Polipéptidos novedosos implicados en respuesta inmunitaria.

Molecula de acido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleotidos que codifica para el dominio extracelular del polipeptido expuesto en la figura 12A (SEQ ID NO:

17); en la que el dominio extracelular abarca desde cualquiera de los residuos 19, 20, 21, 22, 24 6 28 hasta el residuo 259 de la secuencia de aminoacidos mostrada en la figura 12A (SEQ ID NO: 17), con la condicion de que la secuencia de nucleOtidos no sea la secuencia de nucleOtidos del n.° de registro de Gen Bank AB014553.1 (presentada el 15 de julio de 1998).

Polipéptidos novedosos implicados en respuesta inmunitaria

Campo de la invención La presente invención se refiere a polipéptidos que están implicados en la activación de linfocitos T. Específicamente, la invención se refiere a polipéptidos coestimuladores de linfocitos T, a los ácidos nucleicos que codifican para los polipéptidos, a vectores de expresión y células huéspedes para la producción de los polipéptidos y a composiciones y usos en el tratamiento de enfermedades relacionadas con inmunosupresión y activación inmunitaria.

Antecedentes de la invención Para la generación de una respuesta inmunitaria de linfocitos T (células T) apropiada, deben proporcionarse dos señales a la célula T por células presentadoras de antígeno (CPA) . En primer lugar, debe presentarse un antígeno al receptor de células T (TCR) por medio de un complejo mayor de histocompatibilidad (CMH) , en un acontecimiento que determina la especificidad. En segundo lugar, debe suministrarse una señal coestimuladora, independiente de antígeno mediante el acoplamiento de miembros de la familia B7 en la CPA con la proteína CD28 en células T. Una respuesta inmunitaria productiva conduce a proliferación, diferenciación, expansión clonal y efecto o función. En ausencia de la segunda señal coestimuladora, las células T experimentan un estado de falta de receptividad específica de antígeno de larga duración, denominado anergia.

Las células T inician la respuesta inmunitaria, median en funciones efectoras específicas de antígeno y regulan la actividad de otros leucocitos secretando citocinas. El receptor de células T (TCR) distingue la célula T de otros linfocitos y puede unirse al antígeno sólo cuando se presenta por la CPA dentro del contexto de un CMH. La actividad funcional de una célula T particular puede correlacionarse con la expresión de antígenos de membrana, tales como CD4 y CD8. Por ejemplo, células T CD4+ funcionan generalmente como células T auxiliares ("helper') (TH) y están restringidas por CMH de clase 11, mientras que las células CD8+ funcionan generalmente como células T citotóxicas (Te) y están restringidas por CMH de clase 1.

Los polipéptidos coestimuladores de células T potentes que se han identificado previamente incluyen los polipéptidos denominados B7.1 (Freeman et al. J. Immunology 143, 2714-2722 (1989) , Freeman et al. Jour. Expt. Med. 174, 625-31 (1991) ) Y B7.2 (Freeman etal. Science 262, 909-911 (1993) Y Freeman etal. Jour. Expt. Med. 178, 2185-2192 (1993) ) , (o CD80 Y CÓ86, respectivamente) . Estos polipéptidos se expresan de manera o bien inducible o bien constitutiva en diversas CPA y son ligandos unidos a la membrana para CD28 y CTLA-4, respectivamente, en células T. CD28 (Aruffo y Seed Proc. Natl. Acad. ScL 84, 8573-8577 (1987) Y Gross et al. J. Immun. 144. 3201-3210 (1990) ) se expresa en células T en reposo y media en una señal coestimuladora positiva. Se induce la expresión de CTLA-4 (Brunet et al. Nature 328, 267-270 (1987) Y Dariavach et al. Eur. Jour. Immun. 18, 1901-1905 (1988) ) tras la activación de células T y regula de manera negativa la señal de CD28, debido a su afinidad de unión superior por B7.1 y B7.2. Ratones sin el gen de CTLA-4 presentan niveles drásticamente altos de células T, puesto que el mecanismo de desactivación de la señal de proliferación se ve alterado en ausencia de CTLA-4. Este fenotipo demuestra claramente el efecto inhibidor principal que tiene la proteína coestimuladora CTLA4 sobre la proliferación de células T. Ratones que carecen de CD28 o B7.1 o B7.2 tienen un fenotipo menos grave, lo que indica que pueden existir rutas alternativas para la coestimulación de células T.

