FACTOR INDUCTOR DEL FACTOR NUCLEAR KB.

Un ácido nucleico que codifica el polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear)-14b que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1

Campo de la Invención

El factor nuclear B (NFB) comprende una familia de factores de transcripción eucarióticos implicados en la regulación de genes implicados en las respuestas inmunitarias y en otras funciones celulares. En ciertos casos, la activación de NFB conduce a una respuesta inflamatoria que finalmente da como resultado una enfermedad. Por lo tanto, sería deseable desarrollar medios para controlar la inducción de NFB. La presente invención proporciona polipéptidos que están implicados en la inducción de NFB y que se pueden usar para incrementar la expresión o la activación de NFB o para identificar y preparar inhibidores de la expresión o la activación de NFB.

Adelantos Indicados

El factor nuclear B (NFB) comprende una familia de factores de transcripción hallados en casi todas las células eucarióticas. NFB desempeña un papel en la regulación de genes implicados en la inflamación tisular, la proliferación celular, y la diferenciación celular.

Varios estudios han examinado la relación entre enfermedades y la expresión de las proteínas de las subunidades que constituyen NFB o la activación del NFB ya presente en una célula. Li et al. estudió la regulación de NFB mediante la proteína Tax de HTLV-1, lo que demostró que la capacidad de Tax de activar la ruta de NFB desempeña un papel esencial en la transformación celular inducida por HTLV-1 (Li et al., Gene Expr., 7, 4-6, 233-245 (1999)). Lentsch y Ward estudiaron la activación y la regulación de NFB durante la inflamación aguda y describieron la relación entre NFB y las proteínas inhibidoras de la familia IKappaB (Lentsch et al., Clin. Chem. Lab. Med., 37, 3, 205-208 (1999)). Visconti et al. investigó el papel de NFB en la carcinogénesis de tiroides analizando líneas celulares de carcinoma de tiroides. Sus estudios indicaron que la activación del complejo NFB mediante la sobreexpresión de la proteína p65 desempeñó un papel crítico en el proceso de transformación de las células tiroideas (Visconti et al., Oncogene, 15, 16, 1987-1994 (1997)). Mukhopadhyay et al. investigó la expresión de la subunidad p50 del complejo de factor de transcripción NFB en tejidos de carcinoma de pulmón no microcítico, lo que demostró que un 81% de los tejidos de cáncer de pulmón no microcítico recientes expresan niveles de dos a veinte veces mayores de la subunidad p50 que el tejido pulmonar normal (Mukhopadhyay et al., Oncogene, 11,5,999-1003 (1995)). Khaled et al. seleccionó como objetivo la expresión génica de p50 con oligodesoxinucleótidos antisentido modificados con fosforotioato en 3' específicos y fue capaz de reducir la expresión de NFB. Sus resultados demostraron que las moléculas antisentido de p50 podían reducir la expresión de NFB y podían inhibir la respuesta inmunitaria proporcionando un posible tratamiento para los trastornos autoinmunitarios (Khaled et al., Clin. Immunol. Immunopathol., 83, 3, 254-263 (1997)).

Pahl (Oncogene, Vol. 18, Nº 49, 1999, págs. 6853-6866) describe activadores y genes objetivo de los factores de transcripción Rel/NF-kappa B. Además, Mukhopadhyay (J. Biol. Chem., Vol. 274, Nº 23, 1999, págs. 15978-15981) describe una citocina denominada THANK que activa el factor nuclear B.

Sumario de la Invención

De acuerdo con la presente invención, se proporcionan las secuencias de ácidos nucleicos que codifican el factor inductor del factor nuclear B (NFIF) 14b y 7a. También se incluyen cADNs que codifican NFIF-14b y NFIF-7a y polipéptidos NFIF-14b y NFIF-7a aislados y purificados que inducen NF

B. La presente invención incluye además los vectores de expresión que expresan los polipéptidos NFIF14b y NFIF-7a. Los ejemplos de los vectores de expresión preferidos son los vectores retrovirales, los vectores adenovirales, los vectores adeno-asociados, herpes, los vectores de herpesvirus y los vectores de ADN desnudo. La presente invención también proporciona composiciones que comprenden un polipéptido NFIF-14b o NFIF-7a y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Otro aspecto de la presente invención son las composiciones para disminuir la expresión del gen de NFIF que comprenden un ácido nucleico antisentido. Aún otro aspecto de la presente invención es una composición para disminuir la actividad de un polipéptido NFIF que comprenden un anticuerpo neutralizante que se une a un polipéptido NFIF y que disminuye su actividad.

