Activadores y aplicaciones terapéuticas de los mismos.

Una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene la fórmula**Fórmula**

o la fórmula**Fórmula**

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo;

y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Activadores y aplicaciones terapéuticas de los mismos Campo de la invención

La presente invención describe métodos de identificación de moléculas pequeñas, que activan la vía de p53 de supresión de tumor y/o de los miembros de la familia de la proteína p53. La presente invención se refiere además a métodos de activación de la vía de p53 de supresión de tumor, o de sus miembros de familia asociados, las proteínas p63 y p73 (en lo sucesivo denominados colectivamente como la vía p53 o p53) por los compuestos de moléculas pequeñas, y métodos de tratamiento del cáncer y enfermedades que requieren la manipulación de la actividad de la vía de p53 por las moléculas pequeñas. Esta activación de la vía puede incluir vías que actúan corriente arriba de p53, como la respuesta al daño del ADN, y enzimas que modifican a p53, y corriente abajo, es decir, a través de eventos activados por la familia de p53. Más específicamente, la invención se refiere a compuestos que pueden inducir la actividad de la vía de p53, y que pueden ser utilizados terapéuticamente, ya sea solos o en combinación con otra terapia. El uso terapéutico incluye enfermedades tales como el cáncer, así como otras condiciones en las que la activación de la respuesta de la vía de p53 es beneficiosa.

Antecedentes de la invención

El supresor de tumores p53 desempeña un papel central en un proceso por el cual una célula siente y responde a una variedad de tensiones. Actúa como un monitor crítico que previene la supervivencia de células con daños genéticos, y, posiblemente, otros tipos de daños permanentes que están más allá de la reparación. Estas respuestas evitan la acumulación de células dañadas y transformadas y protegen a los organismos de los procesos que podrían conducir a la formación maligna. Las propiedades clave de p53 indican claramente su importancia en las respuestas de estrés celular y daños celulares de las células. Los niveles de p53 son estrictamente regulados en células normales no estresadas por el producto de gen MDM2, que se une a p53 y pone a p53 como diana para la degradación mediada por ubiquitina por el proteasoma. Los agentes que dañan el ADN (por ejemplo, radiaciones ionizantes o no ionizantes y fármacos citotóxicos) y otros tipos de estrés (por ejemplo, la hipoxia y oncogenes) activan p53 lo que conduce a la activación del programa transcripcional de p53. Esto incluye la transactivación de un vasto número de los genes diana de p53 corriente abajo tales como p2lWAF1/CIP1 (p21) y un número de objetivos de apoptosis asociados (por ejemplo, PUMA, NOXA, PIGS, etc.), muchos de los cuales aún no se han caracterizado (Zhao et al, 2000; Wang et al, 2001; Wei et al, 2006). p21 regula negativamente las qulnasas Implicadas en la progresión del ciclo celular por lo que se anula la transición del ciclo celular G-i/S para dar tiempo a la reparación de daños en el ADN antes de la división celular. En presencia de daño irreparable, p53 puede Inducir la apoptosis para eliminar las células dañadas. En ausencia de la función de p53, se acumulan las alteraciones del ADN, lo que lleva a la iniciación o progresión de la malignidad.

La familia de p53 incluye hasta ahora el miembro fundador, p53, y los miembros estrechamente relacionados más recientemente reconocidos, p63, y p73, así como, numerosas isoformas y versiones empalmadas alternativamente de cada isoforma (Murray-Zmijewski et al., 2006). p63 y p73 comparten muchas características estructurales y funcionales con p53, y activan un conjunto de genes que se superponen con p53. p63 es esencial en la morfogénesis epidérmica y desarrollo de las extremidades, mientras que su relevancia en el cáncer no está clara (Melino et al., 2003). Se sabe que p73 es esencial en el desarrollo neuronal, respuestas Inflamatorias y comportamiento reproductivo (Murray-Zmijewski et al, 2006; Levrero et al., 2000). Tanto p63 como p73 son capaces de activar la detención del ciclo celular y un programa apoptótico similar al inducido por p53.

