USO DE LA PROTEINA S100A12, COMO MARCADOR PARA EL CANCER COLORRECTAL.

Un procedimiento para la diagnosis del cáncer colorrectal, que comprende las etapas de

a) proporcionar una muestra de heces,

obtenida de un individuo,

b) contactar la citada muestra, con un agente de unión específico para la S100A12, bajo unas condiciones apropiadas para la formación de un complejo entre el citado agente de enlace o unión y la S100A12,

c) determinar la cantidad de complejo formado en la etapa b) y

d) correlacionar la cantidad de complejo formado en (c), a la diagnosis del cáncer colorrectal

Uso de la proteína S100A12, como marcador para el cáncer colorrectal.

La presente invención, se refiere al diagnóstico de cáncer colorrectal. Ésta da a conocer el uso de la proteína S100A12 (= Calgranulina C), como molécula marcadora en el diagnóstico del cáncer colorrectal. Adicionalmente, además, ésta se refiere, de una forma especial, a un procedimiento para la diagnosis del cáncer colorrectal, a partir de una muestra de heces, derivada de un individuo, procediendo a medir la S100A12, en la citada muestra. La medición de la S100A12, puede utilizarse en la detección temprana o diagnosis de cáncer colorrectal.

El cáncer, continúa siendo un desafío mayor en cuanto a lo referente a la salud pública, a pesar del progreso habido en la detección y la terapia. De entre varios tipos de cáncer, el cáncer colorrectal (=CRC), es uno de los cánceres más frecuentes, en el mundo occidental.

Cuanto más tempranamente puede detectarse/diagnosticarse el cáncer, más alto es la tasa total de supervivencia. Esto es especialmente cierto, para el CRC. La prognosis, en estados avanzados del tumor, es pobre. Más de un tercio de los pacientes, morirán, a raíz de una enfermedad progresiva, dentro de los cinco años a partir de la diagnosis, correspondiendo a una tasa de supervivencia de aproximadamente el 40%, para cinco años. El tratamiento actual, cura únicamente a una fracción de los pacientes y, claramente, tiene los mejores efectos, en aquéllos pacientes diagnosticados en una etapa temprana de la enfermedad.

Con respecto a lo referente al CRC, como un problema de salud pública, es esencial que se desarrollen medidas de rastreo y preventivas más efectivas, para el cáncer colorrectal.

Los procedimientos de detección más temprana disponibles en el momento presente, para el cáncer colorrectal, involucran la utilización de procedimientos de tests de ensayo para la sangre fecal o de endoscopia. No obstante, debe existir un significativo tamaño del tumor, antes de que se detecte sangre fecal. Con respecto a la detección del CRC, a partir de una muestra de heces, el estado actual del arte correspondiente a la técnica especializada, es el test de ensayo de sangre oculta fecal, basados en el ensayo de guaiac.

En los años recientes, se ha reportada una tremenda cantidad de los denominados genes específicos del colon o genes específicos del cáncer colorrectal. La inmensa mayoría de los correspondientes documentos de investigación o de solicitudes de patente, se basan en datos obtenidos mediante análisis de modeles patrón de expresión de RNA, en el tejido de (cáncer de) colon, con respecto a un tejido diferente o un tejido normal contiguo, respectivamente. Tales tipos de enfoques o métodos para abordar el problema, pueden resumirse como técnicas de exhibición de mRNA diferencial.

Como ejemplo, para los datos disponibles para las técnicas de exhibición del mRNA, puede mencionarse y discutirse el documento de patente internacional WO 01/96 390. Esta solicitud, describe y reivindica más de doscientos polinucleótidos aislados y los correspondientes polipéptidos, como tales, así como su uso en la detección del CRC. No obstante, es de un conocimiento general, el hecho de que, las diferencias, en el nivel de mRNA, no se reflejan mediante el nivel de las correspondientes proteínas. Una proteína codificada por un mRNA raro, puede encontrarse en unas cantidades muy grandes, y una proteína codificada por un mRNA abundante, puede no obstante ser difícil de detectar y de encontrar. Esta falta de correlación entre el nivel de mRNA y el nivel de proteína, se debe a razones tales la estabilidad del mRNA, eficacia de traducción, estabilidad de la proteína, etc.

Existen, también, métodos recientes de enfoque del problema, que investigan las diferencias en los modelos patrón de las proteínas, entre diferentes tejidos o entre tejido sano y un tejido enfermo, con objeto de identificar las moléculas marcadores candidatas que puedan utilizarse en la diagnosis del CRC. Brünagel, G. et al., Cancer Research 62 (2002) 2437 - 2447, han identificado siete proteínas matrices nucleares, las cuales aparecen, de una forma abundante, en el tejido del CRC, si se compara con el tejido normal contiguo. No se reportan datos sobre muestras de líquidos o de heces, procedentes de un individuo.

El documento de patente internacional WO 02/078 636, reporta sobre nueve puntos o manchas asociados con el cáncer colorrectal, que se encuentran mediante desorción y ionización mejoradas por láser, de superficie (SELDI). Estos puntos o manchas, se ven, de una forma más frecuente, en el suero obtenido de pacientes con CRC, si se compara con suero obtenido de controles sanos. No obstante, la identidad de la(s) molécula(s), comprendidas en dichos puntos o manchas, no se conoce, por ejemplo, no se conoce su secuencia.

A pesar de amplia lista y siempre creciente de marcadores de proteínas candidatos, en el sector del CRC, hasta hoy, no se conoce la utilidad clínica/de diagnóstico de estas moléculas. Con objeto de ser de utilidad clínica, un nuevo marcador de diagnóstico, como marcador individual, debería ser por lo menos tan bueno como el mejor marcador individual conocido en el arte especializado de la técnica. Ahora bien, un nuevo marcador, debería conducir a un progreso en la sensibilidad y/o especificidad de diagnóstico, tanto si se utiliza individualmente como si se utiliza en combinación con uno o más marcadores distintos, respectivamente. La sensibilidad y/o especificidad del diagnóstico de un test de ensayo, se valora, a menudo, por sus características operativas para el destinatario, las cuales se describirán abajo, a continuación, en mayor detalle.

En el momento presente, por ejemplo, se encuentran disponibles los tests de ensayo de sangre, de diagnóstico, basados en la detección del antígeno carcinoembriónico (CEA), una glicoproteína asociada a tumores, para valorar la diagnosis en el sector del CRC. El CEA, se encuentra incrementado en un 95% de las muestras de tejido obtenidas de pacientes con Cáceres colorrectales, gástricos, y pancreáticos, en la mayoría de los carcinomas de pecho, de pulmón y de la cabeza y el cuello (Goldenberg, D.M. et al.,) Natl. Cancer Inst. (Bethesda) 57 (1976) 11-22). Niveles elevados del CEA, han sido también detectados en pacientes con enfermedades no malignas, y muchos pacientes con cáncer colorrectal, tienen niveles normales de CEA, el suero, especialmente, durante la etapa temprana de la enfermedad (Carriquiry, L.A. y Pineyro, A., Dis. Colon Rectum 42 (1999) 921-929; Herrera, M.A. et al., Ann. Surg. 183 (1976) 5-9; Wanebo, H.J. et al., N. Engl. J. Med. 299 (1978) 448-451). La utilidad del CEA, medido a partir del suero o plasma, en detector las reapariciones o recidivas, se ha reportado como siendo contradictorio o discutible, y debe todavía aplicarse de una forma extensa (Martell, R.E. et al., Int. J. Biol. Markers 13 (1998) 145-149; Moertel, C.G. et al., JAMA 270 (1993) 943-947). A la luz de los datos disponibles, la determinación del CEA en suero, no posee ni la sensibilidad no la especificidad para capacitar su uso como un test de ensayo de rastreo para el cáncer colorrectal, en la población asintomática. (Reynoso, G. et al., JAMA 220 (1972) 361-365; Sturgeon, C., Clin. Chem. 48 (2002) 1151-1159).