Ha habido un considerable interés en la ruta de CD28/CTLA-4 como medio para regular la proliferación y activación de células T. Una proteína quimérica que contiene la parte extracelular de CTLA-4 fusionada a Fc humano tiene fuertes efectos inmunosupresores y se ha estudiado en una variedad de entornos clínicos. También se han evaluado anticuerpos frente a proteínas B7.1 y B7.2 para indicaciones similares en el área de la inmunosupresión. Anticuerpos anti-CTLA-4 han mostrado utilidad en la promoción de la activación de células T. Además, la terapia génica de B7.1 y B7.2 ha mostrado ser muy prometedora en el área de la inmunoterapia contra el cáncer.

Hasta ahora, CD28, CTLA-4, B7.1 Y B7.2 están implicadas en una ruta coestimuladora de células T individual. Dada la capacidad de modulación de una respuesta inmunitaria regulando la coestimulación de células T, sería deseable identificar otros miembros de la misma ruta coestimuladora de células T o separada que puedan tener propiedades ventajosas en la regulación de la respuesta inmunitaria y función de células T del huésped.

Por consiguiente, es un objeto de la invención proporcionar polipéptidos novedosos para la estimulación de la actividad y/o proliferación de células T. Es un objeto adicional de la invención usar los polipéptidos novedosos para la prevención y el tratamiento de trastornos inmunitarios mediados por células T.

Sumario de la invención Sorprendentemente, se han identificado dos polipéptidos novedosos de una ruta coestimuladora de células T. Los polipéptidos representan una pareja de ligando-receptor en una ruta coestimuladora única que parece ser distinta de la ruta que consiste en las proteínas previamente descritas CD28, CTLA-4, B7.1 Y B7.2. Los polipéptidos se denominan proteína 1 relacionada con CD28, o CRP1, y proteína 1 relacionada con B7, o B7RP1.

La invención proporciona moléculas de ácido nucleico que codifican para polipéptidos B7RP1 y polipéptidos relacionados.

El contenido de la invención también se refiere a polipéptidos B7RP1 y polipéptidos relacionados.

La invención se define mediante las reivindicaciones.

Se abarcan por la invención vectores de expresión y células huésped para la producción de los polipéptidos, anticuerpos que se unen a polipéptidos B7RP1 y a polipéptidos relacionados y ensayos para detectar la unión de B7RP1 y polipéptidos relacionados con B7RP1 a CRP1 y polipéptidos relacionados con CRP1. También se abarcan por la invención composiciones farmacéuticas que comprenden B7RP1 o polipéptidos relacionados con B7RP1. También se proporcionan métodos para identificar compuestos que interaccionan con B7RP1 así como ensayos para determinar si tales compuestos son agonistas o antagonistas de la actividad de B7RP1.

Los polipéptidos CRP1 Y B7RP1 están implicados en la coestimulación y proliferación de células T. Los polipéptidos CRP1 Y B7RP1, agentes de unión selectiva de los mismos y agonistas y antagonistas de los mismos, pueden ser útiles para el diagnóstico, la prevención y el tratamiento de enfermedades relacionadas con el control de respuestas de células T.

Los polipéptidos CRP1 Y B7RP1, agentes de unión selectiva de los mismos y agonistas y antagonistas de los mismos, pueden ser útiles para el diagnóstico, la prevención y el tratamiento de trastornos inmunitarios, para o bien estimular una respuesta inmunitaria insuficiente o bien reducir o inhibir una respuesta inmunitaria exagerada o inapropiada. El trastorno inmunitario puede estar mediado directa o indirectamente por células T.

La invención proporciona el tratamiento, la prevención o la mejora de un trastorno mediado por células T que comprende administrar a un animal un polipéptido B7RP1. La invención también proporciona un método de diagnóstico de un trastorno mediado por células T o una susceptibilidad a un trastorno mediado por células T en un animal que comprende determinar la presencia o cantidad de expresión de un polipéptido B7RP1; Y diagnosticar un trastorno mediado por células T o una susceptibilidad a un trastorno mediado por células T basándose en la presencia o cantidad de expresión del polipéptido. Normalmente, un trastorno mediado por células T es un trastorno inmunitario que puede estar mediado directa o indirectamente por células T. El animal es preferiblemente un mamífero y más preferiblemente un ser humano. La invención también proporciona un método de identificación de una molécula de prueba que se une a un polipéptido B7RP1 que comprende poner en contacto el polipéptido con un compuesto de prueba y determinar el grado de unión del polipéptido al compuesto de prueba. El método puede usarse para identificar agonistas y antagonistas del polipéptido CRP1 y/o B7RP1.

Pueden usarse antagonistas de polipéptidos CRP1 y/o B7RP1 como agentes inmunosupresores para muchas indicaciones, incluyendo trastornos autoinmunitarios (tales como artritis reumatoide, psoriasis, esclerosis múltiple, diabetes y lupus eritematoso sistémico) , síndrome... [Seguir leyendo]

1. Molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica para el dominio eJdracelular del polipéptido expuesto en la figura 12A (SEO ID NO: 17) ; en la que el dominio extracelular abarca desde cualquiera de los rl~siduos 19, 20, 21, 22, 24 Ó 28 hasta el residuo 259 de la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 12A (SEO ID NO: 17) , con la condición de que la secuencia de nucleótidos no sea la secuencia de nucleótidos del n." de registro de GenBank AB014553.1 (presentada el15 de julio de 1998) .

2. Molécula de ácido nucleico según la reivindicación 1, en la que la secuencia de nuc!eótidos está operativa mente unida a una secuencia de control de la expresión.

3. Célula huésped que comprende la molécula de ácido nucleico según la reivindicaciÓll 2.

4. Célula huésped según la reivindicación 3, que os una célula eucariota o una célula procariota.

5. Procedimiento para producir un polipéptido codificado por el ácido nucleico según la reivindicación 1 ó 2 que comprende hacer crecer un cultivo de la célula huésped según la reivindicación 3 en un medio de cultivo adecuado y aislar el polipéptido del cultivo.

6. Polipéptido codificado por la molécula de ácido nucleico según la reivindicación 1.

7. POlipéptido aislado que comprende el dominio extracelular de la secuencia de aminoácidos madura expuesta en la figura 12A (SEO ID NO: 17) ; en el que el dominio extracelular abarca desde cualquiera de los residuos 19, 20, 21, 22, 24 ó 28 hasta el residuo 259 de la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 12A (SEO ID NO: 17) .

8. Polipéptido según la reivindicación 6 ó 7, que se ha modificado quimicamente.

9. POlipéptido según la reivindicación 8, que se ha modificado químicamente mediante la adición de uno o más pOlímeros solubles en agua.

10. POlipéptido de fusión que comprende el polipéptido según la reivindicación 6 ó 7 fusionado a una secuencia de aminoácidos heter6loga.

. PoIipéptido de fusión según la reivindicación 10, en el que la secuencia de aminoácidos heteróloga es un dominio constante de IgG o fragmento del mismo.

12. Composición que comprende el polipéptido según la reivindicación 6 ó 7 y un portador, adyuvante, solubilizante, estabilizador o antioxidante farm21céuticamente aceptable.

13. Uso de un polipéptido según la reivindicaciÓll 6 ó 7 para la preparación de un medicamento para tratar, prevenir o mejorar un trastorno mediado por células T.

14. Método de diagnóstico de un trastorno mediado por células T o una susceptibilidad a un trastomo mediado por células T en un animal que comprende:

a) determinar la presencia o cantidad de expreiiión del poIipéptido según la reivindicación 6 ó 7; Y

b) diagnosticar un trastomo mediado por células T o una susceptibilidad a un trastorno mediado por células T basándose en la presencia o cantidad de expresión del polipéptido.

15. Método de identificación de una molécula de prueba que se une al polipéptido según la reivindicación 6 ó 7, que comprende:

a) poner en contacto el polipéptido según la reivindicación 6 ó 7 con una molécula de prueba; y

b) determinar el grado de unión del polipéplido a la molécula de prueba.

16. Método según la reivindicaciÓll 15, que comprende además determinar la actividad del polipéptido cuando está unido al compuesto.

17. Uso de la molécula de ácido nucleico según la reivindicación 1 ó 2 para la preparación de un medicamento para regular la activación o proliferación de células T en un animal.

18. POlipéplido seglJn la reivindicación 6 ó 7 par.::1 su uso en el tratamiento. la prevención o la mejora de un trastorno mediado por células T.

19. Molécula de ácido nucleico según la reivindic.ación 1 Ó 2 para su uso en la regulación de la activación o proliferación de células T en un animal.