materiales animales o humanos.
C12N1/19 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
C12N1/21 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
C12N15/12 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican proteínas animales.
C12N15/16 C12N 15/00 […] › Hormonas.
C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

Clasificación antigua:

A61K38/17 A61K […] › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › que provienen de animales; que provienen de humanos.
A61K7/00
C07K14/47 C07K 14/00 […] › de mamíferos.
C07K16/18 C07K 16/00 […] › contra materiales animales o humanos.
C12N15/12 C12N 15/00 […] › Genes que codifican proteínas animales.
C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
C12N5/16 C12N 5/00 […] › Células animales.
C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.
G01N33/53 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Mónaco, Irlanda.

PDF original: ES-2108663_T1.pdf

Fragmento de la descripción:

Moduladores del peso corporal, ácidos nucleicos y proteínas correspondientes, y usos diagnósticos y terapéuticos de los mismos. CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere en general al control de peso corporal de mamíferos, incluyendo animales y seres humanos y, más particularmente, a materiales identificados en el presente documento como moduladores de peso, y a los usos en diagnóstico y terapéuticos a los que pueden aplicarse tales moduladores. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La obesidad, definida como un exceso de grasa de cuerpo con respecto a la masa corporal magra, está asociada con morbideces psicológicas y médicas importantes, incluyendo esta última hipertensión, niveles elevados de lípidos en la sangre y diabetes mellitus tipo II, no dependiente de insulina (NIDDM). Existen 6-10 millones de individuos con NIDDM en los Estados Unidos, lo que incluye el 18% de la población de 65 años de edad [Harris et al., Int. J. Obes., 11:275-283 (1987)]. Aproximadamente el 45% de los varones y el 70% de las mujeres con NIDDM son obesos y su diabetes se mejora sustancialmente o se elimina mediante la reducción del peso [Harris, Diabetes Care, 14(3): 639- 648 (1991)]. Tal como se describe más adelante, tanto la obesidad como la NIDDM son fuertemente hereditarias, si bien no se ha identificado los genes que predisponen a ello. Las bases genéticas moleculares de estos trastornos metabólicamente relacionados es un problema importante, que no se entiende bien. La asimilación, el almacenamiento y la utilización de la energía nutriente constituyen un sistema homeostático complejo, central para la supervivencia de los metazoarios. Entre los mamíferos terrestres, el almacenamiento en el tejido adiposo de grandes cantidades de combustible metabólico, como triglicéridos, es crucial para los periodos de supervivencia en los que está privado de alimento. La necesidad de mantener un nivel fijo de almacenamientos energéticos sin alteraciones continuas en el tamaño y la forma del organismo, requiere la obtención de un equilibrio entre la ingestión de energía y su gasto. Sin embargo, los mecanismos moleculares que regulan el equilibrio energético siguen sin ser dilucidados. El aislamiento de las moléculas que transducen la información nutricional y controlan el equilibrio energético será crítico para la comprensión de la regulación del peso corporal en la salud y en la enfermedad. El nivel de adiposidad de un individuo, en gran medida, se determina genéticamente. El examen de los regímenes de concordancia de peso corporal y adiposidad entre gemelos monocigóticos y dicigóticos, o adoptados y sus padres biológicos, ha sugerido que la posibilidad de heredad la obesidad (0,4- 0,8) supera la de muchas otras tendencias que se cree comúnmente que tienen un componente genético sustancial, tales como la esquizofrenia, el alcoholismo y la ateroesclerosis [Stunkard et al., N. Engl. J. Med., 322:1483-1487 (1990)]. También se ha informado de similitudes familiares en regímenes de gasto energético [Bogardus et al. Diabetes, 35:1-5 (1986)]. El análisis genético en poblaciones delimitadas geográficamente ha sugerido que un número relativamente pequeño de genes puede ser responsable del 30 al 50% de la variación de la composición del cuerpo [Moll et al., Am. J. Hum. Genet., 49:1243-1255 (1991)]. Sin embargo, ninguno de los genes responsable de la obesidad en la población general ha sido mapeado genéticamente para definir una ubicación cromosómica. Los modelos de obesidad en roedores incluyen siete mutaciones de un solo gen aparentemente. Las mutaciones de obesidad en ratones, estudiadas más intensamente, son los genes ob (obesos) y db (diabetes). Cuando están presentes en el mismo antecedente de cepa genética, ob y db dan como resultado genotipos metabólicos y de conducta indistinguibles, que sugiere que esos genes pueden funcionar en la misma trayectoria fisiológica [Coleman et al., Diabetologia, 14:141-148 (1978)]. Los homocigotos de ratones ya sea para cualquiera de las mutaciones son hiperfágicos e hipometabólicos, lo que conduce a un genotipo obeso que es notable a un mes de edad. El peso de esos animales tiende a estabilizarse en 60-70 gramos (en comparación con 30-35 gramos en los ratones de control). Los animales ob y db manifiestan una miriada de otros cambios hormonales y metabólicos que han hecho difícil identificar el defecto primario atribuible a la mutación [Bray et al., Am. J. Clin. Nutr., 50:891-902 (1989)]. Cada uno de los modelos de obesidad en roedores va acompañado por alteraciones en el metabolismo de los carbohidratos, que se parece a los de la diabetes de tipo II en el hombre. En muchos casos, la severidad de la diabetes depende parcialmente del antecedente racial del ratón [Leiter, Endocrinology, 124:912-922 (1989)]. Tanto para ob como para db los ratones C57BL/K congénicos desarrollan una diabetes severa con necrosis final de células y atrofia de la isleta, lo que da como resultado una insulinopenia relativa. Inversamente, los ratones ob y db C57BL/6J congénicos desarrollan una diabetes transitoria, resistente a la insulina, que se compensa eventualmente por una hipertrofia de las células , que se parece a la diabetes de tipo II humana. El fenotipo de los ratones ob y db se parece a la obesidad humana en formas diferentes al desarrollo de la diabetes; los ratones mutantes comen más y gastan menos energía que los controles magros (al igual que los seres humanos obesos). Este fenotipo también es bastante similar al que se ve en los animales con lesiones del hipotálamo ventromedial, lo que sugiere que ambas mutaciones pueden interferir con la capacidad de integrar apropiadamente o responder apropiadamente a la información nutricional dentro del sistema nervioso central. El apoyo de esta hipótesis viene de los resultados de experimentos de parabiosis [Coleman, Diabetologia, 9:294-298 (1973)] que 2 sugieren que los ratones ob son deficientes en un factor de saciedad circulante y que los ratones db son resistentes a los efectos del factor ob (posiblemente debido a un defecto en el receptor de ob). Esos experimentos han conducido a la conclusión de que la obesidad en estos ratones mutantes puede ser el resultado de diferentes defectos en una hélice y/o un centro integrante aferentes del mecanismo de realimentación postulado, que controla la composición del cuerpo. Usando marcadores moleculares y genéticos clásicos, se han mapeado los genes ob y db hasta el cromosoma 6 próximo y el cromosoma medio 4, respectivamente [Bahary et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 87:8642-8646 (1990); Friedman et al., Genomics, 11:1054-1062 (1991)]. En ambos casos, el mapa de mutaciones a las regiones del genoma de ratón que son singénicas con las humanas, sugieren que, si hay homólogos humanos de ob y db, probablemente tengan el mismo mapa, respectivamente, que los cromosomas humanos 7q y 1p. Los defectos en el gen db pueden dar como resultado obesidad en otras especies de mamíferos: en cruzas genéticas entre ratas fa/fa de Zucker y ratas +/+ Brown Norway, la mutación fa (cromosoma de rata 5) se flanquea por los mismos sitios que franquean db en el ratón [Truett et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:7806-7809 (1991)]. Debido a que hay miles de factores que parecen impactar el peso corporal, no ha sido posible predecir cuáles factores y, más particularmente, cuáles mecanismos homeostáticos son primariamente determinantes para el peso corporal. Por tanto, el problema principal que originó la presente invención es proveer moduladores del peso corporal que permitan controlar la adiposidad y el contenido de grasa de los mamíferos. SUMARIO DE LA INVENCIÓN Según la presente invención, el problema de controlar la adiposidad y el contenido en grasa de los animales, particularmente de los mamíferos, se ha solucionado mediante la provisión de polipéptidos de obesidad (OB) que pueden modular el peso corporal, seleccionados del grupo que consiste en: (a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NOS: 2, 4, 5 ó 6; (b) Un fragmento biológicamente activo del polipéptido de (a), en el que ficho fragmento de biológicamente activo modula el peso corporal de un animal. La presente invención se refiere además a moléculas de ácido nucleico que codifican para un polipéptido OB, tal como se definió anteriormemente, así como vectores que comprenden una respectiva molécula de ADN y hospedadores unicelulares transformados o transfectados con una respectiva molécula de ADN. En un aspecto adicional la presente invención se refiere a métodos para preparar un polipéptido OB tal como se definió anteriormente que puede modular el peso corporal, comprendiendo el método: (a) cultivar una célula que comprende una secuencia de ADN que codifica para un polipéptido OB de la presente invención en condiciones que proporcionan la... [Seguir leyendo]

