Procedimiento de preparación de ésteres de activados.

Procedimiento de preparación de un éster activado de fórmula (I)**Fórmula**

en la que R representa un grupo alquilo(C1-C6),

lineal o ramificado, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo y Alk representa un grupo alquileno(C1-C6), lineal o ramificado,

que consiste en hacer reaccionar la sal de diciclohexilamina P1**Fórmula**

y carbonato de disuccinimidilo (DSC) en un disolvente en el que la sal diciclohexilamina de la N-hidroxisuccinimida P2**Fórmula**

precipita, en el que dicho disolvente es una cetona.

Procedimiento de preparación de ésteres de activados La presente invención se refiere a la preparación de ésteres activados de fórmula (I) :

en la que R representa un grupo alquilo (C1-C6) , arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo y Alk representa un grupo alquileno (C1-C6) . Estos ésteres activados se pueden utilizar en la preparación de conjugados, es decir, de anticuerpos a los que se unen por enlace covalente de los compuestos químicos biológicamente activos tales como los compuestos citotóxicos. Se encontrarán más detalles sobre la química de los conjugados, por ejemplo en Birch y Lennox, Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Cap. 4, Wiley-Liss, Nueva York, N.Y. (1995) .

[Técnica anterior]

El documento WO 2004/016801 describe ésteres activados que comprenden un resto nitro-succinimida. Las preparaciones de estos compuestos descritos en las figuras 1 a 6 se basan en reacciones diferentes de la contemplada en la presente invención.

J. Med. Chem. 2006, 49 (14) , 4392-4408 describe la preparación de ésteres activados, particularmente el

N-succinimidil-[4-metil-4- (metilditio) ]pentanoato sobre el esquema, por reacciones diferentes de la contemplada en la presente invención.

Langmuir 2000, 16 (1) , 81-86 describe sobre el esquema 1 la preparación del succinimidil-3- (2-piridilditio) butirato (SPDB) por acoplamiento del ácido correspondiente con la N-hidroxisuccinimida.

Los documentos de patente US 6407263, US 5872261, US 5892057 y US 5942628 describen ésteres activados y su 20 método de preparación.

Can. J. Chem. 1982, 60, 976 describe la preparación de la sal de diciclohexilamina de la N-hidroxisuccinimida (P2) por reacción entre la diciclohexilamina y la N-hidroxisuccinimida en acetona. Este compuesto tiene N° CAS 8291172-6.

Can. J. Chem. 1986, 64 (11) , 2097-2102; J . Chem. Soc., Perkin Trans. 1 1985, 4, 765-8; Bull. Soc. Chem. Jpn 1986,

59 (8) , 2505-8; Coll. Czech. Chem. Comm. 1985, 50 (12) , 2925-2936 describen la preparación de ésteres succinimida a partir de sales de diciclohexilamina pero sin utilizar carbonato de disuccinimidilo.

Tetrahedron Letters 1979, 49, 4745-4746 describe el DSC y su interés en síntesis (véase el esquema 2) .

Biochem. J. 1978, 173, 723-737 describe la preparación de ésteres activados en presencia de N-hidroxisuccinimida y de diciclohexilcarbodiimida.

JACS 2003, 125 (30) , 8994-8995 recoge los antecedentes de la técnica.

[Descripción breve de la invención]

La invención se refiere a un procedimiento de preparación de un éster activado de fórmula (I) :

en la que R representa un grupo alquilo (C1-C6) , lineal o ramificado, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo y 35 Alk representa un grupo alquileno (C1-C6) , lineal o ramificado, que consiste en hacer reaccionar la sal de diciclohexilamina P1:

y carbonato de disuccinimidilo (DSC) en un disolvente en el que la sal diciclohexilamina de la N-hidroxisuccinimida P2

precipita. La invención también se refiere a los productos de fórmula P1:

más particularmente a los de fórmula:

[Descripción de la invención]

Definiciones ! grupo alquilo: un grupo hidrocarbonado alifático saturado, lineal o ramificado, obtenido quitando un átomo de hidrógeno de un alcano. Se pueden citar principalmente los grupos siguientes: metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, 2-metilbutilo, 2-metilpentilo, 1-metilpentilo;

! grupo alquileno: un grupo divalente obtenido quitando dos átomos de hidrógeno de un alcano. Se pueden citar principalmente los grupos siguientes: metileno (-CH2-) , etileno (-CH2CH2-) , n-propileno (-CH2CH2CH2-) , butileno (-CH2CH2CH2CH2-) ;

! grupo cicloalquilo: un grupo alquilo acíclico que tiene de 3 a 10 átomos de carbono introducidos en la estructura cíclica. Se pueden citar principalmente los grupos siguientes: ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo;

! grupo arilo: un grupo aromático de 6 a 10 átomos de carbono. Se pueden citar principalmente los grupos 20 siguientes: fenilo, naftilo, indenilo, fluorenilo;

! grupo heteroarilo: un grupo aromático de 5 a 10 eslabones que comprende como átomos que forman el ciclo, uno o varios heteroátomos elegidos entre O, S o N;

! grupo heterocicloalquilo: un grupo cicloalquilo tal como se ha definido anteriormente que comprende además como átomo (s) que forman el ciclo, uno o varios heteroátomos elegidos entre N, O o S.

La preparación se basa en la reacción entre la sal de diciclohexilamina P1 y el carbonato de disuccinimidilo (DSC) en un disolvente en el que la sal de diciclohexilamina de la N-hidroxisuccinimida P2 precipita (Esquema I) .

O O O

O H

O H

O

disolvente

+

N

ALK

S O

ALK O

S R S

+

O

O

- CO 2

R S

O O

OO

H

P1

H

+

N

O O

+

P2

Esquema 1

R representa un grupo:

! alquilo (C1-C6) : por ejemplo un grupo metilo, etilo, propilo, butilo o pentilo, opcionalmente ramificado;

! cicloalquilo (C3-C7) : por ejemplo el grupo ciclopropilo;

! arilo: por ejemplo el grupo fenilo;

! heteroarilo: por ejemplo el grupo 2-piridinilo ( ) ;

! heterocicloalquilo: por ejemplo el grupo piperidinilo.

Alk representa un grupo alquileno (C1-C6) , por ejemplo un grupo propileno, butileno o pentileno, opcionalmente ramificado. Se trata más particularmente del grupo (CH2) n, designando n un número entero que va de 1 a 6.

La función de la diciclohexilamina es promover la reacción e insolubilizar la N-hidroxil-succinimida que se libera. Esta 10 reacción presenta las siguientes ventajas:

! facilidad de realización: puesta en contacto sencilla, no hay calentamiento, liberación lenta y controlada de CO2;

! estando el compuesto P1 en forma de carboxilato, no es necesario añadir una base adicional para activar la reacción;

! el compuesto P2 que se libera solo es poco soluble en el disolvente empleado y precipita. La mayor parte de P2 por lo tanto puede fácilmente ser eliminada por una simple separación mecánica, por ejemplo una filtración;

! la reacción permite obtener fácilmente el éster activado con un buen rendimiento y una buena pureza.

P2 se prepara por neutralización del ácido correspondiente con la diciclohexilamina. El DSC es un producto comercial.

El disolvente es una cetona que presenta menos problemas toxicológicos que los disolventes habitualmente utilizados para este tipo de reacción (diclorometano o dimetilformamida) . La cetona puede ser por ejemplo acetona o metil-isobutil-cetona (MIBK) . Se prefiere MIBK porque es poco miscible en agua (1, 55% p/p a 20°C) , permite un lavado acuoso del producto, facilitando así la eliminación de P2 residual. Permite igualmente eliminar el agua residual por destilación azeotrópica. Por último, la MIBK es un buen disolvente del éster activado pero no de los compuestos P2, P1 y de el DSC, lo que permite una reacción lenta y moderada entre P1 y el DSC: así, los reactivos pueden mezclarse inicialmente en totalidad sin que ello plantee problemas en términos de seguridad (reacción rápida con liberación incontrolada de CO2) .

La reacción se conduce a temperatura ambiente (aproximadamente 20°C) . P2 puede precipitar espontáneamente en algunos disolventes. Con el fin de favorecer la precipitación de P2, se puede, después de haber hecho reaccionar P1

y DSC, enfriar la mezcla de reacción (por ejemplo a una temperatura próxima a 0°C) .

Esta reacción permite particularmente preparar los ésteres activados siguientes: N-succinimidil-3- (2-piridilditio) propionato (SPDP) , N-succinimidil-3- (2-piridilditio) -butirato (SPDB) o N-succinimidil-[4-metil-4- (metilditio) ]pentanoato a partir de las sales de ácido correspondiente, a saber respectivamente:

[Ejemplos] Ejemplo 1: preparación de N-succinimidil-[4-metil-4- (metilditio) ]pentanoato La reacción es la siguiente:

Una suspensión de la sal de diciclohexilamina del ácido 4-metil-4- (metilditio) pentanoico (23 g) y de DSC (18, 2 g, 1, 1 eq.) en 161 ml de MIBK se agita a aproximadamente 20°C durante 5 h. Entones la suspensión se enfría a aproximadamente 0°C, se agita 1 h a esta temperatura, después se filtra.

El sólido se lava con 2x23 ml de MIBK. Las fases orgánicas se reúnen, se lavan con 2x58 ml de una disolución acuosa de HCl 6N, después con 92 ml de agua desmineralizada. La fase orgánica se concentra después a sequedad a vacío. El sólido resultante... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de preparación de un éster activado de fórmula (I)

en la que R representa un grupo alquilo (C1-C6) , lineal o ramificado, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterocicloalquilo y Alk representa un grupo alquileno (C1-C6) , lineal o ramificado,

que consiste en hacer reaccionar la sal de diciclohexilamina P1

y carbonato de disuccinimidilo (DSC) en un disolvente en el que la sal diciclohexilamina de la N-hidroxisuccinimida P2

precipita, en el que dicho disolvente es una cetona.

2. Procedimiento según la reivindicación 1 en el que R representa un grupo metilo, etilo, propilo, butilo o pentilo, opcionalmente ramificado o el grupo 2-piridinilo.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2 en el que Alk representa un grupo propileno, butileno o pentileno, 15 opcionalmente ramificado.

4. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2 en el que Alk representa el grupo (CH2) n, designando n un número entero que va de 1 a 6.

5. Procedimiento según la reivindicación 1 en el que la cetona es la MIBK.

6. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que después de haber hecho reaccionar 20 P1 y DSC, se enfría la mezcla de reacción para favorecer la precipitación de P2.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6 en el que P2 se elimina mediante una separación mecánica.

8. Procedimiento según la reivindicación 7 en el que la separación mecánica es una filtración.

9. Producto de fórmula P1:

en la que R y Alk son tal como se definen en una de las reivindicaciones 1 a 4.

10. Producto según la reivindicación 9 de fórmula: