Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas.

Un compuesto B:**Fórmula**

y sales y solvatos del mismo.

Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de las mismas

La presente invención se refiere a pirrolobenzodiazepinas (PBD), en particular a pirrolobenzodiazepinas que tienen un grupo protector N1 lábil, en forma de un conector a un agente de unión a célula.

Antecedentes a la invención

Pirrolobenzodiazepinas

Algunas pirrolobenzodiazepinas (PBD) tienen la capacidad de reconocer y unirse a secuencias específicas de ADN; la secuencia preferida es PuGPu. El primer antibiótico antitumoral de PBD, la antramicina, se descubrió en 1965 (Leimgruber y col., J. Am. Chem. Soc., 87, 5793-5795 (1965); Leimgrubery col., J. Am. Chem. Soc., 87, 5791-5793 (1965)). Desde entonces, se ha informado de varias PBD que se producen naturalmente, y se han desarrollado más de 1 rutas de síntesis para varios análogos (Thurston y col., Chem. Rev. 1994, 433-465 (1994); Antonow, D. y Thurston, D.E., Chem. Rev. 211 111 (4), 2815-2864). Miembros de la familia incluyen abeimicina (Hochlowski y col., J. Antibiotics, 4, 145-148 (1987)), chicamicina (Konishi y col., J. Antibiotics, 37, 2-26 (1984)), DC-81 (patente japonesa 58-18 487; Thurston y col., Chem. Brit., 26, 767-772 (199); Bose y col., Tetrahedron, 48, 751 - 758 (1992)), mazetramicina (Kuminoto y col., J. Antibiotics, 33, 665-667 (198)), neotramicinas A y B (Takeuchi y col., J. Antibiotics, 29, 93-96 (1976)), porotramicina (Tsunakawa y col., J. Antibiotics, 41, 1366-1373 (1988)), protracarcina (Shimizu y col., J. Antibiotics, 29, 2492-253 (1982); Langley y Thurston, J. Org. Chem., 52, 91-97 (1987)), sibanomicina (DC-12) (Hara y col., J. Antibiotics, 41, 72-74 (1988); Itoh y col., J. Antibiotics, 41, 1281- 1284 (1988)), sibiromicina (Leber y col., J. Am. Chem. Soc., 11, 2992-2993 (1988)) y tomamicina (Arima y col., J. Antibiotics, 25, 437-444 (1972)). Las PBD son de la estructura general:

Se diferencian en el número, tipo y posición de sustituyentes, en tanto sus anillos A aromáticos como anillos C de pirrólo, y en el grado de saturación del anillo C. En el anillo B hay tanto una imina (N=C), una carbinolamina (NH- CH(OH)) como un éter metílico de carbinolamina (NH-CH(OMe)) en la posición N1-C11 que es el centro electrófilo responsable de alquilar ADN. Todos los productos naturales conocidos tienen una configuración (S) en la posición C11 quiral que les proporciona un giro hacia la derecha cuando se miran desde el anillo C hacia el anillo A. Esto les da la forma tridimensional apropiada para isohelicidad con el surco menor del ADN de forma B, conduciendo a un encaje ajustado en el sitio de unión (Kohn, en Antibiotics III. Springer-Verlag, Nueva York, pág. 3-11 (1975); Hurley y Needham-VanDevanter, Acc. Chem. Res., 19, 23-237 (1986)). Su capacidad para formar un aducto en el surco menor les permite interferir con el procesamiento de ADN, de ahí su uso como agentes antitumorales.

Un compuesto de pirrolobenzodiazepina particularmente ventajoso se describe por Gregson y col. (Chem. Commun. 1999, 797-798) como el compuesto 1, y por Gregson y col. (J. Med. Chem. 21, 44, 1161-1174) como el compuesto 4a. Este compuesto, también conocido como SG2, se muestra a continuación:

El documento WO 27/8593 describe la preparación de compuestos de PBD diméricos que tienen grupos conectores para la conexión a un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo. El conector está presente en el puente que une las unidades de PBD monoméricas del dímero.

Los presentes inventores han descrito compuestos de PBD diméricos que tienen grupos conectores para la conexión a un agente de unión a célula, tal como un anticuerpo, en el documento WO 211/13598. El conector en estos compuestos está unido a una de las posiciones N1 disponibles, y se escinden generalmente por la acción de una enzima sobre el grupo conector.