Reivindicaciones:

1. Un polipéptido de obesidad (OB) que tiene aproximadamente 145 a aproximadamente 167 aminoácidos, capaz de modular el peso corporal en un animal, o variantes alélicas o análogos, incluidos los fragmentos, del mismo que tienen la misma actividad biológica.

2. Un polipéptido OB de la reivindicación 1, consistente en la secuencia de aminoácidos de las SEC ID Nº: 2, 4, 5 ó 6, o variantes alélicas o análogos, incluidos los fragmentos, del mismo.

3. Un fragmento inmunogénico de un polipéptido OB según la reivindicación 1 ó 2.

4. Un fragmento inmunogénico de un polipéptido OB seleccionado entre el grupo consistente en:

Val - Pro - Ile - Gln - Lys - Val - Gln - Asp - Asp - Thr - Lys - Thr - Leu - Ile - Lys - Thr (SEC ID Nº: 18),

Leu - His - Pro - Ile - Leu - Ser - Leu - Ser - Lys - Met - Asp - Gln - Thr - Leu - Ala (SEC ID Nº: 19),

Ser - Lys - Ser - Cys - Ser - Leu - Pro - Gln - Thr - Ser- Gly - Leu - Gln - Lys - Pro - Glu - Ser - Leu - Asp (SEC ID Nº: 20) y

Ser - Arg - Leu - Gln - Gly - Ser - Leu - Gln - Asp - Ile- Leu - Gln - Gln - Leu - Asp - Val - Ser - Pro - Glu - Cys (SEC ID Nº: 21).

5. Un análogo de polipéptido OB humano según la reivindicación 2, donde uno o más aminoácidos seleccionados entre el grupo consistente en los aminoácidos 53, 56, 71, 85, 89, 92, 95, 98, 110, 118, 121, 122, 126, 127, 128, 129, 132, 139, 157, 159, 163, 166 (según la numeración de la SEC ID Nº: 4) están substituidos con otro aminoácido.

6. Un análogo de polipéptido OB humano según la reivindicación 5, donde la substitución es con el aminoácido divergente del polipéptido OB de ratón según se indica en la SEC ID Nº: 2.

7. Un análogo de polipéptido OB humano según la reivindicación 5, donde la substitución es con una alanina.

8. Un análogo de polipéptido OB humano según la reivindicación 5, seleccionado entre el grupo consistente en polipéptidos en los que:

(a) el residuo de serina de la posición 53 está substituido con glicina, alanina, valina, cisteína, metionina o treonina;

(b) el residuo de serina de la posición 98 está subtituido con glicina, alanina, valina, cisteína, metionina o treonina, y

(c) el residuo de arginina de la posición número 92 está substituido con asparraguina, lisina, histidina, glutamina, ácido glutámico, ácido aspártico, serina, treonina, metionina o cisteína.

9. Un análogo de polipéptido OB según la reivindicación 2, que tiene un 83 por ciento o más de homología en la secuencia de aminoácidos con respecto a la secuencia de aminoácidos del polipéptido OB humano indicada en las SEC ID Nº: 2, 4, 5 ó 6.

10. Un análogo de polipéptido OB humano según la reivindicación 2, seleccionado entre el grupo consistente en polipéptido en los que:

(a) uno o más residuos de ácido aspártico están substituidos con ácido glutámico,

(b) uno o más residuos de isoleucina están substituidos con leucina,

(d) uno o más residuos de arginina están substituidos con histidina,

(e) uno o más residuos de tirosina o fenilalanina están substituidos con triptófano,

(f) uno o más de los residuos 121 a 128 (según la numeración de la SEC ID Nº: 4) están substituidos con glicina o alanina y

(g) uno o más residuos en las posiciones 54 a 60 ó 118 a 166 (según la numeración de la SEC ID Nº: 4) están substituidos con lisina, ácido glutámico, cisteína o prolina.

11. Un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 5, 6 ó 9, seleccionado entre el grupo consistente en los polipéptidos:

(a) en los que se han eliminado los residuos 1 a 21 y

(b) polipéptidos de la subparte (a) que tienen una metionina en la posición 21 o que tienen una secuencia glicina - serina - histidina - metionina SEC ID Nº: 38 en las posiciones 18 a 21, o que tienen una secuencia metionina - glicina - serina - serina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina- histidina - serina - serina - glicina - leucina - valina - prolina - arginina - glicina - serina - histidina - metionina (SEC ID Nº: 98) en las posiciones 1 a 21.

12. Un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 5, 6 ó 9 seleccionado entre el grupo consistente en polipéptidos:

(a) que tienen eliminados los residuos 1 a 21 y

(b) polipéptidos de la subparte (a) que tienen una secuencia leucina-ácido glutámico-lisina-arginina-ácido glutámico - alanina - ácido glútamico- alanina (SEC ID Nº: 26) en las posiciones 14 a 21, o que tienen una secuencia ácido glutámico- alanina - ácido glutámico - alanina (SEC ID Nº: 27) en las posiciones 18 a 21, o que tienen una secuencia leucina - ácido glutámico - lisina - arginina (SEC ID Nº: 28) en las posiciones 18 a 21, o que tienen una secuencia metionina - glicina - serina - serina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - serina - serina - glicina - leucina - valina- prolina - arginina - glicina - serina - prolina (SEC ID Nº: 99) en las posiciones 2 a 21, o que tienen una secuencia glicina-serina-prolina en las posiciones 18 a 21.

13. Un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 7, 8, 9 ó 10, seleccionado entre el grupo consistente en polipéptidos:

(a) que tienen eliminados los residuos 1 a 21 y

(b) polipéptidos de la subparte (a) que tienen una metionina en la posición 21, o que tienen una secuencia glicina-serina-histidina-metionina (SEC ID Nº: 38) en las posiciones 18 a 21, o que tienen una secuencia metionina - glicina - serina- serina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - serina - serina - glicina - leucina - valina- prolina - arginina - glicina - serina - histidina - metionina (SEC ID Nº: 98) en las posiciones 1 a 21, o que tienen una secuencia leucina-ácido glutámico-lisina-arginina-ácido glutámico-alanina-ácido glutámico-alanina (SEC ID Nº: 26) en las posiciones 14 a 21, o que tienen una secuencia ácido glutámico-alanina-acido glutámico-alanina (SEC ID Nº: 27) en las posiciones 18 a 21, o que tienen una secuencia leucina-ácido glutámico-lisina-arginina (SEC ID Nº: 28) en las posiciones 18 a 21, o que tienen una secuencia metionina - glicina - serina - se-rina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - serina - serina - glicina - leucina - valina- prolina - arginina - glicina - serina - prolina (SEC ID Nº: 99) en las posiciones 2 a 21, ó que tienen una secuencia glicina-serina-prolina en las posiciones 18 a 21.

14. Un análogo truncado de polipéptido OB humano según la reivindicación 2, seleccionado entre el grupo (según la numeración de la SEC ID Nº: 4) consistente en polipéptidos en los que:

(a) se han eliminado uno o más residuos en las posiciones 121 a 128,

(b) se han eliminado los residuos 1-116,

(d) se han eliminado los residuos 1-60 y 117 a 167,

(e) se han eliminado los residuos 1-60,

(f) se han eliminado los residuos 1-53,

(g) un análogo de la subparte (a) en el que se han eliminado los residuos 1-21 y

(h) un análogo de la subparte (a) a (g) que tiene un aminoácido o secuencia de aminoácidos N-terminal seleccionados entre el grupo consistente en:

(1) metionina,

(2) una secuencia glicina-serina-histidina-metionina (SEC ID Nº: 38),

(3) una secuencia metionina - glicina - serina - serina - histidina - histidina - histidina - histidina - his-tidina - histidina - serina - serina - glicina - leucina - va-lina - prolina - arginina - glicina - serina - histidina - metionina (SEC ID Nº: 98),

(4) una secuencia leucina-ácido glutámico-lisina-arginina-ácido glutámico-alanina (SEC ID Nº: 26),

(5) una secuencia ácido leucina-ácido glutámico-lisina-arginina (SEC ID Nº: 27),

(6) una secuencia leucina-ácido glutámico-lisina-arginina (SEC ID Nº: 28),

(7) una secuencia metionina - glicina - serina - serina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - serina - serina - glicina - leucina- valina - prolina - arginina - glicina - serina - prolina (SEC ID Nº: 99) y

(8) una secuencia glicina-serina-prolina.

15. Un polipéptido OB recombinante según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14.

16. Un polipéptido OB químicamente sintetizado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14.

17. Un derivado de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 que tiene uno o más restos químicos unidos al mismo.

18. Un derivado de la reivindicación 17, donde el resto químico es un polímero hidrosoluble.

19. Un derivado de la reivindicación 18, donde el polímero hidrosoluble es polietilenglicol.

20. Un derivado de la reivindicación 19, que está mono-, di-, tri- o tetrapegilado.

21. Un derivado de la reivindicación 20, que es monopegilado N-terminal.

22. Un derivado de la reivindicación 21, que es un polipéptido OB consistente en los residuos de aminoácido 22 a 167 de la SEC ID Nº: 4 o los residuos 22 a 166 de la SEC ID Nº: 6.

23. Un derivado de la reivindicación 21, que es un polipéptido OB consistente en la secuencia de aminoácidos de los residuos 22 a 167 de la SEC ID Nº: 4 o de los residuos 22 a 166 de la SEC ID Nº: 6 y que tiene una metionina en la posición 21.

24. Una molécula de ácido nucleico aislada codificante de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, 9 ó 11.

25. Una molécula de ácido nucleico aislada codificante de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 7, 8, 10, 12, 13 ó 14.

26. Una molécula de ADN para uso en asegurar la expresión de un polipéptido OB que tiene la actividad biológica de modular el peso corporal en un mamífero, siendo seleccionado el ADN entre el grupo consistente en:

(a) las moléculas de ADN indicadas en las SEC ID Nº: 1 y 3 o fragmentos de las mismas,

(b) moléculas de ADN que se hibridan con las moléculas de ADN definidas en (a) o fragmentos hibridables de las mismas y

(c) moléculas de ADN que codifican en la expresión para la secuencia de aminoácidos codificada por cualquiera de las moléculas de ADN anteriores.

27. Una molécula de ADN según la reivindicación 26, que es la molécula de ADN genómico humano de las SEC ID Nº: 22 y 24.

28. Una molécula de ADN según la reivindicación 24, que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo consistente en las secuencia de aminoácidos indicadas en:

(a) SEC ID Nº: 2,

(b) aminoácidos 22 a 167 de la SEC ID Nº: 2,

(d) aminoácidos 22 a 167 de la SEC ID Nº: 4,

(e) SEC ID Nº: 5,

(f) aminoácidos 22 a 166 de la SEC ID Nº: 5,

(g) SEC ID Nº: 6,

(h) aminoácidos 22 a 166 de la SEC ID Nº: 6 y

(i) las secuencias de aminoácidos de la subparte (b), (d), (f) o (h), que tienen un aminoácido o secuencia de aminoácidos N-terminal seleccionados entre el grupo consistente en:

(1) metionina,

(2) una secuencia glicina-serina-histidina-metionina (SEC ID Nº: 38) y

(3) una secuencia metionina - glicina - serina - serina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - serina - serina - glicina - leucina- valina - prolina - arginina - glicina - serina - histidina - metionina (SEC ID Nº: 98).

29. Una molécula de ADN según la reivindicación 28, que codifica un aminoácido de la subparte (b), (d), (f) o (h), que tiene una secuencia de aminoácidos N-terminal seleccionada entre el grupo consistente en:

(1) una secuencia leucina-ácido glutámico-lisina-arginina-ácido glutámico-alanina-ácido glutámico-alanina (SEC ID Nº: 26),

(2) una secuencia ácido glutámico-alanina-ácido glutámico-alanina (SEC ID Nº: 27),

(3) una secuencia leucina-ácido glutámico-lisina-arginina (SEC ID Nº: 28),

(4) una secuencia metionina - glicina - serina - serina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - histidina - serina - serina - glicina - leucina- valina - prolina - arginina - glicina - serina - prolina (SEC ID Nº 99) y

(5) una secuencia glicina-serina-prolina.

30. Una molécula de ADN según la reivindicación 24, que consiste en la secuencia indicada como la secuencia codificante de proteína de la SEC ID Nº: 3.

31. Una molécula de ADN según la reivindicación 24, que consiste en la secuencia indicada como la secuencia codificante de los aminoácidos 22 a 167 de la SEC ID Nº: 3.

32. Una molécula de ácido nucleico marcado de manera detectable hibridable con una molécula de ADN según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 31.

33. Un ácido nucleico hibridable con una región no codificante de un ácido nucleico OB, cuya región no codificante es seleccionada entre el grupo consistente en un intrón, una región no codificante 5' y una región no codificante 3'.

34. Un cebador oligonucleotídico para amplificar ADN genómico humano codificante de un polipéptido OB.

35. Un oligonucleótido según la reivindicación 32, que es seleccionado entre el grupo consistente en:

HOB 1gF 5'-CCCAAGAAGCCCATCCTG-3'

(SEC ID Nº: 29),

HOB 1gR 5'-GACTATCTGGGTCCAGTGCC-3'

(SEC ID Nº: 30),

HOB 2gF 5'-CCACATGCTGAGCACTTGTT-3'

(SEC ID Nº: 31) y

HOB 2gR 5'-CTTCAATCCTGGAGATACCTGG-3'

(SEC ID Nº: 32).

36. Un vector que contiene una molécula de ADN según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 31.

37. Un vector de expresión que contiene una molécula de ADN según cualquiera de las reivindicaciones 24, 26, 30 ó 31, operativamente asociada con una secuencia de control de la expresión.

38. Un vector de expresión que contiene una molécula de ADN según la reivindicación 27 ó 29 operativamente asociada con una secuencia de control de la expresión.

39. Un vector de expresión que contiene una molécula de ADN según la reivindicación 25 operativamente asociada con una secuencia de control de la expresión.

40. Un huésped unicelular transformado o transfectado con una molécula de ADN de la reivindicación 24 ó 25 o un vector de expresión de cualquiera de las reivindicaciones 36 a 39.

41. Un huésped unicelular según la reivindicación 40, donde el huésped unicelular es seleccionado entre el grupo consistente en bacterias, levaduras, células de mamífero, células vegetables, células de insectos y células humanas en cultivo de tejidos.

42. El huésped unicelular de la reivindicación 40, donde el huésped unicelular es seleccionado entre el grupo consistente en células de E. coli, Pseudomonas, Bacillus, Streptomyces, levaduras, CHO, R1.1, B-W, LM, COS 1, COS 7, BSC1, BSC40, BMT10 y Sf9.

43. Un huésped unicelular según la reivindicación 40, donde el huésped unicelular es un huésped de levadura seleccionado entre el grupo consistente en Saccharomyces, Pichia, Candida, Hansenula y Torulopsis.

44. Una célula de mamífero que contiene una secuencia de ADN codificante de un polipéptido OB y modificada in vitro para permitir una mayor expresión de polipéptido OB por medio de un evento recombinante homólogo, consistente en insertar una secuencia reguladora de la expresión en proximidad funcional con la secuencia codificante del polipéptido OB.

45. Una célula según la reivindicación 44, donde la secuencia reguladora de la expresión es una secuencia reguladora de la expresión de un polipéptido OB y el evento recombinante homólogo substituye a una secuencia reguladora de la expresión de polipéptido OB mutante.

46. Una célula según la reivindicación 45, donde el inserto de secuencia reguladora de la expresión no es una secuencia reguladora de polipéptido OB.

47. Un método para preparar un polipéptido OB consistente en:

(a) cultivar una célula según cualquiera de las reivindicaciones 40 a 46 en condiciones que permitan la expresión del polipéptido OB y

(b) recuperar el polipéptido OB expresado.

48. El método según la reivindicación 47, donde la célula es una bacteria o una levadura.

49. El método según la reivindicación 47 ó 48, que además consiste en:

(d) purificar el polipéptido OB por filtración por gel.

50. El método según la reivindicación 49, que además consiste, después de la etapa (c) y antes de la etapa (d), en cromatografiar el polipéptido OB en una columna de fuerte intercambio catiónico.

51. Un anticuerpo específico para un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido mediante el método de las reivindicaciones 47 a 50.

52. Un anticuerpo según la reivindicación 51, que es un anticuerpo monoclonal o policlonal.

53. Un anticuerpo según la reivindicación 52 marcado con un marcaje detectable.

54. Una línea celular inmortal que produce un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 52.

55. Un método para preparar un anticuerpo específico para un polipéptido OB, que consiste en:

(a) conjugar un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido por el método de las reivindicaciones 47 a 50 a una proteína transportadora,

(b) inmunizar a un animal hospedador con el conjugado fragmento de polipéptido OB-proteína transportadora de la etapa (a) mezclado con adyuvante y

56. Un método para medir la presencia de un polipéptido OB en una muestra, consistente en:

(a) poner en contacto una muestra sospechosa de contener un polipéptido OB con un anticuerpo que se una específicamente al polipéptido OB en condiciones que permitan la formación de complejos de reacción consistentes en el anticuerpo y el polipéptido OB y

(b) detectar la formación de complejos de reacción consistentes en el anticuerpo y el polipéptido OB en la muestra,

donde la detección de la formación de complejos de reacción indica la presencia de polipéptido OB en la muestra.

57. El método de la reivindicación 56, donde el anticuerpo se une a un soporte de fase sólida.

58. Un método in vitro para evaluar el nivel de polipéptido OB en una muestra biológica, que consiste en:

(a) detectar la formación de complejos de reacción en una muestra biológica según el método de la reivindicación 56 ó 57 y

(b) evaluar la cantidad de complejos de reacción formados, cuya cantidad de complejos de reacción corresponde al nivel de polipéptido OB en la muestra biológica.

59. Un método in vitro para detectar o diagnosticar la presencia de una enfermedad asociada a niveles elevados o disminuidos de polipéptido OB en un sujeto mamífero, consistente en:

(a) evaluar el nivel del polipéptido OB en una muestra biológica de un sujeto mamífero según la reivindicación 58 y

(b) comparar el nivel detectado en la etapa (a) con un nivel de polipéptido OB presente en sujetos normales o en el sujeto en un tiempo anterior,

donde el aumento en el nivel de polipéptido OB en comparación con los niveles normales indica una enfermedad asociada a elevados niveles de polipéptido OB y un reducido nivel de polipéptido OB en comparación con los niveles normales indica una enfermedad asociada a niveles reducidos de polipéptido OB.

