ÁCIDOS NUCLEICOS QUE CODIFICAN POLIPÉPTIDOS CON ACTIVIDAD CHIPS.

Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un (poli)péptido con actividad de la Proteína Inhibidora de la Quimiotaxis de Staphylococcus aureus (CHIPS),

dicha secuencia de nucleótido correspondiendo a una secuencia que es seleccionada del grupo consistente de:

a) una secuencia de nucleótido que comprende al menos parte de la secuencia como se representa en la Figura 4 (SEC ID NO 4);

b) secuencias de nucleótidos que codifican un (poli)péptido con actividad CHIPS y que tienen la secuencia de aminoácidos representada en la Figura 5 (SEC ID NO 5);

c) secuencias de nucleótidos que son al menos 40% idénticos a cualquiera de las secuencias de nucleótidos a) o b);

d) secuencias de nucleótidos que hibridan en condiciones rigurosas con cualquiera de las secuencias de nucleótidos a), b) o c), y

e) secuencias de nucleótidos complementarias a cualquiera de las secuencias de nucleótidos a), b), c) o d), donde las condiciones rigurosas en el paso d) están constituidos por hibridación durante la noche a 42ºC en 5xSSC y lavado a 65ºC en 0.1xSSC y donde la actividad CHIPS es la capacidad de comprometer específicamente la unión ligando-(C5a o MLP).

Ácidos nucleicos que codifican polipéptidos con actividad CHIPS.

La presente invención se refiere a una molécula de ácido nucleico que codifica un (poli) péptido con actividad CHIPS. La invención también se refiere al uso de la información contenida en el ácido nucleico para la preparación del (poli) péptido correspondiente y a los vectores y huéspedes para uso en el mismo. La invención en adición se refiere a moléculas no (poli) péptidos que tienen una estructura y función similar a la de los (poli) péptidos. El (poli) péptido que tiene actividad CHIPS que esta codificado por la molécula de ácido nucleico de la invención puede ser utilizado en el tratamiento de reacciones de inflamación. Los (poli) péptidos y no (poli) péptidos pueden en adición ser utilizados para inhibir la activación de leucocitos y células endoteliales.

Los leucocitos se dedican principalmente a la protección del cuerpo contra invasores foráneos (ej., bacterias, virus, hongos y células cancerosas). Las células más importantes son los linfocitos, monocitos y neutrófilos. Los linfocitos forman el sistema inmune específico y causan reacciones inmunes contra los invasores. Su tarea más importante es construir memoria específica contra el invasor, de modo que la próxima vez que el invasor entra al cuerpo es reconocido, muerto y eliminado rápidamente. Algunas veces estos linfocitos no solo atacan a los invasores, también reaccionan contra ciertas estructuras y/o moléculas (llamadas autoantígenos) del propio cuerpo, que causan enfermedades autoinmunes (ej., la artritis reumatoide). La matanza y eliminación de los invasores se hace principalmente por monocitos y neutrófilos, células del sistema inmune innato, mediante reconocimiento directo de los invasores o con la ayuda de linfocitos específicos.

En contraste con la delicada red de las reacciones afinadas y controladas de linfocitos, las células del sistema innato reaccionan de una manera relativamente no especifica y agresiva. Ya que son parte de la primera línea de defensa del cuerpo, su tarea más importante es matar y eliminar el agente invasor tan pronto como sea posible. Esto se lleva a cabo a través de sustancias muy agresivas (ej., radicales libres y enzimas) que no solo son letales para el invasor, sino también causan daño a las células huéspedes en las proximidades. Sustancias de estas células dañadas y las células activadas localmente del sistema innato en si atraerán además un número creciente de neutrófilos y monocitos, causando inflamación local. En muchos casos, tal reacción inflamatoria agresiva y perjudicial, causada por neutrófilos sobreactivados, es innecesaria. En algunos casos esta respuesta inflamatoria es responsable de trastornos graves, a veces letales e incluye condiciones como el Síndrome de Dificultad Respiratoria Adulta (SDRA), daño severo del tejido después de eventos trombóticos tales como ataques cardiacos y accidentes cerebrovasculares, enfermedades inflamatorias del intestino y artritis reumatoide. La inflamación disminuirá una vez que todos los invasores han sido muertos y eliminados, juntos con las diversas células muertas en el proceso. La curación de la herida, causada por la respuesta inflamatoria, puede entonces empezar. Aunque hay algún solapamiento en función, la tarea principal de los neutrófilos es atacar a los invasores y la tarea principal de los monocitos es eliminar los desechos resultantes de este ataque. En adición, los neutrófilos tienen otra tarea pacifica en la asistencia al proceso de cicatrización de la herida.

