Procedimiento in vitro para inhibir una respuesta celular mediada por el polipéptido p30,

que comprende (a) proporcionar un anticuerpo anti-p30, y (b) poner en contacto una célula que expresa el polipéptido p30 expresado en la superficie celular con una cantidad de un anticuerpo anti-p30 suficiente para inhibir la respuesta celular del linfocito mediada por el polipéptido p30

CAMPO DE LA INVENCIÓN

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La invención se refiere generalmente a compuestos y procedimientos útiles en la regulación de respuestas inmunitarias y de la infección vírica.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 10

El virus herpético simple (VHS), tipos 1 y 2, produce infecciones recidivas que oscilan en gravedad de benignas a graves. El VHS aparece en estado latente en neuronas para infectar la piel y otros tejidos en presencia de un sistema inmunitario celular competente. La glucoproteína D (gD) del VHS, proteína transmembranaria situada en la 15 envoltura del virión, inicia la infección uniéndose a receptores celulares (Spear et al., (1993) Viral Fusion Mechanisms. Ed. Bentz. CRC press, Boca Raton). Recientemente, se identificó una proteína celular utilizada por el VHS para infección y se la denominó mediador de la entrada del VHS (MEVH) (Montgomery (1996) Cell 87: 427). El MEVH es una proteína transmembranaria de tipo 1 con un dominio extracelular rico en cisteína que 20 presenta homología significativa con los receptores para las citocinas relacionadas con el factor de necrosis tumoral (FNT) (Smith et al., (1994) Cell 76:959; Ware et al., (1995) en Pathways of Cytolysis. Eds. Griffiths y Tschopp. Springer-Verlag, Basilea). Muchos de los miembros de la superfamilia del FNT inician una variedad de respuestas celulares necesarias para montar respuestas inflamatorias e inmunitarias eficaces. 25

El FNT es una proteína transmembranaria de tipo 2 (Pennica (1984) Nature 312:724) que se proteoliza para formar la proteína segregada (Black (1997) Nature 385:729), mientras que LTα carece de dominio transmembranario (Gray (1984) Nature 312:721) y es segregada exclusivamente como homotrímero (en esta forma era también 30 conocida como FNTB. Cuando se expresa como proteína de superficie LTα está asociada a una proteína de 33 kDa (Androlewicz (1992) J. Biol. Chem. 267:2542), denominada LTβ (Browning (1993) Cell 72:847), también de tipo 2 una glucoproteína transmembranaria en heterotrímeros de relaciones de subunidad α1β2 y α2β1 (Androlewicz (1992) más arriba; Browning (1996) J. Biol. Chem 271: 8618). Tanto LTα como FNT se unen y señalan 35 mediante dos receptores, el receptor FNT de 55 a 60 kDa (RFNT60; CD120a o tipo 1) (Schall (1990) Cell 61:361; Loetscher (1990) Cell 61:351) y el RFNT de 75 a 80 kDa; tipo 2 o CD120b) (Smith (1990) Science 248:1019). En cambio, el complejo LT α1β2 de superficie es reconocido específicamente por el receptor LTβ (RLTβ) (Crowe (1994) Science 264:707), que no se une a LTα ni a FNT (Crowe (1994) anteriormente) mientras 40 que ambos RFNT se unen al heterotrímero LTα2β1 (Crowe (1994) anteriormente Browning (1995) J. Immunol. 154:33).

Las eliminaciones genéticas de los genes LTα y LTβ en ratones han dado a conocer funciones para estos dos genes en el desarrollo de nodos linfáticos y de parches 45 de Peyer (De Togni (1994) Science 264:703; Banks (1995) J. Immunol. 155:1685), y junto con FNT y RFNT60 son también citocinas críticas que controlan la formación de centros germinales y la alternación del isotipo de inmunoglobulina (por ejemplo, producción de IgA) durante las respuestas inmunitarias en adultos (Matsumoto (1996) Science 271:1289;

Mariathasan (1995) J. Inflammation 45:72). La mayoría de los estudios han apuntado hacia LTα1β2/RLTβ como sistema receptor de citocina crítico que controla estas funciones (Crowe (1994) Science 264:707; Koni (1997) Immunity 5:491; Ettinger (1996) Proc.Natl. Acad. Sci. U. 93:13102); Rennert (1996) J. Exp. Med. 184:1999).

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Harrop et al., (Journal of Biological Chemistry 273, 27548-27556 (1998)) describen el ligando mediador de la entrada del virus herpético (L-MEVH), que es un nuevo ligando para MEVH/TR2 y estimula la proliferación de linfocitos T e inhibe el crecimiento celular de HT29. Zhai et al., (J. Clin. Invest. 102, 1142-1151 (1998)) describe LIGHT, nuevo ligando para el receptor de linfotoxina β y TR2/MEVH que provoca apoptosis y suprime la 10 formación del tumor in vivo por transferencia génica. El documento WO 99/11662 describe un gen que codifica TANGO-69 que está previsto que sea el homólogo murino del ligando del MEVH humano, LIGHT. El documento WO 99/02563 describe p30 que funciona como ligando para MEVH. Mauri et al., (Immunity 8, 21-30 (1998)) describe que LIGHT, un nuevo miembro de la superfamilia del FNT y la linfotoxina α son ligandos para el mediador 15 de la entrada del virus herpético. El documento WO 00/14230 describe moléculas de polipéptidos y ácido nucleico, polipéptidos del receptor TANGO-69.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN 20

La presente invención está definida en las reivindicaciones y se basa en la identificación de un polipéptido endógeno que funciona como ligando para MEVH, que previamente era conocido solamente por unirse al gD del VHS. El ligando de la unión del MEVH, denominado también p30, o LIGHT, se describe también como secuencias de 25 ácidos nucleicos que codifican p30 y anticuerpos que se unen a p30.

Las utilizaciones de la invención sirven para tratar pacientes con enfermedades autoinmunitarias.

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La presente invención proporciona utilizaciones para inhibir un trastorno inflamatorio en un paciente de un agente tal como se define en las reivindicaciones que evita la interacción de p30 (LIGHT) con su receptor. El paciente, el tejido o la célula utilizados en los procedimientos de la presente invención puede ser cualquier paciente, tejido o célula, incluyendo de una especie de mamífero, pero preferentemente es un 35 paciente humano. Los agentes se administran in vivo, ex vivo o in vitro, dependiendo de la fuente (por ejemplo, todo el organismo, tejidos o células). Para la administración in vivo, o la puesta en contacto, el suministro puede ser por procedimientos generales o tópicos. El agente es un anticuerpo anti-p30.

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La invención proporciona un procedimiento in vitro para inhibir una respuesta celular mediada por el polipéptido p30, que comprende (a) suministrar una composición que inhibe el enlace de un polipéptido p30 expresado en la superficie de la célula a un MEVH o RLTβ expresado en la superficie celular, y (b) poner en contacto la célula que expresa el polipéptido p30 expresado en la superficie celular o MEVH o RLTβ expresado 45 en la superficie celular con una cantidad de composición suficiente para inhibir una respuesta celular mediada por el polipéptido p30. En una utilización correspondiente, la célula puede ponerse en contacto con la composición in vivo. En las formas de realización alternativas, la respuesta celular mediada por el polipéptido p30 inhibido comprende la

inhibición de una respuesta celular de linfocitos, la respuesta de linfocitos inhibidos es la proliferación de linfocitos, y el linfocito inhibido es una célula efectora patógena. La respuesta de linfocitos inhibidos puede comprender la modulación de un linfoma o leucemia T o B o una enfermedad autoinmunitaria. La enfermedad autoinmunitaria puede ser una artritis reumatoide, diabetes mellitus dependiente de insulina, esclerosis múltiple, 5 lupus eritematoso diseminado o miastenia grave. La respuesta de linfocitos inhibidos puede comprender la modulación de una reacción para un trasplante.

La célula contactada expresa el polipéptido p30 en su superficie celular y la composición es un anticuerpo anti-p30. 10

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

La figura 1A es un par de histogramas citométricos de flujo que muestran el enlace 15 de la proteína de fusión MEVH:Fc a las células II-23.D7 tras la activación con PMA (histograma superior) o PMA e ionomicina (histograma inferior).

La figura 1B es un par de histogramas citométricos de flujo que muestran el enlace de la proteína de fusión MEVH:Fc a linfocitos TCD4+humanos normales (histograma 20 superior) y CD8+ (histograma inferior).

La figura 1C es un gráfico de líneas que muestra el enlace de saturación de la proteína de fusión MEVH:Fc a las células II-23.D7 activadas.

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La figura...

1. Procedimiento in vitro para inhibir una respuesta celular mediada por el polipéptido p30, que comprende 5

(a) proporcionar un anticuerpo anti-p30, y

(b) poner en contacto una célula que expresa el polipéptido p30 expresado en la superficie celular con una cantidad de un anticuerpo anti-p30 suficiente para inhibir 10 la respuesta celular del linfocito mediada por el polipéptido p30.

2. Procedimiento in vitro según la reivindicación 1, en el que la respuesta del linfocito inhibida es la proliferación de linfocitos.

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3. Procedimiento in vitro según la reivindicación 1 ó 2, en el que el linfocito inhibido es una célula efectora patógena.

4. Utilización de un anticuerpo anti-p30 que inhibe la unión de un polipéptido p30 expresado en la superficie celular a un MEVH o un RLTβ expresado en la superficie 20 celular para la preparación de una composición farmacéutica destinada a inhibir una respuesta celular mediada por el polipéptido p30.

5. Utilización según la reivindicación 4, en la que la composición farmacéutica comprende un excipiente farmacéuticamente aceptable. 25

6. Anticuerpo anti-p30 que inhibe la unión de un polipéptido p30 expresado en la superficie celular a un MEVH o un RLTβ expresado en la superficie celular para su utilización en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria.

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7. Anticuerpo anti-p30 según la reivindicación 6, en el que la enfermedad autoinmunitaria es la artritis reumatoide, diabetes mellitus dependiente de insulina, la esclerosis múltiple, el lupus eritematoso diseminado o la miastenia grave.

8. Anticuerpo anti-p30 que inhibe la unión de un polipéptido p30 expresado en la 35 superficie celular a un MEVH o un RLTβ expresado en la superficie celular para su utilización en el tratamiento de la inflamación o de un trastorno inflamatorio.

9. Anticuerpo anti-p30 según la reivindicación 8, en el que el trastorno inflamatorio es la artritis, la psoriasis o la enfermedad inflamatoria del intestino. 40