COMBINACION DE CPG Y ANTICUERPOS DIRIGIDOS CONTRA CD19, CD20, CD22 O CD40 PARA EL TRATAMIENTO O PREVENCION DE CANCER.

Un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado y una capacidad de regular hacia niveles mayores la expresión de un antígeno,

y un anticuerpo específico para dicho antígeno, en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40, para usar en el tratamiento o la prevención del cáncer

Combinación de CpG y anticuerpos dirigidos contra CD19, CD20, CD22 o CD40 para el tratamiento o prevención de cáncer.

Campo de la invención

La invención se refiere al tratamiento y la prevención del cáncer usando ácidos nucleicos inmunoestimuladores y anticuerpos.

Campo de la invención

El cáncer es la segunda causa principal de mortalidad, que provoca una de cada cuatro muertes en los Estados Unidos. En 1997, el número total estimado de nuevos diagnósticos de cáncer de pulmón, mama, próstata, colorrectal y ovárico fue de aproximadamente dos millones. Debido al cada vez mayor envejecimiento de la población en los Estados Unidos, es razonable esperar que las tasas de incidencia del cáncer continúen creciendo.

El cáncer es una enfermedad que conlleva el desarrollo (es decir, la división) incontrolada de células. Algunos de los mecanismos conocidos que contribuyen a la proliferación incontrolada de las células cancerosas incluyen independencia de factores de crecimiento, incapacidad de detectar una mutación genómica y señalización celular inapropiada. La capacidad de las células cancerosas de ignorar los controles normales a la división puede provocar una mayor velocidad de proliferación. Aunque no se han establecido categóricamente las causas del cáncer, existen algunos factores que se sabe que contribuyen, o que al menos predisponen, a un sujeto al cáncer. Dichos factores incluyen mutaciones genéticas particulares (por ejemplo, mutación del gen BRCA para el cáncer de mama, APC para el cáncer de colon), exposición a agentes que se sospecha provocan cáncer, o cancerígenos (por ejemplo, amianto, radiación UV) y predisposición familiar a cánceres particulares tales como cáncer de mama.

El cáncer actualmente se trata usando una diversidad de modalidades que incluyen cirugía, radioterapia y quimioterapia. La elección de la modalidad de tratamiento dependerá del tipo, localización y diseminación del cáncer. Por ejemplo, la cirugía y la radioterapia pueden ser más apropiadas en el caso de masas tumorales sólidas bien definidas y pueden ser menos prácticas en el caso de los cánceres con tumores que no sean sólidos como las leucemias y los linfomas. Una de las ventajas de la cirugía y de la radioterapia es la capacidad de controlar en cierto grado el impacto de la terapia, y así limitar la toxicidad a los tejidos corporales normales. Sin embargo, la cirugía y la radioterapia a menudo vienen seguidas de quimioterapia para protegerse de las células cancerosas que queden o radiorresistentes. La quimioterapia también es el tratamiento más apropiado para los cánceres diseminados como leucemia y linfoma así como para las metástasis.

Más recientemente, se ha propuesto el uso de ácidos nucleicos que contienen CpG para el tratamiento y la prevención del cáncer. Los autores de la presente invención han encontrado que los dinucleótidos CG no metilados en ciertos contextos de secuencias (ADN con CpG) son reconocidos por el sistema inmunitario de los vertebrados como ADN exógeno (bacteriano o vírico). El ADN con CpG activa un conjunto coordinado de respuestas inmunitarias que incluyen inmunidad innata (macrófagos, células dendríticas, y linfocitos citolíticos naturales), inmunidad humoral, e inmunidad celular. Krieg AM et al., Pharmacol Ther 84:113-20 (1999); Krieg AM et al., Curr Top Microbiol Immunol 247:1-21 (2000); Wagner H, Adv Immunol 73:329-68 (1999). Como adyuvante para vacunas, el ADN con CpG es al menos igual de eficaz que el adyuvante completo de Freund (CFA) que es el adyuvante de referencia, pero induce una mayor actividad de tipo Th1 y muestra una menor toxicidad. Chu RS et al., J Exp Med 186:1623-31 (1997); Weiner GJ et al., Proc Natl Acad Sci USA 94:10833-7 (1997); Roman M et al., Nat Med 3:849-54 (1997); Lipford GB et al., Eur J Immunol 27:2340-4 (1997); Davis HL et al., J Immunol 160: 870-6 (1998). Recientemente, los autores de la presente invención identificaron un motivo CpG humano que desencadena la proliferación y la activación de los linfocitos B humanos primarios. Hartmann G et al., J Immunol 164:944-53 (2000).

Sumario de la invención

La invención se refiere en ciertos aspectos a procedimientos para el tratamiento y la prevención del cáncer usando ácidos nucleicos inmunoestimuladores y anticuerpos. Así en un aspecto la invención es un procedimiento para tratar o prevenir el cáncer.

Un primer aspecto de la presente invención proporciona un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado y la capacidad de regular hacia niveles mayores la expresión de un antígeno, y un anticuerpo específico para dicho antígeno, en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40, para uso en el tratamiento o la prevención del cáncer.

Un segundo aspecto de la presente invención proporciona el uso de un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado y la capacidad de regular hacia niveles mayores la expresión de un antígeno para la fabricación de un medicamento, para uso, con un anticuerpo específico para dicho antígeno, en el tratamiento o la prevención del cáncer, en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40.

Un tercer aspecto de la presente invención proporciona el uso de un anticuerpo específico de antígeno para la fabricación de un medicamento para usar, junto con un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado y la capacidad de regular hacia niveles mayores la expresión de dicho antígeno, en el tratamiento o la prevención del cáncer, en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40.

Un cuarto aspecto de la presente invención proporciona una composición para el tratamiento o la prevención del cáncer, que comprende un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado y un anticuerpo específico de antígeno, en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40 y el ácido nucleico inmunoestimulador es capaz de regular hacia niveles mayores la expresión de dicho antígeno.

Un quinto aspecto de la presente invención proporciona un kit que comprende un paquete que incluye al menos dos envases, donde el primer envase alberga un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado, el segundo envase alberga un anticuerpo específico para un antígeno de la superficie celular, e instrucciones para seleccionar una célula con el fin de determinar si el ácido nucleico inmunoestimulador regula hacia niveles mayores la expresión del antígeno de la superficie celular de la célula; en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40 y el ácido nucleico inmunoestimulador es capaz de regular hacia niveles mayores la expresión de dichos antígenos.

Un procedimiento para tratar el cáncer supone administrar a un sujeto que tiene o con riesgo de desarrollar cáncer, una cantidad eficaz para regular hacia niveles mayores la expresión de CD20 de un ácido nucleico, y un anticuerpo contra CD20. El cáncer, en algunas realizaciones, es linfoma de linfocitos B asociado a niveles bajos de expresión de CD20. El linfoma de linfocitos B en otras realizaciones es leucemia linfocítica crónica de linfocitos B (B-CLL) o un linfoma de zona marginal. En algunas realizaciones el anticuerpo contra CD20 es C2B8 o Rituximab.

La invención en otros aspectos se refiere a un procedimiento para diagnosticar el linfoma aislando un linfocito B de un sujeto e identificando un cambio en los marcadores de la superficie celular cuando el linfocito B se pone en contacto con un ácido nucleico inmunoestimulador, en el que el marcador de la superficie celular inducido sobre el linfocito B es indicador de un tipo de linfoma. En algunas realizaciones el sujeto tiene un tipo de linfoma. En algunas realizaciones se sospecha que el sujeto tiene un tipo de linfoma. El procedimiento opcionalmente puede incluir un procedimiento para tratar cáncer administrando al sujeto un ácido nucleico inmunoestimulador y un anticuerpo específico para los antígenos de la superficie celular inducidos sobre el linfocito B para tratar el cáncer.

Otro aspecto de la revelación es un procedimiento para tratar o prevenir el cáncer administrando a un sujeto que tiene o con riesgo de desarrollar cáncer una cantidad eficaz para inducir la expresión de un antígeno superficial sobre la superficie de una célula cancerosa, de un ácido nucleico, y administrar al sujeto un anticuerpo que se selecciona del grupo constituido por un anticuerpo contra CD22 y un anticuerpo contra CD19.

De...

1. Un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado y una capacidad de regular hacia niveles mayores la expresión de un antígeno, y un anticuerpo específico para dicho antígeno, en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40, para usar en el tratamiento o la prevención del cáncer.

2. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, en los que el cáncer es un linfoma.

3. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 2, en los que el linfoma es linfoma de linfocitos B asociado a bajos niveles de expresión de CD20.

4. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 2, en los que el linfoma es B-CLL o linfoma de la zona marginal.

5. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 2, en los que el linfoma es resistente al tratamiento con el anticuerpo.

6. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en los que el anticuerpo es un anticuerpo IgG1 humano o un anticuerpo IgG2a murino.

7. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 6, en los que el antígeno es CD22 y el anticuerpo es un anticuerpo IgG1 humano o IgG2a murino contra CD22.

8. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 6, en los que el antígeno es CD19 y el anticuerpo es un anticuerpo IgG1 humano o IgG2a murino contra CD19.

9. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en los que el antígeno es CD20 y el anticuerpo es C2B8 o Rituximab.

10. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en los que el ácido nucleico no se hibrida con el ADN o ARN genómico en condiciones restrictivas.

11. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en los que el ácido nucleico es:

a) un ácido nucleico rico en T inmunoestimulador;

b) un ácido nucleico con poli-G inmunoestimulador; y/o

c) ADN bacteriano.

12. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en los que el ácido nucleico tiene un esqueleto modificado, que es preferiblemente una modificación de fosfato en el esqueleto y/o un esqueleto oligonucleotídico con péptidos modificados.

13. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en los que el ácido nucleico:

a) tiene de 8 a 40 nucleótidos de longitud;

b) está aislado y/o;

c) es un ácido nucleico sintético.

14. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en los que el ácido nucleico y el anticuerpo se administran juntos o por separado.

15. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, para usar junto con una terapia anticancerosa preferiblemente un agente quimioterapéutico y/o una vacuna contra el cáncer.

16. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 15, en los que el agente quimioterapéutico se selecciona del grupo constituido por metotrexato, vincristina, adriamicina, cisplatino, mitomicina C, bleomicina, doxorrubicina, dacarbazina, taxol, valrrubicina, Novantrona/Mitroxantrona, Evacet/doxorrubicina en liposomas, Yewtaxan/Paclitaxel, Taxol/Paclitaxel, Furtulon/Doxifluridina, Cyclopax/paclitaxel oral, SPU-077/cisplatino, HMR 1275/Flavopiridol, BMS-182751/platino oral, Leustatina/Cladribina, Paxex/Paclitaxel, Doxil/doxorrubicina en liposomas, Caelyx/doxorrubicina en liposomas, Fludara/Fludarabina, Farmorrubicina/Epirrubicina, DepoCyt, Caetyx/ doxorrubicina en liposomas, Gemzar/Gemcitabina, Ifes/Mesnex/Ifosamida, Vumon/Tenipósido, Paraplatino/Carbo- platino, Plantionol/cisplatino, Vepesida/Etopósido, Taxotere/Docetaxel, profármaco de guanina arabinosido, nitrosoureas, Asparraginasa, Busulfán, Carboplatino, Clorambucilo, Citarabina HCl, Daunorrubicina HCl, Etopósido (VP16-213), Hidroxiurea (hidroxicarbamida), Ifosfamida, Interferón Alfa-2a, Interferón Alfa-2b, Lomustina (CCNU), Mecloretamina HCl (mostaza de nitrógeno), Mercaptopurina, Mesna, Mitoxantrona HCl, Procarbazina HCl, Tioguanina, Tiotepa, Vinblastina sulfato, Azacitidina, Interleucina 2, Pentostatina (2'-desoxicoformicina), Tenipósido (VM-26), GM-CSF y Vindesina sulfato.

17. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 15, en los que el agente quimioterapéutico se selecciona del grupo constituido por metotrexato, vincristina, adriamicina, cisplatino, cloroetilnitrosoureas que no contienen azúcares, 5-fluorouracilo, mitomicina C, bleomicina, doxorrubicina, dacarbazina, taxol, fragilina, meglamina GLA, valrrubicina, carmustaína y poliferposán, MM1270, BAY 12-9566, Inhibidor de farnesil transferasa de RAS, inhibidor de farnesil transferasa, MMP, MTA/LT231514, LY264618/Lometexol, Glamotec, CI-994, TNP-470, Hycamtina/Topotecán, PKC412, Valspodar/PSC833, Novantrona/Mitroxantrona, Metaret/Suramina, Batimastat, E7070, BCH-4556, CS-682, 9-AC, AG3340, AG3433, Incel/VX-710, VX-853, ZD0101, ISI641, ODN 698, TA 2516/Marmistat, BB2516/Marmistat, CDP 845, D2613, PD183805, DX8951f, Lemonal DP 2202, FK 317, Picibanilo/OK-432, AD32/Valrrubicina, metastrona/derivado de estroncio, Temodal/Temozolomida, Evacet/doxorrubicina en liposomas, Yewtaxan/Paclitaxel, Taxol/Paclitaxel, Xeload/Capecitabina, Furtulon/Doxifluridina, Cyclopax/paclitaxel oral, Taxoide oral, SPU-077/cisplatino, HMR 1275/Flavopiridol, CP-358 (774)/EGFR, CP-609 (754)/inhibidor del oncogén RAS, BMS-182751/platino oral, UFT (Tegafur/Uracilo), Ergamisol/Levamisol, Eniluracilo/776C85/potenciador de 5FU, Campto/Levamisol, Camptosar/Irinotecán, Tumodex/Ralitrexed, Leustatina/Cladribina, Paxex/Paclitaxel, Doxil/doxorrubicina en liposomas, Caelyx/doxorrubicina en liposomas, Fludara/Fludarabina, Farmarrubicina/Epirrubi- cina, DepoCyt, ZD 1839, LU 79553/Bis-Naftalimida, LU 103793/Dolastaína, Caetyx/doxorrubicina en liposomas, Gemzar/Gemcitabina, ZD 0473/Anormed, YM 116, Semillas de yodo, inhibidores de CDK4 y CDK2, inhibidores de PARP, D4809/Dexifosamida, Ifes/Mesnex/Ifosamida, Vumon/Tenipósido, Paraplatino/Carboplatino, Plantinol/cispla- tino, Vepesida/Etopósido, ZD 9331, Taxotere/Docetaxel, profármaco de guanina arabinosido, análogo de taxano, nitrosoureas, agentes alquilantes como por ejemplo melfalán y ciclofosfamida, aminoglutetimida, asparraginasa, Busulfán, Carboplatino, Clorambucilo, Citarabina HCl, Dactinomicina, Daunorrubicina HCl, Estramustina fosfato sódico, Etopósido (VP 16-213), Floxuridina, Fluorouracilo (5-FU), Flutamida, Hidroxiurea (hidroxicarbamida), Ifosfamida, Interferón Alfa-2a, Interferón Alfa-2b, Leuprolida acetato (análogo del factor liberador de LHRH), Lomustina (CCNU), Mecloretamina HCl (mostaza de nitrógeno), Mercaptopurina, Mesna, Mitotano (o,p'-DDD), Mitoxantrona HCl, Octreotida, Plicamicina, Procarbazina HCl, Estreptozocina, Tamoxífeno citrato, Tioguanina, Tiotepa, Vinblastina sulfato, Amsacrina (m-AMSA), Azacitidina, Eritropoyetina, Hexametilmelamina (HMM), Interleucina 2, Mitoguazona (metil-GAG; metil glioxal bis-guanilhidrazona; MGBG), Pentostatina (2'-desoxicoformicina), Semustina (metil-CCNU), Tenipósido (VM-26), GM-CSF y Vindesina sulfato.

18. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 15, en los que el agente quimioterapéutico se selecciona del grupo constituido por metotrexato, vincristina, adriamicina, cisplatino, mitomicina C, bleomicina, doxorrubicina, dacarbazina, taxol, valrrubicina, Novantrona/Mitroxantrona, Evacet/doxorrubicina en liposomas, Yewtaxan/Paclitaxel, Taxol/Paclitaxel, SPU-077/cisplatino, HMR 1275/Flavopiridol, BMS-182751/platino oral, Leustatina/Cladribina, Paxex/Paclitaxel, Doxil/doxorrubicina en liposomas, Caelyx/doxorrubicina en liposomas, Fludara/Fludarabina, Farmorrubicina/Epirrubicina, DepoCyt, Caetyx/doxorrubicina en liposomas, Gemzar/Gemcitabina, Ifes/Mesnex/Ifosamida, Vumon/Tenipósido, Paraplatino/Carboplatino, Plantinol/cisplatino, Vepesida/Etopósido, Taxotere/Docetaxel, profármaco de guanina arabinosido, nitrosoureas, agentes alquilantes como por ejemplo melfalán y ciclofosfamida, Asparraginasa, Busulfán, Carboplatino, Clorambucilo, Citarabina HCl, Daunorrubicina HCl, Etopósido (VP16-213), Hidroxiurea (hidroxicarbamida), Ifosfamida, Interferón Alfa-2a, Interferón Alfa-2b, Lomustina (CCNU), Mecloretamina HCl (mostaza de nitrógeno), Mercaptopurina, Mitoxantrona HCl, Procarbazina HCl, Tioguanina, Tiotepa, Vinblastina sulfato, Azacitidina, Interleucina 2, Pentostatina (2'-desoxicoformicina), Tenipósido (VM-26), GM-CSF y Vindesina sulfato.