Un requisito previo para la activación transcripcional mediada por p53 es su capacidad para unirse específicamente a un elemento de respuesta (RE) dentro de los promotores de genes corriente abajo que comprende dos copias de la secuencia de consenso palindrómica "PuPuPuC(A/T)(T/A)GpyPyPy", separado por de 0-13 pb (el-Deiry et al., 1992). Este mismo elemento de respuesta también es utilizado por ambos p63 y p73 (Murray-Zmijewski et al., 2006; Levrero et al., 2000). Después de unirse al RE, p53 estimula el ensamblaje del complejo de prelniciación de la transcripción TFIID-TFIIA en el elemento TATA (Xing et al., 2001). La mayoría de las mutaciones de p53 encontradas en los tumores humanos se encuentran en el dominio central de p53 y afectan a residuos de aminoácidos que se ponen en contacto con el ADN de contacto o son necesarios para el correcto plegamiento de p53, aboliendo así la unión con RE y la activación transcripcional (Cho et al., 1994). Se ha demostrado que p53 se une a su RE exclusivamente como un tetrámero (Friedman et al., 1993). Sin embargo, la mayoría de los ER de p53 naturales no se encajan por completo en la secuencia de consenso (Kim et al., 1997), y otros factores, tales como modificaciones de p53, modificaciones de la cromatina y el plegado y unión de otros factores co-reguladores en sitios específicos del promotor, determinan la extensión de la respuesta transcripcional. Este mecanismo de acción también se aplica a ambos p63 y p73 y ambos son capaces de utilizar el elemento RE para la unión específica a la secuencia, ellos también regulan un gran conjunto de dianas específicas para cada isoforma.

Más del 50% de los tumores humanos albergan mutaciones de TP53, que hacen que la proteína p53 esté alterada funcionalmente. Esto hace al gen TP53 ser el más comúnmente mutado en cánceres humanos. También se especula que los tumores humanos restantes tienen p53 disfuncional, por medio de la regulación alterada de la vía

de p53 o la proteína o por modificaciones de las interacciones proteína-proteína de p53. El papel esencial de p53 en la supresión tumoral se evidencia también con las mutaciones de TP53 en línea germinal, que causan una predisposición al cáncer hereditario poco frecuente, el síndrome de Li-Fraumeni, y en modelos animales deficientes en p53 que tienen tumorigénesis seriamente aumentada.

Debido a sus propiedades inductoras de apoptosis, p53 es una diana muy atractiva para el desarrollo de fármacos. Un compuesto de fármaco en particular, nutlin-3a (Vassilev et al., 2004), es un activador muy específico de p53, y hemos establecido que nutlin-3a es el primer y altamente eficaz agente que induce linfoma de célula B (linfoma de derrame pleural con infección del virus del herpes asociado al sarcoma de Kaposi) matando la célula tanto in vitro como in vivo en modelos de ratón (Sarek et al., 2007). Además, la activación de la vía de p53 usando nutlin-3a no causa ningún efecto secundario adverso en el ratón. Sobre la base de estos estudios se ha concluido que la inactivación de la vía de p53 por el virus VHSK se encuentra en la patogénesis de esta enfermedad maligna incurable.

Considerando que

i) p53 es una molécula altamente sensible al estrés celular y daño en el ADN, implicado en diversas enfermedades tales como el cáncer, isquemia, trastornos neuronales, inflamación y también en los procesos fisiológicos tales como el metabolismo celular normal, el desarrollo y el envejecimiento (Vousden y Lañe, 2007),

ii) p53 es un activador clave de las vías de la parada/apoptosis del ciclo celular y las vías implicadas en los procesos mencionados anteriormente,

iii) sus mutaciones son poco frecuentes en varios cánceres humanos comunes resistentes a la quimioterapia (por ejemplo, melanoma, cáncer de próstata),

iv) su activación en los modelos condicionales de ratón tiene una potencia significativa para causar la regresión del tumor (Martins et al. 2006, Ventura et al. 2007, Xue et al., 2007), y

v) que los estudios piloto utilizando compuestos activadores de p53 tal como nutlin-3a (Vassilev et al., 2004, Sarek et al., 2007) muestran in vivo notables efectos antitumorales sin efectos secundarios, un desarrollo adicional de compuestos de pequeñas moléculas que afectan a la vía de p53 está muy justificado y tiene potencial para la explotación terapéutica.

Compendio de la invención

Breve descripción de los dibujos

Figura 1. Activación del reportero p53DsRed por los compuestos. Células PG3/9 de melanoma se incubaron con las concentraciones Indicadas de los compuestos 1, 7, 9, 15, 20, 21, 22, 23 y nutlin-3a durante 24 horas, seguido por el análisis del porcentaje de células con reportero p53DsRed activado.... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto que tiene la fórmula

o la fórmula

O

CH,

I

Oh

CHj

I

CHi

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

2. Un compuesto que tiene la fórmula

O

CU,

N

o una sal farmacéuticamente aceptables de los mismos para uso en el tratamiento del cáncer.

3. El compuesto según la reivindicación 2, en donde la administración del compuesto se lleva a cabo en una dosis en el intervalo de aproximadamente 0,001 mg/kg a aproximadamente 200 mg/kg por día.

4. El compuesto según la reivindicación 2 o 3, en donde la administración del compuesto se efectúa por vía oral, parenteral, sublingual, transdérmica, rectal, transmucosal, tópica, por inhalación, o por medio de administración bucal.