Conjugados de anticuerpo-fármaco

Se ha establecido la terapia con anticuerpos para el tratamiento dirigido de pacientes con cáncer, trastornos inmunológicos y angiogénicos (Cárter, P. (26) Nature Reviews Immunology 6:343-357). El uso de conjugados de anticuerpo-fármaco (ADC), es decir, inmunoconjugados, para la administración local de agentes citotóxicos o citostáticos, es decir, fármacos para destruir o inhibir células tumorales en el tratamiento de cáncer, se dirige a la administración de los restos de fármaco a tumores, y la acumulación intracelular en su interior, mientras que la administración sistémica de estos agentes de fármaco no conjugados puede producir niveles inaceptables de toxicidad a células normales (Xie y col. (26) Expert. Opin. Biol. Ther. 6(3):281-291; Kovtun y col. (26) Cáncer Res. 66(6):3214-3121; Lawycol. (26) Cáncer Res. 66(4):2328-2337; Wu y col. (25) Nature Biotech. 23(9):1137- 1145; Lambed J. (25) Current Opin. in Pharmacol. 5:543-549; Hamann P. (25) Expert Opin. Ther. Patents 15(9):187-113; Payne, G. (23) Cáncer Cell 3:27-212; Trail y col. (23) Cáncer Immunol. Immunother. 52:328- 337; Syrigos y Epenetos (1999) Anticancer Research 19:65-614).

Así se busca máxima eficacia con la mínima toxicidad. Los esfuerzos para diseñar y refinar ADC se han basado en la selectividad de anticuerpos monoclonales (mAb), además del mecanismo de acción del fármaco, enlace del fármaco, relación de fármaco/anticuerpo (carga) y propiedades de liberación de fármaco (Junutula y col., 28b Nature Biotech., 26(8):925-932; Doman y col. (29) Blood 114(13):2721-2729; documentos US 7521541; US 7723485; W29/52249; McDonagh (26) Protein Eng. Design & Sel. 19(7): 299-37; Doronina y col. (26) Bioconj. Chem. 17:114-124; Erickson y col. (26) Cáncer Res. 66(8):1-8; Sanderson y col. (25) Clin. Cáncer Res. 11:843-852; Jeffrey y col. (25) J. Med. Chem. 48:1344-1358; Hamblett y col. (24) Clin. Cáncer Res. 1:763- 77). Los restos de fármaco pueden conferir sus efectos citotóxicos y citostáticos por mecanismos que incluyen unión a tubulina, unión a ADN, inhibición de proteasoma y/o topoisomerasa. Algunos fármacos citotóxicos tienden a ser inactivos o menos activos cuando se conjugan con grandes anticuerpos o ligandos de receptores de proteína.

Los presentes inventores han desarrollado dímeros de PBD particulares con grupos de enlace para la formación de conjugados de PBD con agentes de unión a célula, y en particular conjugados de PBD de anticuerpo.

Resumen de la invención

En un primer aspecto, la presente invención proporciona el compuesto B:

ó

y sales y solvatos del mismo.

El compuesto B se diferencia de los dímeros de PBD previamente desvelados con un conector de fármaco que tiene un doble enlace en endo C2-3 por tener un sustituyente C2 menos lipófilo más pequeño, por ejemplo 4F-fenilo, propileno. Como tales, es menos probable que los conjugados del compuesto B (véase más adelante) se agreguen una vez sintetizados. Tal agregación de conjugados puede medirse por cromatografía de exclusión por tamaño (SEC).

El compuesto B tiene dos centros sp2 en cada anillo C, que pueden permitir unión más fuerte en el surco menor del ADN, que para compuestos con solo un centro sp2 en cada anillo C.

Un segundo aspecto de la presente invención proporciona un conjugado de fórmula ConjB:

en la que CBA representa una agente de unión a célula. El enlace al resto mostrado es mediante un S libre (tiol activo) sobre el agente de unión a célula.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona un dímero de PBD con un conector conectado mediante la posición N1 sobre uno de los restos de PBD adecuados para formar un dímero de PBD conjugado mediante el conector a un agente de unión a célula.

La presente invención es adecuada para su uso en proporcionar un compuesto de PBD a un sitio preferido en un sujeto. El conjugado permite la liberación de un compuesto de PBD activo que no retiene ninguna parte del conector. No hay ninguna punta presente que pudiera afectar la reactividad del compuesto de PBD. Así, ConjB liberaría el compuesto RelB:

ReB

Otro aspecto de la presente invención es el compuesto RelB, y sales y solvatos del mismo.

El enlace especificado entre el dímero de PBD y el agente de unión a célula, por ejemplo, anticuerpo, en la presente invención es preferentemente estable extracelularmente. Antes del transporte o administración en una célula, el conjugado de anticuerpo-fármaco (ADC) es preferentemente estable y sigue intacto, es decir, el anticuerpo sigue ligado al resto de fármaco. Los conectores son estables fuera de la célula diana y pueden escindirse a alguna tasa eficaz dentro de la célula. Un conector eficaz: (i) mantendrá las propiedades de unión específica del anticuerpo; (ii) permitirá la administración intracelular del conjugado o resto de fármaco; (iii) seguirá siendo estable e intacto,... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto B:

o

y sales y solvatos del mismo.

2. Un conjugado de fórmula ConjB:

en el que CBA representa un agente de unión a célula.

3. El conjugado según la reivindicación 2, en el que el agente de unión a célula es un anticuerpo o un fragmento activo del mismo.

4. El conjugado según la reivindicación 3, en el que el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo son un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo para un antígeno asociado a tumor.

5. El conjugado de la reivindicación 3, en el que el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo son un anticuerpo que se une a uno o más antígenos asociados a tumor o receptores de la superficie celular seleccionados de (1 )-(88): 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1

(1) BMPR1B;

(2) E16;

(3) STEAP1;

(4) 772P;

(5) MPF;

(6) Napi3b;

(7) Sema 5b;

(8) PSCA hlg;

(9) ETBR;

(1) MSG783;

(11) STEAP2;

(12) TrpM4;

(13) CRIPTO;

(14) CD21;

(15) CD79b;

(16) FcRH2;

(17) HER2;

(18) NCA;

(19) MDP;

(2) IL2R-alfa;

(21) Brevicano;

(22) EphB2R;

(23) ASLG659;

(24) PSCA;

(25) GEDA;

(26) BAFF-R;

(27) CD22;

(28) CD79a;

(29) CXCR5;

(3) HLA-DOB;

(31) P2X5;

(32) CD72;

(33) LY64;

(34) FcRH1;

(35) IRTA2;

(36) TENB2;

(37) PSMA - FOLH1;

(38) SST;

(38.1) SSTR2;

(38.2) SSTR5;

(38.3) SSTR1;

(38.4) SSTR3;

(38.5) SSTR4;

(39) ITGAV;

(4) ITGB6;

(41) CEACAM5;

(42) MET;

(43) MUC1;

(44) CA9;

(45) EGFRvIII;

(46) CD33;

(47) CD 19;

(48) IL2RA;

(49) AXL;

(5) CD3 - TNFRSF8;

(51) BCMA - TNFRSF17;

(52) Ag de CT - CTA;

(53) CD174 (Lewis Y) - FUT3;

(54) CLEC14A;

(55) GRP78 - HSPA5;

(56) CD7;

(57) Antígenos específicos de células madre;

(58) ASG-5;

(59) ENPP3;

(6) PRR4;

(61) GCC - GUCY2C;

(62) Liv-1 - SLC39A6;

(63) 5T4;

(64) CD56 - NCMA1;

(65) CanAg;

(66) FOLR1;

(67) GPNMB;

(68) TIM-1 - HAVCR1;

(69) RG-1/Mindina diana de tumor de la próstata - Mindina/RG-1;

(7) B7-H4 - VTCN1;

(71) PTK7;

(72) CD37;

(73) CD138 - SDC1;

(74) CD74;

(75) Claudinas - CL;

(76) EGFR;

(77) Her3;

(78) RON - MST1 R;

(79) EPHA2;

(8) CD2 - MS4A1;

(81) Tenascina C - TNC;

(82) FAP;

(83) DKK-1;

(84) CD52;

(85) CS1 - SLAMF7;

(86) Endoglina- ENG;

(87) Anexina A1 - ANXA1;

(88) V-CAM (CD16) - VCAM1.

6. El conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, en el que el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo es un anticuerpo manipulado por cisterna.

7. El conjugado según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, en el que la carga de fármaco (p) de fármacos (D) con respecto a anticuerpo (Ab) es un número entero de 1 a 8.

8. El conjugado según la reivindicación 7, en el que p es 1,2, 3 ó 4.

9. Una composición que comprende una mezcla de compuestos de conjugados de fármaco según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, en la que la carga de fármaco promedio por anticuerpo en la mezcla de compuestos de conjugados de anticuerpo-fármaco es aproximadamente 1 a aproximadamente 8.

1. El conjugado según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8 o la composición según la reivindicación 9, para su uso en terapia.

11. El conjugado según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8 o la composición según la reivindicación 9, para su uso en el tratamiento de una enfermedad proliferativa en un sujeto.

12. El conjugado para su uso según la reivindicación 11, en donde la enfermedad es cáncer.

13. Una composición farmacéutica que comprende el conjugado de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8 o la composición según la reivindicación 9 y un diluyente, un vehículo o un excipiente farmacéuticamente aceptables.

14. La composición farmacéutica de la reivindicación 13 que comprende además una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente quimioterapéutico.

15. Un procedimiento de preparación de un conjugado según una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, comprendiendo el procedimiento la etapa de hacer reaccionar un agente de unión a célula con el compuesto B como se define en la reivindicación 1.