19. Un ácido nucleico y un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 15, en los que la vacuna contra el cáncer se selecciona del grupo constituido por EGF, vacunas anticancerosas anti-idiotípicas, antígeno Gp75, vacuna contra el melanoma GMK, vacuna conjugada contra gangliósido MGV, Her2/neu, Ovatex, M-Vax, O-Vax, L-Vax, teratopo STn-KHL, BLP25 (MUC-1), vacuna idiotípica en liposomas, Melacina, vacunas contra antígenos peptídicos, vacunas contra toxinas/antígenos, vacuna a base de MVA, PACIS, vacuna contra BCG, TA-HPV, TA-CIN, virus DISC e ImmuCyst/TheraCys.

20. Uso de un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado y una capacidad de regular hacia niveles mayores la expresión de un antígeno para la fabricación de un medicamento, para usar, con un anticuerpo específico para dicho antígeno, en el tratamiento o la prevención del cáncer, en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40.

21. Uso de un anticuerpo específico de antígeno para la fabricación de un medicamento para usar, junto con un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado y una capacidad de regular hacia niveles mayores la expresión de dicho antígeno, en el tratamiento o la prevención del cáncer, en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40.

22. Un uso de acuerdo con la reivindicación 20 ó 21, como se define además en una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 19.

23. Una composición para el tratamiento o la prevención del cáncer, que comprende un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado y un anticuerpo específico de antígeno, en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40 y el ácido nucleico inmunoestimulador es capaz de regular hacia niveles mayores la expresión de dicho antígeno.

24. Una composición de acuerdo con la reivindicación 23, en la que el anticuerpo es un anticuerpo IgG1 humano o un anticuerpo IgG2a murino.

25. Una composición de acuerdo con la reivindicación 23, en la que el antígeno es CD22 y el anticuerpo es un anticuerpo IgG1 humano o IgG2a murino contra CD22.

26. Una composición de acuerdo con la reivindicación 23, en la que el antígeno es CD19 y el anticuerpo es un anticuerpo IgG1 humano o IgG2a murino contra CD19.

27. Una composición de acuerdo con la reivindicación 23, en la que el antígeno es CD20 y el anticuerpo es C2B8 o Rituximab.

28. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 27, en la que el ácido nucleico no se hibrida con el ADN o ARN genómico en condiciones restrictivas.

29. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 28, en la que el ácido nucleico es:

a) un ácido nucleico rico en T inmunoestimulador;

b) un ácido nucleico con poli-G inmunoestimulador; y/o

c) ADN bacteriano.

30. Una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 23 a 29, en la que el ácido nucleico tiene un esqueleto modificado, que es preferiblemente una modificación de fosfato en el esqueleto y/o un esqueleto oligonucleotídico con péptidos modificados.

31. Una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 23 a 30, en la que el ácido nucleico:

a) tiene de 8 a 40 nucleótidos de longitud;

b) está aislado y/o;

c) es un ácido nucleico sintético.

32. Un kit que comprende un paquete que incluye al menos dos envases, donde el primer envase alberga un ácido nucleico inmunoestimulador que tiene un motivo CpG no metilado, el segundo envase alberga un anticuerpo específico para un antígeno de la superficie celular, e instrucciones para seleccionar una célula con el fin de determinar si el ácido nucleico inmunoestimulador regula hacia niveles mayores la expresión del antígeno de la superficie celular de la célula; en el que el antígeno es un antígeno CD19, CD20, CD22 o CD40 y el ácido nucleico inmunoestimulador es capaz de regular hacia niveles mayores la expresión de dicho antígeno.