Muestras tomadas de heces, tienen la ventaja consistente en que, su muestreo, es fácilmente posible, mediante procedimientos no invasivos.

Tal y como se ha mencionado anteriormente, arriba, el ensayo de guaiac, se utiliza, actualmente, de una forma más extensa, como ensayo de rastreo o diagnóstico, para CRC, a partir de las heces. El ensayo de guaiac, no obstante, tiene tanto una sensibilidad reducida así como también, una especificidad reducida. La sensibilidad de los test de ensayo de sangre oculta fecal, basados en el teste de ensayo de guaiac, es de -26%, lo cual significa el hecho de que, un 74% de los pacientes con lesiones malignas, permanecen indetectados. (Ahlquist, D.A., Gastroenterol. Clin. North Am. 26 (1997) 41-55).

La visualización de lesiones precancerosas y cancerosas, representa el mejor método de abordar el problema de la detección temprana, pero, la colonoscopia, es invasiva, con unos significativos costes, riesgos y complicaciones (Silvis, S.E. et al., JAMA 235 (1976) 928-930; Geenen, J.E. et al., Am. J. Dig. Dis. 20 (1975) 231-235; Anderson, W.F. et al., J. Natl. Cancer Institute 94 (2002) 1126-1133).

La sensibilidad y especificidad de alternativas de diagnóstico al test de ensayo de guaiac, han sido...

1. Un procedimiento para la diagnosis del cáncer colorrectal, que comprende las etapas de

a) proporcionar una muestra de heces, obtenida de un individuo,

b) contactar la citada muestra, con un agente de unión específico para la S100A12, bajo unas condiciones apropiadas para la formación de un complejo entre el citado agente de enlace o unión y la S100A12,

c) determinar la cantidad de complejo formado en la etapa b) y

d) correlacionar la cantidad de complejo formado en (c), a la diagnosis del cáncer colorrectal.

2. Un procedimiento para la diagnosis del cáncer colorrectal, que comprende las etapas de

a) proporcionar una muestra de heces, obtenida de un individuo,

b) contactar la citada muestra líquida, con un agente de unión específico para la S100A12, bajo unas condiciones apropiadas para la formación de un complejo entre el citado agente de enlace o unión y la S100A12,

c) contactar la citada muestra líquida, con un segundo agente de unión específico para un segundo marcador, seleccionado de entre el grupo consistente en un complejo de hemoglobina/haptoglobina, hemoglobina, tejido inhibidor de metaloproteasas 1 (TIMP-1) y piruvato-quinasa M2 tumoral (M2PK), bajo unas condiciones apropiadas para la formación de un complejo entre el citado agente de enlace o unión y la S100A12,

d) detección de la cantidad de complejo formado en las etapas (b) y (c), y

e) correlacionar la cantidad de complejo determinado en la etapa (d), a la diagnosis del cáncer colorrectal.

3. El procedimiento según la reivindicación 2, en donde, el citado segundo marcador, es hemoglobina.

4. El procedimiento según la reivindicación 2, en donde, el citado segundo marcador, es el complejo de hemoglobina/haptoglobina.

5. El procedimiento según la reivindicación 2, en donde, el citado segundo marcador, es TIMP-1.

6. El procedimiento según la reivindicación 2, en donde, el citado segundo marcador, es M2-PK.

7. Uso de la proteína S100A12, como molécula marcadora en la diagnosis del cáncer colorrectal, a partir de una muestra de heces obtenida de un individuo.

8. Uso de la proteína S100A12, como molécula marcadora en la diagnosis temprana del cáncer colorrectal, a partir de una muestra de heces obtenida de un individuo.

9. Uso de la proteína S100A12, como molécula marcadora para el cáncer colorrectal, en combinación con una o más moléculas marcadoras distintas para el cáncer colorrectal, seleccionadas de entre el grupo consistente en complejo de hemoglobina/haptoglobina, hemoglobina, tejido inhibidor de metaloproteasas 1 (TIMP-1) y piruvato-quinasa M2 tumoral (M2PK), en diagnosis del cáncer colorrectal, a partir de una muestra de heces obtenida de un individuo.