Un anticuerpo humanizado que tiene una especificidad de unión tanto por el CD45RO como por el CD45RB que comprende la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO:

31 o 32 y una región variable de cadena liviana de la SEQ ID NO: 7 o SEQ ID NO: 8

Anticuerpos terapéuticos humanizados contra las isoformas CD45.

Campo de la invención

La presente invención se relaciona con compuestos orgánicos, tal como moléculas de unión contra las isoformas del antígeno CD45, tal como por ejemplo los anticuerpos monoclonales (mAb) y el uso de los mismos.

Antecedentes de la invención

Un método en el tratamiento de una variedad de enfermedades es lograr la eliminación o la inactivación de leucocitos patógenos y el potencial para la inducción de la tolerancia para inactivar respuestas inmunes patológicas.

El rechazo del trasplante de órgano, célula y tejido y las varias enfermedades autoinmunes se consideran que son principalmente el resultado de la respuesta inmune mediada por célula T activada por las células T auxiliares que son capaces de reconocer antígenos específicos que son capturados, procesados y presentados a las células T auxiliares por el antígeno que presenta la célula (APC) tal como los macrófagos y las células dendríticas, en la forma de un complejo antígeno-MHC, es decir la célula T auxiliar cuando reconoce antígenos específicos se estimula para producir citocinas tales como IL-2 y expresar o regular de forma ascendente algunos receptores de citocina y otras moléculas de activación y proliferar. Algunas de estas células T activadas pueden actuar directa o indirectamente, es decir ayudar a las células T o las células B citotóxicas efectoras, para destruir las células o tejidos que expresan el antígeno seleccionado. Después de la terminación de la respuesta inmune algunas de las células maduras clónicamente seleccionadas permanecen como auxiliares de memoria y células C citotóxicas de memoria, que circulan en el cuerpo y reconocen rápidamente el antígeno si aparece de nuevo. Si el antígeno que activa esta respuesta es un antígeno ambiental inocuo, el resultado es alergia, si el antígeno no es un xenoantígeno, sino que es un autoantígeno, esto puede resultar en una enfermedad autoinmune; si el antígeno es un antígeno de un órgano trasplantado, el resultado puede ser un rechazo de injerto.

El sistema inmune se ha desarrollado para autoreconocerse de no autoreconocerse. Esta propiedad le posibilita a otro organismo sobrevivir en un ambiente expuesto a la exposición diaria a los patógenos. Esta especificidad por no autoreconocerse y la tolerancia hacia autoreconocerse se origina durante el desarrollo del repertorio de la célula T en el timo a través de los procesos de selección positiva y negativa, que también comprenden el reconocimiento y la eliminación de las células T autorreactivas. Este tipo de tolerancia se refiere a una tolerancia central. Sin embrago algunas de estas células autorreactivas escapan a este mecanismo selectivo y poseen un riesgo potencial para el desarrollo de enfermedades autoinmunes. Para controlar las células T autorreactivas que han escapado a la periferia, el sistema inmune tiene mecanismos reguladores periféricos que suministran protección contra la autoinmunidad. Estos mecanismos son la base para la tolerancia periférica.

Los antígenos de superficie celular reconocidos por los mAb específicos se designan generalmente mediante un número CD (grupo de diferenciación) asignado mediante taller Internacional de Tipificación de Leucocitos y el término CD45 aplicado aquí se refiere a un antígeno común de leucocito de superficie celular CD45; y un mAb para ese antígeno se designa como "anti-CD45".

Los anticuerpos contra el antígeno común de leucocito (LCA) o CD45 son un componente principal de la globulina antilinfocito (ALG). El CD45 pertenece a la familia de las fosfatasas tirosina de transmembrana y son tanto un regulador positivo como negativo de la activación celular, dependiendo de la interacción del receptor. La actividad de fosfatasa del CD45 parece requerirse para la activación de las cinasas de la familia Src asociadas con el receptor antígeno de los linfocitos B y T (Trowbridge IS et al, Annu Rev Immunol. 1994; 12: 85-116). Así, en la activación de la célula T el CD45 es esencial para la señal 1 y las células deficientes en CD45 tienen profundos defectos en los eventos de activación mediados por TCR.

El antígeno CD45 existe en diferentes isoformas que comprenden una familia de glucoproteínas de transmembrana. Distintas isoformas del CD45 difieren en su estructura del dominio extracelular que surge de un empalme alternativo de 3 exones variables que codifican para parte de la región extracelular CD45 (Streuli MF. et al, J. Exp. Med. 1987; 166: 1548-1566). Las varias isoformas del CD45 tienen diferentes dominios extracelulares, pero tienen los mismos segmentos citoplasmáticos y de transmembrana que tienen 2 dominios de fosfatasa altamente conservados homólogos de aproximadamente 300 residuos. Diferentes combinaciones de isoforma se expresan de manera diferente sobre las subpoblaciones de linfocitos T y B (Thomas ML. et al, Immunol. Today 1988; 9: 320-325). Algunos anticuerpos monoclonales reconocen un epítopo común a todas las diferentes isoformas, aunque otros mAb tienen una especificidad restringida (CD45R), dependiendo de cuál de los exones empalmados alternativamente (A, B o C) reconocen ellos. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales que reconocen el producto del exón A son consecuentemente designados CD45RA, aquellos que reconocen las varias isoformas que contienen el exón B se han designado CD45RB (Beverley PCL et al, Immunol. Supp. 1988; I: 3-5). Los anticuerpos tales como el UCHL1 se unen selectivamente a la isoforma CD45RO de 180 kDa (sin ninguno de los exones variables A, B o C) que parecen estar restringidos a un subconjunto de células T activadas, células de memoria y timocitos corticales y no se detectan sobre las células B (Terry LA et al, Immunol. 1988; 64: 331-336).