Aún otra realización de la presente invención es una composición para disminuir la expresión de NFIF en un paciente que comprende una ribozima que corta el ARN que codifica un polipéptido NFIF.

La presente invención proporciona métodos para determinar si un compuesto de ensayo es eficaz para inhibir la actividad de los polipéptidos NFIF-14b que comprenden (A) comparar el nivel de la expresión del gen regulado por NFB en una primera muestra que comprende: (1) NFIF-14b; (2) el gen indicador regulado por NFB; y (3) el compuesto de ensayo con el nivel de expresión del gen en una segunda muestra que comprende (4) NFIF-14b; y (5) el gen indicador regulado por NFB; y (B) determinar si la expresión del gen indicador es menor en la primera muestra respecto de la segunda muestra.

Aún otro aspecto de la presente invención proporciona métodos para determinar si un compuesto de ensayo es eficaz en la inhibición de la actividad de los polipéptidos NFIF-7a que comprende (A) comparar el nivel de la expresión del gen regulado por NFB en una primera muestra que comprende: (1) NFIF-7a; (2) el gen indicador regulado por NFB; y (3) el compuesto de ensayo con el nivel de expresión del gen en una segunda muestra que comprende (4) NFIF-7a; y (5) el gen indicador regulado por NFB; y (B) determinar si la expresión del gen indicador es menor en la primera muestra respecto de la segunda muestra.

Aún otro aspecto de la presente invención proporciona un método para identificar si un compuesto de ensayo puede estimular la actividad de NFIF-14b basado en la expresión de un gen indicador regulado por NFB que comprende (A) comparar el nivel de expresión del gen regulado por NFB en una primera muestra que comprende (1) NFIF-14b; (2) el gen indicador regulado por NFB; y

(3) el compuesto de ensayo con el nivel de expresión del gen en una segunda muestra que comprende:

(4) NFIF-14b; y (5) el gen indicador regulado por NFB; y (B) determinar si la expresión del gen indicador es mayor en la primera muestra respecto de la segunda muestra.

Otro aspecto de la presente invención proporciona un método para identificar si un compuesto de ensayo puede estimular la actividad de NFIF-7a basado en la expresión de un gen indicador regulado por NFB que comprende (A) comparar el nivel de expresión del gen regulado por NFB en una primera muestra que comprende (1) NFIF-7a; (2) el gen indicador regulado por NFB; y (3) el compuesto de ensayo con el nivel de expresión del gen en una segunda muestra que comprende: (4) NFIF-7a; y (5) el gen indicador regulado por NFB; y (B) determinar si la expresión del gen indicador es mayor en dicha primera muestra respecto de la segunda muestra.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un polipéptido NFIF para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB. Aún otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un ácido nucleico que codifica un polipéptido NFIF, para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un vector recombinante que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido NFIF, para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB. Aún otro aspecto de la presente invención se refiere al uso de un vector viral recombinante deficiente para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta regulada por NFB.

Están disponibles dos secuencias que muestran similitudes con los polipéptidos de la presente invención en la biblioteca GenBank de secuencias de ácidos nucleicos. La primera secuencia, que...

1. Un ácido nucleico que codifica el polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear)-14b que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

2. Un ácido nucleico que codifica el polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear)-7a que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

3. El ácido nucleico de la reivindicación 1, en el que dicho ácido nucleico es un cADN.

4. El ácido nucleico de la reivindicación 2, en el que dicho ácido nucleico es un cADN.

5. Un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear)-14b aislado y purificado que induce NFB y que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

6. Un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear)-7a aislado y purificado que induce NFB y que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

7. Un vector de expresión que comprende un ácido nucleico de la reivindicación 1 unido de manera operable a una secuencia de control.

8. El vector de expresión de la reivindicación 7, en el que dicho vector de expresión se selecciona del grupo que consiste en vectores retrovirales, vectores adenovirales, vectores de virus adeno-asociados, vectores herpesvirales, y vectores de ADN desnudo.

9. Un vector de expresión que comprende un ácido nucleico de la reivindicación 2 unido de manera operable a una secuencia de control.

10. El vector de expresión de la reivindicación 9, en el que dicho vector de expresión se selecciona del grupo que consiste en vectores retrovirales, vectores adenovirales, vectores de virus adeno-asociados, vectores herpesvirales, y vectores de ADN desnudo.

11. Una composición que comprende un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear)-14b en el que dicho polipéptido induce NFB y comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

12. Una composición que comprende un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear)-7a en el que dicho polipéptido induce NFB y comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. Una composición que comprende un ácido nucleico antisentido complementario a un ácido nucleico que codifica un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear)-14b y/o NFIF-7a seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1 y 2.

14. Una composición que comprende un anticuerpo neutralizante que se une al polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear)-14b y/o NFIF-7a seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1 y 2 y que disminuye su actividad.

15. Una composición que comprende una ribozima que corta el ARN que codifica un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear)-14b y/o NFIF-7a seleccionado del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1 y 2.

16. Un método para determinar si un compuesto de ensayo es eficaz en la inhibición de la actividad de NFIF (factor inductor del factor nuclear)-14b basado en la expresión de un gen indicador regulado por NFKB que comprende:

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(A) comparar el nivel de expresión del gen regulado por NFB en una primera muestra que comprende: (1) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO: 1; (2) dicho gen indicador regulado por NFB; y (3) dicho compuesto de ensayo con el nivel de expresión del gen indicador regulado por NFB en una segunda muestra que comprende (4) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO: 1; y (5) dicho gen indicador regulado por NFB; y

(B) determinar si la expresión de dicho gen indicador regulado por NFB es menor en dicha primera muestra respecto de dicha segunda muestra.

17. Un método para determinar si un compuesto de ensayo es eficaz en la inhibición de la actividad de NFIF (factor inductor del factor nuclear)-7a basado en la expresión de un gen indicador regulado por NFB que comprende:

(A) comparar el nivel de expresión del gen regulado por NFB en una primera muestra que comprende: (1) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO: 2; (2) dicho gen indicador regulado por NFB; y (3) dicho compuesto de ensayo con el nivel de expresión del gen indicador regulado por NFB en una segunda muestra que comprende: (4) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO: 2; y (5) dicho gen indicador regulado por NFB; y

(B) determinar si la expresión de dicho gen indicador regulado por NFB es menor en dicha primera muestra respecto de dicha segunda muestra.

18. Un método para identificar si un compuesto de ensayo puede estimular la actividad de NFIF (factor inductor del factor nuclear)-14b basado en la expresión de un gen indicador regulado por NFB que comprende:

(A) comparar el nivel de expresión del gen regulado por NFB en una primera muestra que comprende (1) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO: 1; (2) dicho gen indicador regulado por NFB; y (3) dicho compuesto de ensayo con el nivel de expresión del gen indicador regulado por NFB en una segunda muestra que comprende: (4) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO: 1; y (5) dicho gen indicador regulado por NFB; y

(B) determinar si la expresión de dicho gen indicador regulado por NFB es mayor en dicha primera muestra respecto de dicha segunda muestra.

19. Un método para identificar compuestos que estimulan la actividad de NFIF (factor inductor del factor nuclear)-7a basado en la expresión de un gen indicador regulado por NFB que comprende:

(A) comparar el nivel de expresión del gen regulado por NFB en una primera muestra que comprende: (1) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO: 2; (2) dicho gen indicador regulado por NFB; y (3) dicho compuesto de ensayo con el nivel de expresión del gen indicador regulado por NFB en una segunda muestra que comprende: (4) una secuencia de aminoácidos que comprende SEQ ID NO: 2; y (5) dicho gen indicador regulado por NFB; y

(B) determinar si la expresión de dicho gen indicador regulado por NFB es mayor en dicha primera muestra respecto de dicha segunda muestra.

20. El uso de un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear) aislado que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB.

21. El uso de un ácido nucleico que codifica un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear) que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB.

22. El uso de un vector recombinante que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear) que comprende una secuencia

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de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB.

23. El uso de un vector viral recombinante deficiente que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear) que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB.

24. El uso de un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear) aislado que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB.

25. El uso de un ácido nucleico que codifica un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear) que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB.

26. El uso de un vector recombinante que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear) que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB.

27. El uso de un vector viral recombinante deficiente que comprende un ácido nucleico que codifica un polipéptido NFIF (factor inductor del factor nuclear) que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 para la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento y/o la prevención de una respuesta inflamatoria regulada por NFB.

28. Una célula cultivada que comprende el vector de la reivindicación 8 ó 10.

29. Una célula cultivada transfectada con el vector de la reivindicación 8 ó 10, en la que la célula expresa dicho polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 ó 2.

30. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de una secuencia de ácido nucleico expresable aislada que codifica una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 ó 2, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

31. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un vector recombinante que comprende una secuencia de ácido nucleico expresable que codifica una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 ó 2, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

32. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un vector viral recombinante deficiente que comprende una secuencia de ácido nucleico expresable que codifica una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 ó 2, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.