60. Un método in vitro para monitorizar un tratamiento terapéutico de una enfermedad asociada a niveles aumentados o disminuidos de polipéptido OB en un sujeto mamímero, consistente en evaluar los niveles de polipéptido OB en una serie de muestras biológicas obtenidas en puntos de tiempo diferentes de un sujeto mamífero que experimenta un tratamiento terapéutico para una enfermedad asociada a niveles elevados o reducidos de polipéptido OB según el método de la reivindicación 58.

61. Una composición farmaceútica consistente en un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido por el procedimiento de las reivindicaciones 47 a 50 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

62. Una composición farmacéutica de la reivindicación 61 para reducir el peso corporal de un animal.

63. Una composición farmacéutica para aumentar el peso corporal de un animal, consistente en un antagonista de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido por el procedimiento de las reivindicaciones 47 a 50 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

64. La composición farmacéutica de la reivindicación 63, donde el antagonista es seleccionado entre el grupo consistente en un anticuerpo que se une al, y neutraliza la actividad del, polipéptido OB, un fragmento del polipéptido OB que se une, pero sin activarlo, al receptor del polipéptido OB y un antagonista de pequeña molécula del polipéptido OB.

65. Una composición cosmética mejoradora del aspecto corporal para reducir el peso corporal de un individuo, consistente en un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido mediante el procedimiento de las reivindicaciones 47 a 50 y un vehículo aceptable.

66. Una composición cosmética mejoradora del aspecto corporal para aumentar el peso corporal de un individuo, consistente en un antagonista de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido por el procedimiento de las reivindicaciones 47 a 50 y un vehículo aceptable.

67. Una composición cosmética según la reivindicación 66, donde el antagonista es seleccionado entre el grupo consistente en un anticuerpo que se une al, y neutraliza la actividad del, polipéptido OB, un fragmento del polipéptido OB que se une, pero sin activarlo, al receptor del polipéptido OB y un antagonista de pequeña molécula del polipéptido OB.

68. Un procedimiento cosmético para mejorar el aspecto corporal de un individuo, donde se administra una composición cosmética según cualquiera de las reivindicaciones 64 a 67 al individuo en una cantidad de dosis suficiente para modular el peso corporal del individuo a un nivel deseado.

69. El uso de una molécula de ácido nucleico antisentido hibridable a un ácido nucleico codificante de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 9 para la fabricación de un medicamento para modificar el peso corporal de un mamífero.

70. El uso de una molécula de ácido nucleico codificante de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido por el procedimiento de las reivindicaciones 47 a 50 para la fabricación de un medicamento de terapia génica para modificar el peso corporal de un animal.

71. El uso de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido por el método de las reivindicaciones 47 a 50 para la fabricación de un medicamento para modificación del peso corporal de un animal.

72. El uso de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido por el método de las reivindicaciones 47 a 50 para la fabricación de un medicamento para modificación del peso corporal de un mamífero en el tratamiento de una alteración seleccionada entre el grupo consistente en diabetes, presión sanguínea alta y colesterol elevado.

73. El uso de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido por el método de las reivindicaciones 47 a 50 para la fabricación de un medicamento para modificación del peso corporal de un mamífero para uso en combinación con un medicamento para tratar la diabetes, la presión sanguínea alta y el colesterol elevado.

74. El uso de un antagonista de un polipéptido OB según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 o producido según el procedimiento de las reivindicaciones 47 a 50 para la fabricación de un medicamento para aumentar el peso corporal de un animal.

75. El uso según la reivindicación 74, donde el antagonista es seleccionado entre el grupo consistente en un anticuerpo que se une al, y neutraliza la actividad del, polipéptido OB, un fragmento del polipéptido OB que se une, pero sin activarlo, al receptor OB y un antagonista de pequeña molécula del polipéptido OB.

76. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 71 a 75 para la fabricación de un medicamento para liberación intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, subcutánea, nasal, oral o pulmonar.

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