La WO 2002/072832 describe anticuerpos monoclonales (mAb), que son específicos para un epítopo tanto el CD45RB como el CD45RO para uso terapéutico contra enfermedades autoinmunes y rechazos de injertos.

El dominio pesado de variable del anticuerpo humano puede ser n-glucosilado (Dunn-Walters D. et al, Molecular Immunology 2000; 37: 107-113). La hipermutación somática introduce predominantemente la sustitución de nucleótido único en los genes de región variable con el fin de incrementar la variabilidad de la inmunoglobulina.

La N-glucosilación en la región variable se conoce por afectar la unión de antígeno. Sin embargo se conocen los anticuerpos monoclonales aglucosilados, que, aunque preservan su función biológica, al perder cada glucosilación sus efectos colaterales adversos (Friends P. et al, Transplantation 1999, 68; 1632-1687).

Descripción de las figuras

La Figura 1 muestra que la inhibición del MLR primario por el "candidato mAb" es dependiente de dosis en el rango de 0.001 y 10 µg/ml. "Concentración" es la concentración del "candidato mAb".

Las Figuras muestran el mapa de plásmido del vector de expresión HCMV-G1 HuA6-VHQ que comprende la cadena pesada que tiene la secuencia de nucleótido SEQ ID NO: 12 (3921-4274)- en la secuencia de nucleótido del vector de expresión completa SEQ ID NO: 15.

La Figura 3 muestra el mapa del plásmido del vector de expresión HCMV-G1 HuA6-VHE- que comprende la cadena pesada que tiene la secuencia de nucleótido SEQ ID NO: 11 (3921-4274) en la secuencia de nucleótido del vector de expresión completa SEQ ID NO: 16.

La Figura 4 muestra el mapa del plásmido del vector de expresión HCMV-K HuAb-VL1 humV1 que comprende la cadena liviana que tiene la secuencia de nucleótido SEQ ID NO: 14 (3964-4284) en la secuencia de nucleótido del vector de expresión completa SEQ ID NO: 17.

La Figura 5 muestra el mapa del plásmido del vector de expresión HCMV-K HuAb-VL1 humV2 que comprende la cadena liviana que tiene la secuencia de nucleótido SEQ ID NO: 13 (3926-4246) en la secuencia de nucleótido del vector de expresión completa SEQ ID NO: 18.

La Figura 6 muestra el mapa del plásmido del vector de expresión LCVL1S_P20 que comprende la cadena liviana que tiene la secuencia de nucleótido SEQ ID NO: 33 en la secuencia de nucleótido del vector de expresión completa SEQ ID NO: 36.

La Figura 7 muestra el mapa del plásmido del vector de expresión LCVL2S_P20 que comprende la cadena liviana que tiene la secuencia de nucleótido SEQ ID NO: 13 en la secuencia de nucleótido del vector de expresión completa SEQ ID NO: 39.

La Figura 8 muestra el mapa del plásmido del vector de expresión HCVHEN73D Sp20 que comprende...

1. Un anticuerpo humanizado que tiene una especificidad de unión tanto por el CD45RO como por el CD45RB que comprende la región variable de cadena pesada de la SEQ ID NO: 31 o 32 y una región variable de cadena liviana de la SEQ ID NO: 7 o SEQ ID NO: 8.

2. El anticuerpo humanizado de la reivindicación 1 que tiene una especificidad de unión tanto por el CD45RO como el CD45RB que comprende:

3. Polinucleótidos aislados que codifican el anticuerpo humanizado de las reivindicaciones 1 o 2.

4. Un vector de expresión que comprende los polinucleótidos de las reivindicaciones 3 cuyo vector es capaz de producir un anticuerpo humanizado cuando dicho vector está presente en una célula o huésped compatible.

5. Una célula anfitriona aislada que comprende un vector de expresión de la reivindicación 4.

6. Un anticuerpo humanizado de las reivindicaciones 1 o 2 para uso como farmacéutico.

7. El anticuerpo de la reivindicación 6 para uso en el tratamiento y/o profilaxis de enfermedades autoinmunes, rechazo por trasplante, soriasis, dermatitis, enfermedades inflamatorias del intestino y/o alergias.

8. El anticuerpo de la reivindicación 7 en el tratamiento y/o profilaxis de la enfermedad del injerto contra el anfitrión (GVHD).

9. El anticuerpo de la reivindicación 7 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de rechazo por trasplante de célula islote pancreática.

10. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de la reivindicación 1 o 2 en asocio con por lo menos un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.