Cuando las bacterias han invadido el cuerpo y, por ejemplo, infectado el sistema nervioso central (como en la meningitis) empiezan a producir sustancias microbianas, que incluyen los polipéptidos formilados (como el péptido fMLP). Otras sustancias de origen microbiano activan el complejo enzimático convertasa factor de complemento 5 (C5), que convierte el C5 del sistema de complemento en su forma activada C5a. Ambos C5a y fMLP son quimio-atrayentes: sustancias que pueden activar y atraer células de los vasos sanguíneos (el proceso de migración). Los neutrófilos responden a estas dos sustancias y también a la interleucina -8 (IL-8). Esta "quimioquina" (el nombre dado a los quimio-atrayentes que son producidos por células del sistema inmune) es producida principalmente por monocitos activados (pero también en pequeñas cantidades por los propios neutrófilos activados). Los neutrófilos interactúan con estas sustancias, debido a que tienen receptores para estas sustancias en el exterior de su membrana celular.

Los neutrófilos activados pueden fácilmente migrar de los vasos sanguíneos. Esto es debido a que los quimio-atrayentes, productos microbianos y sustancias de monocitos activados habrán incrementado la permeabilidad de los vasos y estimulado las células endoteliales de las paredes de los vasos para expresar ciertas moléculas de adhesión. Los neutrófilos expresan selectinas e integrinas (ej., CD11b/CD18) que se unen a estas moléculas de adhesión. Una vez que el neutrófilo se adhirió a las células endoteliales, es capaz de migrar a través de las células, bajo la dirección de quimio-atrayentes/quimioquinas, hacia el sitio de infección, donde la concentración de estas sustancias está a su nivel más alto. Estas sustancias también activan neutrófilos para producir una gama de otras moléculas, algunas de las cuales atraen más neutrófilos (y subsecuentemente monocitos), pero, en su mayoría, son responsables de destruir las bacterias invasoras. Alguna de estas sustancias (ej., radicales libres, enzimas que descomponen las proteínas (proteasas) y membranas celulares (lipasas)) son tan reactivas y no especificas que células del tejido circundante (y los neutrófilos en si) son destruidas, causando daños en los tejidos. Este daño es exacerbado por la presencia de fluido derivado de la sangre que ha traspasado la pared del vaso con fugas y es responsable de la hinchazón que siempre acompaña a la inflamación (llamada edema). La acumulación de presión causada por este exceso de fluido resulta en el daño celular adicional y muerte.

Más tarde en el proceso inflamatorio, los monocitos migran a la escena y se activan. Además de su labor en la eliminación de bacterias y desechos celulares, también producen sustancias tales como el factor de necrosis tumoral (TNF) y IL-8, que a su vez atrae más neutrófilos activados, causando daños locales adicionales. TNF también tiene un efecto estimulatorio directo en los neutrófilos. Una vez que todos los invasores han sido eliminados, la respuesta inflamatoria disminuirá y el área se despejara de las "víctimas" restantes. Entonces comienza el proceso de cicatrización de la herida. Aunque se sabe que los neutrófilos juegan un papel fundamental en la cicatrización de heridas, no está claro qué sustancias derivadas de los neutrófilos están implicadas y cómo los neutrófilos están activos en la cicatrización sin ser agresivos para el tejido circundante. En general, el tejido dañado será reemplazado por tejido cicatricial formado principalmente de fibroblastos y colágeno. Cuando ocurre la inflamación en áreas del cuerpo con una importante función, como los tejidos formados a partir de células del músculo del corazón, las células del cerebro o las células alveolares del pulmón, la función normal se verá comprometida por la formación de la cicatriz resultante, causando serios trastornos como insuficiencia cardiaca, parálisis y enfisema. Para minimizar las consecuencias debilitantes de estos trastornos, es importante "amortiguar" la reacción inflamatoria lo más rápidamente posible.

La intervención para controlar la respuesta inflamatoria aguda de fase temprana presenta una oportunidad para mejorar el pronóstico para una amplia variedad de pacientes cuyos síntomas pueden reconocerse como procedentes de tal evento. Este enfoque ha sido defendido para muchas enfermedades basadas en inflamaciones crónicas y agudas y que tienen potencial basado en descubrimientos de modelos relevantes de enfermedades. Medicamentos anti-inflamatorios clásicos tales como esteroides y Medicamentos Anti-Inflamatorios No Esteroideos Anti-Inflamatorios (MAINEAIS) no tienen el perfil ideal de acción, ya sea en términos de eficacia o seguridad. Los esteroides afectan el tipo de células "equivocado" (monocitos) y sus efectos de amortiguación son fácilmente evitados. MAINEAIS generalmente muestran un efecto relativamente leve en parte debido a que intervienen en una etapa tardía en el proceso inflamatorio. Ambas clases de medicamentos producen una serie de efectos secundarios indeseables resultantes de otros aspectos de su actividad farmacológica.... [Seguir leyendo]

1. Una molécula de ácido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un (poli)péptido con actividad de la Proteína Inhibidora de la Quimiotaxis de Staphylococcus aureus (CHIPS), dicha secuencia de nucleótido correspondiendo a una secuencia que es seleccionada del grupo consistente de: